中國藥科大學(xué) 藥物分析課件（第六版） 第十三章 生化藥物分析

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1、中國藥科大學(xué)藥物分析教研室第第1313章章 生物藥物分析概論生物藥物分析概論中國藥科大學(xué)藥物分析教研室本章主要內(nèi)容本章主要內(nèi)容生物藥物種類生物藥物種類與與特點(diǎn)特點(diǎn)生物藥物質(zhì)量生物藥物質(zhì)量檢驗(yàn)的檢驗(yàn)的基本程基本程序與方法序與方法生物藥物理化生物藥物理化測定法：測定法：HPLC法、酶法、電法、酶法、電泳法泳法中國藥科大學(xué)藥物分析教研室生化藥物生化藥物生物制品生物制品（生物技術(shù)藥物）（生物技術(shù)藥物）生物藥物生物藥物（biopharmaceuticals）：利用利用生物體、生物生物體、生物組織和器官制組織和器官制得的天然活性得的天然活性物質(zhì)及其類似物質(zhì)及其類似物物一、概述一、概述分類沒有嚴(yán)分類沒有嚴(yán)格

2、的界限格的界限 中國藥科大學(xué)藥物分析教研室動(dòng)植物及微生物提取、分離的天然生物活性物質(zhì)及半合成得到生命基本物質(zhì)及其衍生物等生化藥物生化藥物biochemical drugs 人纖維蛋白原凝血酶、胰蛋白酶肝素、玻璃酸 氨基酸、Pr類酶、輔酶類多糖類脂類核酸類中國藥科大學(xué)藥物分析教研室 應(yīng)用普通的或以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工應(yīng)用普通的或以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細(xì)胞及各程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細(xì)胞及各種動(dòng)物和人源的組織和液體等生物材料制備的藥品種動(dòng)物和人源的組織和液體等生物材料制備的藥品 自動(dòng)免疫制品自動(dòng)免疫制品 生物制品生物制品biologi

3、cal products 其他（血液制品、組織制品等）其他（血液制品、組織制品等）免疫血清免疫血清菌苗、疫苗、類毒素菌苗、疫苗、類毒素診斷制品診斷制品中國藥科大學(xué)藥物分析教研室 利用重組利用重組DNA等生等生物技術(shù)生產(chǎn)的藥物物技術(shù)生產(chǎn)的藥物基因工程藥物 biotechnology drugs發(fā)現(xiàn)并確定有治療作用的Pr分離或合成控制該P(yáng)r合成的基因?qū)⒃摶驅(qū)胧荏w細(xì)胞受體細(xì)胞表達(dá)該P(yáng)r分離純化中國藥科大學(xué)藥物分析教研室胰臟胰臟(A)n胰島素原胰島素原mRNAcDNA重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細(xì)菌轉(zhuǎn)化細(xì)菌mRNA反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶胰島素原基因胰島素原基因與質(zhì)與質(zhì)粒連粒連接接感染感染E.coli胰島素原胰島

4、素原重組胰島素原的合成中國藥科大學(xué)藥物分析教研室基因工程藥物主要類別基因工程藥物主要類別蛋白質(zhì)多肽類：蛋白質(zhì)多肽類：激素類及神經(jīng)遞質(zhì)類激素類及神經(jīng)遞質(zhì)類 細(xì)胞因子類細(xì)胞因子類 酶及凝血因子類酶及凝血因子類核酸類：核酸類：反義寡核苷酸反義寡核苷酸 等等人生長激素釋放抑制因子（Human Somatotin）干擾素（Human Interferons）鏈激酶（Streptokinase）中國藥科大學(xué)藥物分析教研室5.生化藥物和基因工程藥物特點(diǎn)1 1）共同特點(diǎn)：）共同特點(diǎn)：活性強(qiáng)，毒副作用小活性強(qiáng)，毒副作用小2 2）分子量大，結(jié)構(gòu)確證難）分子量大，結(jié)構(gòu)確證難3 3）全過程全過程的質(zhì)量控制：從原料、菌

5、種到生產(chǎn)設(shè)備、的質(zhì)量控制：從原料、菌種到生產(chǎn)設(shè)備、中間體、產(chǎn)品中間體、產(chǎn)品4 4）生物活性檢查）生物活性檢查5 5）安全性檢查：異常毒性檢查、過敏物質(zhì)檢查、）安全性檢查：異常毒性檢查、過敏物質(zhì)檢查、外源性外源性DNA殘留量、宿主菌蛋白殘留量等殘留量、宿主菌蛋白殘留量等 6 6）效價(jià)（含量）測定）效價(jià)（含量）測定中國藥科大學(xué)藥物分析教研室收錄于收錄于和和二、檢驗(yàn)的程序和方法二、檢驗(yàn)的程序和方法鑒別鑒別雜質(zhì)雜質(zhì)檢查檢查安全性安全性檢查檢查含量（效價(jià)）含量（效價(jià)）測定測定中國藥科大學(xué)藥物分析教研室1.1.鑒別鑒別1 1）理化鑒別法：）理化鑒別法：UV、肽圖肽圖等等反應(yīng)序列信息反應(yīng)序列信息RP-HPL

6、C法分析重組人胰高血糖素類多肽1（736）肽圖譜藥物分析雜志2005，25(1)24-26標(biāo)準(zhǔn)品樣品胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36)由30個(gè)氨基酸組成，結(jié)構(gòu)中含2Lys、1Arg、1Asp、3Glu中國藥科大學(xué)藥物分析教研室2 2）生化鑒別法：）生化鑒別法：免疫法免疫法、酶法、電泳法等、酶法、電泳法等3 3）生物鑒別法：動(dòng)物試驗(yàn)等）生物鑒別法：動(dòng)物試驗(yàn)等專屬性強(qiáng)，應(yīng)用廣泛專屬性強(qiáng)，應(yīng)用廣泛免疫雙擴(kuò)散法SDS-PAGEMarker Sample116.0k66.2k45.0k35.0k25.0k18.4k14.4k中國藥科大學(xué)藥物分析教研室2.雜質(zhì)檢查1 1）一般雜質(zhì)：氯化

7、物、重金屬、水分等）一般雜質(zhì)：氯化物、重金屬、水分等2 2）特殊雜質(zhì)：有關(guān)物質(zhì)等）特殊雜質(zhì)：有關(guān)物質(zhì)等 高效凝膠過濾色譜法(High Performance Gel Filter，HPGFC）、RP-HPLCOOOHOOHCH2OOOHOOHCH2OOOHOOHCH2OOOHOOHCH2OOHOOHCH2OOCH3OHOHOOOCH2OHHOOOOHOHOOH2COOOOOHHOH2COOH2COHHOOCH2OOOH2COOHHOOOOOHOOHCH2OOCH2OHHOOOOOCH2OHHOOOOCH2OHHOOOOH2COHHOOOOCH2OHHOOOOOOHOHOH2COOH2COHOC

8、H2OHHOOOH2COCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHHCOHCH2CH2CH2HCOH 萄聚糖凝膠立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)圖中國藥科大學(xué)藥物分析教研室標(biāo)準(zhǔn)蛋白色譜圖標(biāo)準(zhǔn)蛋白色譜圖時(shí)間(min)04812165432 1.右旋糖酐藍(lán)右旋糖酐藍(lán) 2.醛縮酶醛縮酶 3.血清白蛋白血清白蛋白 4.碳酸酐酶碳酸酐酶 5.抑蛋白抑蛋白酶肽酶肽 6.酪氨酸酪氨酸中國藥科大學(xué)藥物分析教研室 重組人腫瘤壞死因子相關(guān)調(diào)亡誘導(dǎo)配體重組人腫瘤壞死因子相關(guān)調(diào)亡誘導(dǎo)配體（rhTRAILrhTRAIL）質(zhì)控方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研

9、究）質(zhì)控方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究 藥物分析雜志藥物分析雜志20052005，2525（3 3）253-257253-257 SynmetrySynmetry 300 C18 300 C18柱（柱（3.93.9150150mmmm）中國藥科大學(xué)藥物分析教研室3.3.安全性檢查安全性檢查1 1）熱原檢查）熱原檢查 家兔法、鱟試劑法家兔法、鱟試劑法2 2）降壓物質(zhì)檢查）降壓物質(zhì)檢查3 3）過敏試驗(yàn)）過敏試驗(yàn)4 4）異常毒性試驗(yàn)）異常毒性試驗(yàn) 豚鼠、大鼠存活試驗(yàn)豚鼠、大鼠存活試驗(yàn)5 5）無菌試驗(yàn)）無菌試驗(yàn)6 6）宿主細(xì)胞蛋白殘留、）宿主細(xì)胞蛋白殘留、DNADNA殘留殘留 ELISA法法中國藥科大學(xué)藥物分析

10、教研室1 1）理化分析法：）理化分析法：重量法、滴定法、重量法、滴定法、電化學(xué)法、光譜法電化學(xué)法、光譜法 色譜法（色譜法（HPLC法）法）4.4.含量（效價(jià)）測定含量（效價(jià)）測定例：蛋白質(zhì)含量測定（ChP2005三部）凱氏定氮法 Lowry法 雙縮脲法中國藥科大學(xué)藥物分析教研室2 2）生化分析法）生化分析法v 酶法：酶法：v免疫分析法免疫分析法酶活力測定法 以酶為分析對象進(jìn)行分析酶分析法 以酶為分析工具或分析試劑 的分析方法 中國藥科大學(xué)藥物分析教研室3 3）生物檢定法）生物檢定法 藥物對生物體或離體器官所起的生物活性藥物對生物體或離體器官所起的生物活性 測定效價(jià)時(shí)采用參考品，體內(nèi)、體外方法測

11、定活性，計(jì)算效價(jià)IU 同時(shí)測定蛋白含量，計(jì)算特異比（比活性，IU/mg）中國藥科大學(xué)藥物分析教研室例：凍干基因工程例：凍干基因工程1b1b干擾素制造及檢定規(guī)程干擾素制造及檢定規(guī)程 本品系用從健康人白細(xì)胞中獲得的本品系用從健康人白細(xì)胞中獲得的1b干擾素基因重組質(zhì)粒，傳染干擾素基因重組質(zhì)粒，傳染大腸桿菌，使之高效表達(dá)人大腸桿菌，使之高效表達(dá)人1b干擾素，經(jīng)高度純化后凍干制成。用于干擾素，經(jīng)高度純化后凍干制成。用于治療慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛細(xì)胞白血病等疾病。治療慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛細(xì)胞白血病等疾病。主要包括以下內(nèi)容：1 菌種 2 發(fā)酵 3 收菌 4 菌體裂解與粗制干擾素制備5 濃縮與純化 6 稀釋、除菌過濾 7 半成品檢定8 除菌半成品檢定 9 成品檢定 10規(guī)格 11保存與效期12 凍干基因工程1b干擾素使用說明書中國藥科大學(xué)藥物分析教研室檢查：檢查：純度：1電泳純度 2高效液相色譜純度pH值水分鑒別：鑒別：分子量測定肽圖測定等電聚集紫外光譜掃描外觀半成品和成品的檢驗(yàn)項(xiàng)目包括：中國藥科大學(xué)藥物分析教研室安全性檢查：安全性檢查：殘余外源性DNA含量殘余IgG含量殘余工程菌蛋白含量抗生素活性無菌試驗(yàn)熱原質(zhì)試驗(yàn)異常毒性含量：含量：效價(jià)測定：細(xì)胞病變抑制法蛋白含量比活性