甘肅省武威市高中生物 第5章 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù) 5.1 DNA的粗提取與鑒定課件1 新人教版選修1 .ppt

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1、DNA的粗提取與鑒定,通過(guò)本節(jié)課的學(xué)習(xí)我們要 知道DNA提取原理 據(jù)原理設(shè)計(jì)DNA提取方法 能對(duì)DNA進(jìn)行鑒定 掌握本實(shí)驗(yàn)的基本操作方法,DNA粗提取與鑒定,基礎(chǔ)知識(shí),提取DNA的方法,1、提取生物大分子的基本思路,選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子,2、生物大分子,主要指蛋白質(zhì)、酶和核酸,3、提取DNA的基本思路,利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異,提取DNA,去除其他成分,DNA提取原理,資料一:1 . DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同 蛋白質(zhì)在0.14mol/L中的溶解度大,在高鹽濃度下溶解度小,2.DNA不溶于酒精,細(xì)胞中某

2、些蛋白質(zhì)則溶于酒精。 資料二: 洗滌劑瓦解細(xì)胞膜。 動(dòng)物細(xì)胞吸水會(huì)脹破。,資料三 1.酶的專一性——蛋白酶水解蛋白質(zhì)而不會(huì)對(duì)DNA產(chǎn)生影響 。 2.蛋白質(zhì)、DNA熱穩(wěn)定性不同。溫度值為60~80℃,因?yàn)樵摐囟戎档鞍踪|(zhì)變性沉淀,而DNA不會(huì)變性。,資料四:DNA的鑒定原理,當(dāng)鑒定提取出的物質(zhì)是否是DNA時(shí),需要使用什么指示劑進(jìn)行鑒定?,在沸水浴條件下,DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色。,注意:二苯胺要現(xiàn)配現(xiàn)用,使用時(shí)取4ml二苯胺加一滴已乙醛搖勻再倒入待測(cè)樣液,DNA的鑒定操作步驟,A、B試管中先分別加入物質(zhì)的量的濃度為2mol/L 的NaCl溶液5ml。 其中A試管加入DNA絲狀物,B不加絲狀物。 各加

3、入二苯胺4ml 試劑。 沸水中加熱5min。 待試管冷卻后,比較兩只試管中溶液顏色的變化。,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),據(jù)資料二思考:如何使DNA從細(xì)胞里釋放出來(lái)得到含有DNA的濾液? 利用什么原理可以使動(dòng)物細(xì)胞或植物細(xì)胞破裂?,植物細(xì)胞可以加入一定量的食鹽和洗滌 劑。 動(dòng)物細(xì)胞吸水會(huì)脹破。這樣能得到含 有DNA的濾液,食鹽和洗滌劑的用途分別是什么?,食鹽溶解DNA,洗滌劑溶解細(xì)胞膜,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),根據(jù)資料提供的DNA理化性質(zhì),你能思考提取DNA的基本方法嗎?,例:根據(jù)蛋白質(zhì)、DNA熱穩(wěn)定性不同。溫度值為60~80℃,因?yàn)樵摐囟戎档鞍踪|(zhì)變性沉淀,而DNA不會(huì)變性,方案一: 將濾液放在 的恒溫水浴箱中保溫10~

4、15min,注意嚴(yán)格控制溫度范圍,使 沉淀而 分子還未變性,可以將DNA與蛋白質(zhì)分離。,60~67℃,蛋白質(zhì),DNA,根據(jù)資料一思考,1.DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度有何特點(diǎn)?要使DNA溶解,需要使用什么濃度?要使DNA析出,又需要使用什么濃度?,在0.14mol/L時(shí)溶解度最小;較高濃度可使DNA溶解;0.14mol/L可使DNA析出。 在溶解細(xì)胞中的DNA時(shí),通??蛇x用2mol/LNaCl溶液;將DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中緩慢注入蒸餾水,以稀釋NaCl溶液。,如何利用這一性質(zhì)設(shè)計(jì)提取方案,方案二:通過(guò)控制 NaCl 的濃度去除蛋白質(zhì) 30mL濾

5、液+2mol/NaCl40mL→同方向攪拌,DNA溶解→加入蒸餾水0.14mol/NaCl→DNA析出→過(guò)濾得到過(guò)濾物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液,2采用DNA不溶于酒精的原理,可以達(dá)到什么目的?,將DNA和蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。,方案三: 直接向?yàn)V液中加入 ,反應(yīng)10~15min, 中的 能夠分解蛋白質(zhì)。 ?此方案利用了酶的什么特性?,嫩肉粉(木瓜蛋白酶),嫩肉粉,蛋白酶,專一性,實(shí)驗(yàn)拓展 你還能作些什么探究?,交流,1.動(dòng)物組織和植物在提取方法上有什么不同? 為什么? 2、用同樣的方法提取時(shí),哪種材料較好? 3、用同種材料同樣方法時(shí)洗滌劑與NaCl比例不同,有沒(méi)有影響? 4.用玻璃燒杯和塑料燒杯哪種效果好? 5、你有什么疑惑嗎?或者有更好的建議??,結(jié)果分析與評(píng)價(jià),1、你提取出了白色絲狀物嗎?用二苯胺鑒定的結(jié)果如何? 2如果鑒定結(jié)果不出現(xiàn)藍(lán)色,討論可能是什么原因. 3、你能分析出粗提取的DNA可能含有哪些雜質(zhì)嗎? 4.哪些因素會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果?,從核DNA數(shù)目來(lái)看,豬38條,雞78條,哺乳動(dòng)物血0條,獼猴桃58條,洋蔥16條,香蕉 33條,菠菜12條,大腸桿菌1條。你能分析你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎?,

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