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1、
抗 Tim-3 單抗聯(lián)合化療藥物對(duì)同種異體造血干細(xì)胞移植后淋巴瘤復(fù)發(fā)和黑色素瘤的治療研究
第一部分抗 Tim-3 單抗體聯(lián)合環(huán)磷酰胺對(duì)同種異體骨髓造血干細(xì)胞移植后淋巴瘤復(fù)發(fā)的治療研究目的 : 建立小鼠同種異體骨髓造血干細(xì)胞移植后淋巴瘤復(fù)發(fā)模型 , 探討抗 Tim-3 單抗體聯(lián)合環(huán)磷酰胺對(duì)此模型的治療效果及其可能的機(jī)制 , 為臨床上治療移植后白血病復(fù)發(fā)開創(chuàng)了新的方法。方法 :1. 以雌性 C57BL/6 小鼠為供鼠、接受 8Gy全身照射的 BALB/c 小鼠作為受鼠進(jìn)行同種異體骨髓移植 , 移植物中包
括 1X107骨髓細(xì)胞 ,5X106 脾細(xì)胞和 1X1
2、06A20細(xì)胞 , 建立小鼠骨髓造血干細(xì)胞移植后淋巴瘤復(fù)發(fā)模型。 2. 根據(jù)小鼠的臨床表現(xiàn)、 外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)和外周血圖片判斷小鼠骨髓造血干細(xì)胞移植后淋巴瘤復(fù)發(fā)模
型是否成功。3. 根據(jù)治療方案的不同 , 受鼠隨機(jī)分為 4 組: 同型對(duì)照組 ,
抗 Tim-3 單抗組 , 環(huán)磷酰胺組與聯(lián)合環(huán)磷酰胺和抗 Tim-3 單抗組。觀察各組小鼠的生存時(shí)間 , 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠外周血和脾臟淋巴細(xì)胞
中 CD4+ T 細(xì)胞、 CD8+ T 細(xì)胞、 CD3+CD4+CD25+FoxP3+ Treg細(xì)胞和
CD3+CD8+Granzyme B 細(xì)T胞的比例。結(jié)果 : 小
3、鼠骨髓造血干細(xì)胞移植
后淋巴瘤復(fù)發(fā)模型建立成功。 抗 Tim-3 單抗和環(huán)磷酰胺聯(lián)合使用顯著
提高移植后淋巴瘤復(fù)發(fā)小鼠生存期 ( 平均提高 7.2 天,P<0.05) 。與
同型對(duì)照組相比
, 抗
Tim-3
單抗組升高了受鼠外周血和脾臟
CD4+T細(xì)
胞的比例
( 外周血中升高了
10.1%,
脾臟中升高了
2.2%,P<0.05),
環(huán)磷酰胺組能使受鼠脾臟 CD4+T細(xì)胞的比例顯著下降 ( 下降了
4、
19.1%,P<0.01) 。與同型對(duì)照相比 , 抗 Tim-3 單抗和環(huán)磷酰胺聯(lián)合
用藥顯著降低了骨髓移植后免疫抑制性 Treg 細(xì)胞的比例 ( 外周血中
降低了 1.55%, 脾臟中降低了 1.86%,P<0.01), 提高骨髓移植后
CD8+T淋巴細(xì)胞中顆粒酶 B+的細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞的比例 ( 外周血中
升高了 6.84%, 脾臟中升高了 5.47%,P<0.001), 恢復(fù) CD4/CD8T細(xì)
胞的比值。結(jié)論 :CD4+T細(xì)胞、 CD8+T細(xì)胞和 Treg 細(xì)胞以及 CTL在移
植
5、后淋巴瘤復(fù)發(fā)中起重要作用 , 聯(lián)合抗 Tim-3 單抗和環(huán)磷酰胺治療同
種異體骨髓造血干細(xì)胞移植后淋巴瘤復(fù)發(fā)有效。 第二部分抗 Tim-3 單
抗聯(lián)合曲美替尼對(duì)黑色素瘤的治療研究目的 : 探討抗 Tiim-3 單抗體
聯(lián)合曲美替尼對(duì)此模型的治療效果及其可能的機(jī)制 , 為臨床上治療黑
色素瘤提供新的思路。 方法 : 建立小鼠黑色素瘤皮下移植瘤模型 , 根據(jù)
治療方案的不同 , 小鼠隨機(jī)分為 4 組: 對(duì)照組 , 抗 Tim-3 單抗組 , 曲美替
尼組與聯(lián)合曲美替尼和抗 Tim-3 單抗組。比較各組小鼠腫瘤體積的大
小,
6、繪制生長(zhǎng)曲線 , 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組小鼠腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中 CD4+T 細(xì)胞和 CD8+T 細(xì)胞的比例以及其中 Tim-3+細(xì)胞的比例。免疫組化分析各組小鼠腫瘤 Ki67 和 Caspase-9 的陽(yáng)性率差異。 CCK-8法檢測(cè)在體外實(shí)驗(yàn)中各組對(duì) B16F10細(xì)胞株增殖的影響。 結(jié)果 : 與對(duì)照組
相比 , 曲美替尼能明顯抑制 B16F10細(xì)胞的生長(zhǎng) , 最高的抑制率發(fā)生在
4h, 曲美替尼組與聯(lián)合曲美替尼和抗 Tim-3 單抗組的抑制率分別為
22.3 0.83%,23.0 1.11%,P<0.01 。與對(duì)照相比曲美替尼組和聯(lián)
合曲美替尼和抗 T
7、im-3 單抗組 ,Caspase-3 陽(yáng)性率明顯升
高 ,P<0.01; 而 Ki67 陽(yáng)性率明顯降低 ,P<0.01 。聯(lián)合曲美替尼和
抗 Tim-3 組的小鼠在第 23 天的腫瘤大小的抑制率為 40.8
2.19%,P<0.01 腫瘤體積明顯得到抑制。與對(duì)照組相比 , 抗 Tim-3
單抗組腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞中 CD8+T細(xì)胞比例明顯升高 , 曲美替尼組腫
瘤浸潤(rùn) CD8+ T細(xì)胞中 Tim-3+CD8+ T 細(xì)胞的比例升高了 2 倍。結(jié)論 :
曲美替尼能通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)來發(fā)揮對(duì)
B16F10黑色素瘤的抗腫瘤能力。抗 Tim-3 單抗能明顯升高黑色素瘤
小鼠中 CD8+ T細(xì)胞從而增加抗腫瘤的免疫應(yīng)答。聯(lián)合曲美替尼和抗
Tim-3 單抗治療黑色素瘤有強(qiáng)大的抗腫瘤效果。
抗Tim-3單抗聯(lián)合化療藥物對(duì)同種異體造血干細(xì)胞移植后淋巴瘤復(fù)發(fā)和黑色素瘤的治療研究
