《常規(guī)病理學(xué)技術(shù)》PPT課件.ppt

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1、病理學(xué)技術(shù)概論及常規(guī)病理技術(shù)南 方 醫(yī) 科 大 學(xué) 病 理 學(xué) 系申 洪 課 程 簡 介n 內(nèi) 容 ： 著 重 介 紹 重 要 的 病 理 學(xué) 技 術(shù) 及 其 應(yīng) 用n 目 的 ： 提 供 病 理 學(xué) 研 究 所 需 的 基 本 技 術(shù) 知 識(shí) 體 系 和 病 理 學(xué) 研 究 的 一 些 基 本 思 路 ； 課 程 結(jié) 構(gòu) ：n 常 規(guī) 病 理 學(xué) 技 術(shù)n 細(xì) 胞 病 理 學(xué) 技 術(shù) 及 其 在 腫 瘤 病 理 學(xué) 中 的 應(yīng) 用n 電 鏡 技 術(shù) 及 其 在 病 理 學(xué) 中 的 應(yīng) 用n 定 量 病 理 學(xué) 技 術(shù) 及 其 在 病 理 學(xué) 中 的 應(yīng) 用 基 本 要 求n 基 本 概 念n

2、 基 本 原 理n 基 本 方 法 和 技 術(shù) 關(guān) 鍵n 聯(lián) 系 實(shí) 際 ， 思 考 應(yīng) 用 一 、 病 理 學(xué) 技 術(shù) 概 念 范 疇n 1 病 理 學(xué)n 2 病 理 學(xué) 技 術(shù)n 廣 義 概 念 狹 義 概 念 ： 圍 繞 病 理 形 態(tài) 學(xué) 病 理 形 態(tài) 學(xué) 技 術(shù) 類 型 尸 體 剖 驗(yàn) 技 術(shù) 常 規(guī) 組 織 病 理 學(xué) 技 術(shù) 常 規(guī) 細(xì) 胞 病 理 學(xué) 技 術(shù) 組 織 化 學(xué) 和 細(xì) 胞 化 學(xué) 技 術(shù) 免 疫 組 織 化 學(xué) 技 術(shù) 流 式 細(xì) 胞 技 術(shù) 超 微 結(jié) 構(gòu) 技 術(shù) 體 視 學(xué) 技 術(shù) ： 定 量 病 理 學(xué) 技 術(shù) 圖 像 分 析 技 術(shù) 分 子 病 理 學(xué)

3、技 術(shù) 激 光 共 聚 焦 顯 微 鏡 動(dòng) 物 實(shí) 驗(yàn) 技 術(shù) 三 維 重 建 技 術(shù) 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 技 術(shù) 一 、 尸 體 剖 驗(yàn) 技 術(shù) 目 的 意 義 ： 查 出 病 因 和 病 變 ， 明 確 診 斷 及 死 因 解 釋 臨 床 癥 狀 和 體 征 等 臨 床 現(xiàn) 象 及 時(shí) 發(fā) 現(xiàn) 和 確 診 新 疾 病 ， 特 別 是 傳 染 病 提 供 第 一 手 科 研 材 料 法 律 手 續(xù) ： 死 者 家 屬 簽 字 臨 床 醫(yī) 生 簽 字 單 位 簽 字 基 本 要 求 ： 研 究 生 ： 參 加 病 理 解 剖 本 科 生 ： 見 習(xí) 二 常 規(guī) 病 理 學(xué) 技 術(shù)n 組 織 取 材

4、 及 固 定 技 術(shù)n 包 埋n 石 蠟 切 片 技 術(shù)n 冰 凍 切 片 技 術(shù)n HE染 色 標(biāo) 本 的 來 源 與 收 集1、 臨 床 活 檢2、 尸 體 解 剖3、 實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物注 意 事 項(xiàng)1、 檢 查 申 請 單 的 姓 名 ， 標(biāo) 本 的 件 數(shù) 是 否 與之 相 符 合 。2、 標(biāo) 本 是 否 符 合 要 求 。 （ 一 ） 取 材 、 固 定標(biāo) 本 的 來 源 與 收 集 1、 臨 床 活 檢 2、 尸 體 解 剖 3、 實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物注 意 事 項(xiàng) 1、 檢 查 申 請 單 的 姓 名 及 標(biāo) 本 件 數(shù) 是 否 相 符 。 2、 標(biāo) 本 是 否 符 合 要 求 。 取

5、材 ： 切 取 病 變 組 織 或 擬 研 究 的 組 織 及 時(shí) ， 盡 可 能 新 鮮 迅 速 固 定 、 冷 藏 生 理 鹽 水 、 磷 酸 緩 沖 液 等 溶 液 刀 要 快 ， 不 要 擠 壓 組 織 注 意 研 究 目 的 培 養(yǎng) 定 量 對 比 觀 察 臨 床 診 斷 固 定n （ 一 ） 固 定 ： 用 化 學(xué) 試 劑 保 持 尸 體 、 器 官 、 組n 織 結(jié) 構(gòu) 和 細(xì) 胞 結(jié) 構(gòu) 的 固 有 形 態(tài) 結(jié)n 構(gòu) 的 過 程 謂 固 定 ， 所 用 的 化 學(xué) 試n 劑 謂 固 定 劑 或 固 定 液 。n 目 的 ： 防 止 自 溶 、 腐 敗 ， 保 持 良 好 結(jié) 構(gòu)

6、n 原 理 ： 組 織 及 細(xì) 胞 內(nèi) 蛋 白 凝 固 ， 或 使 有 n 關(guān) 成 分 沉 淀 、 變 性 ， 成 為 不 溶 性n 物 質(zhì) 。n 方 法 ： 浸 泡 n 灌 注 ： 局 部 灌 注 、 全 身 灌 注n 蒸 汽 熏 蒸 固 定 時(shí) 間 : n 常 規(guī) 組 織 病 理 學(xué) : 可 長 時(shí) 間 固 定n 細(xì) 胞 病 理 學(xué) ： 可 長 時(shí) 間 固 定n 細(xì) 胞 化 學(xué) ： 不 宜 過 長 ， 約 1小 時(shí) 為 宜 固 定 后 處 理 ：n 充 分 洗 滌 固 定 時(shí) 間 越 長 ， 洗 滌 時(shí) 間 也 應(yīng) 相 應(yīng) 增 加 固 定 注 意 事 項(xiàng)n 1. 固 定 液 有 毒 性 ，

7、 注 意 自 身 防 護(hù)n 2. 及 時(shí) ， 盡 可 能 新 鮮n 3. 超 微 結(jié) 構(gòu) 觀 察 ： 低 溫 固 定n 4. 注 意 不 同 研 究 目 的 對 固 定 液 的 特 殊 需 要n 細(xì) 胞 化 學(xué)n 超 微 結(jié) 構(gòu)n 細(xì) 胞 涂 片 巴 氏 染 色n 5. 固 定 液 用 量 ： 足 ， 必 要 時(shí) 及 時(shí) 更 換 。 n 6. 固 定 時(shí) 間n 7. 固 定 后 洗 滌 常 用 固 定 液甲 醛 溶 液 ： 4 甲 醛 ， 或 10 福 爾 馬 林 40 甲 醛 （ 福 爾 馬 林 ， Formeldehyde） 用 于 無 特 要 求 的 組 織 常 規(guī) 固 定 乙 醇 （

8、Ethyl Alcohol） : 95% 用 于 細(xì) 胞 病 理 學(xué) 涂 片 常 規(guī) 固 定 ， 糖 原 固 定乙 醇 乙 醚 混 合 固 定 液 : 95% ： 95%乙 醇 + 95%乙 醚 （ 1:1） 用 于 細(xì) 胞 涂 片 巴 氏 染 色 （ 二 ） 石 蠟 包 埋 制 樣組 織 塊 脫 水 ： 逐 級 乙 醇 脫 水 透 明 ： 二 甲 苯 浸 蠟 ： 65 C 包 埋 ： 溶 解 蠟 人 工 脫 水 程 序(適 應(yīng) 于 3mm厚 的 組 織 塊 )1、 30%酒 精 24h2、 50%酒 精 24h3、 70%酒 精 24h4、 80%酒 精 24h5、 90%酒 精 12h6、

9、 95%酒 精 4h7、 95%酒 精 4h 8、 100%酒 精 2h9、 100%酒 精 2h10 二 甲 苯 40min11 二 甲 苯 40min12 石 蠟 （ 軟 ） 1h13 石 蠟 1h14 石 蠟 1h （ 三 ） 石 蠟 切 片 (四 ) HE染 色 ： 蘇 木 素 伊 紅 染 色1 脫 蠟 （ 二 甲 苯 ）2 水 化 （ 逐 級 乙 醇 水 化 ： 100 30 ）3 染 蘇 木 素4 1 鹽 酸 酒 精 分 化5 返 蘭6 逐 級 乙 醇 脫 水 30 (或 50 ) 95 伊 紅 染 色 逐 級 乙 醇 脫 水 （ 95 100 ） 二 甲 苯 透 明 封 片 ：

10、中 性 樹 膠 蓋 玻 片 HE染 色 法 程 序 三 、 常 規(guī) 細(xì) 胞 病 理 學(xué) 技 術(shù) 細(xì) 胞 病 理 學(xué) （ cytopathology）n 診 斷 細(xì) 胞 學(xué) （ diagnostic cytology）n 臨 床 細(xì) 胞 學(xué) （ clinical cytology） 。n 該 學(xué) 科 是 利 用 身 體 器 官 組 織 正 常 或 病 變 的離 體 細(xì) 胞 進(jìn) 行 涂 片 ， 經(jīng) 顯 微 鏡 觀 察 ， 做 出 疾 病 診斷 ， 特 別 是 腫 瘤 良 惡 性 診 斷 .n 細(xì) 胞 病 理 學(xué) 方 法 簡 便 易 行 、 診 斷 準(zhǔn) 確 、 可靠 ， 已 成 為 癌 癥 早 期

11、診 斷 的 重 要 手 段 之 一 ， 可 廣泛 應(yīng) 用 于 臨 床 和 大 量 人 群 防 癌 普 查 。 三 、 常 規(guī) 細(xì) 胞 病 理 學(xué) 技 術(shù) 一 、 取 材 、 涂 片 制 備 痰 涂 片 、 胸 水 、 腹 水 及 尿 液 制 片 二 、 固 定 三 、 染 色 (巴 氏 染 色 ) 常 用 固 定 液（ 1） 等 量 95%乙 醇 和 乙 醚 混 合 液（ 2） 氯 仿 酒 精 固 定 液（ 3） 95%酒 精 固 定 液（ 4） 福 爾 馬 林 固 定 液 細(xì) 胞 學(xué) 研 究 ， 固 定 液 選 擇 要 根 據(jù) 實(shí) 驗(yàn) 要求 條 件 而 定 ， 如 用 細(xì) 胞 涂 片 作 原

12、 位 PCR，固 定 液 要 選 用 多 聚 甲 醛 。 巴 氏 染 色 步 驟1 標(biāo) 本 95 酒 精 固 定 3-5分 鐘2 Harris蘇 木 素 液 5-10分 鐘3 水 （ 蒸 餾 水 或 自 來 水 ） 漂 洗 2-3次4 1 鹽 酸 水 溶 液 （ 或 1 鹽 酸 酒 精 液 ） 浸 1-3次5 自 來 水 浸 洗 1-2次6 自 來 水 或 稀 碳 酸 鋰 （ 100ml蒸 餾 水 中 加 碳 酸 鋰 飽和 液 1滴 ） ， 涂 片 返 藍(lán) 為 止 7 依 次 置 入 70 80 95 酒 精 ， 各 2分 鐘 8 桔 黃 G6液 ， 1分 鐘 9 95 酒 精 、 缸 ， 各

13、 1分 鐘10 EA36液 ， 5分 鐘11 95 酒 精 、 、 ， 各 1分 鐘12 無 水 酒 精 、 ， 各 1分 鐘13 二 甲 苯 、 ， 各 2分 鐘14 中 性 樹 膠 蓋 片 封 固 四 、 組 織 化 學(xué) 和 細(xì) 胞 化 學(xué) 技 術(shù) 用 化 學(xué) 反 應(yīng) 原 理 ， 在 切 片 上 滴 加 某種 化 學(xué) 試 劑 ， 使 之 與 組 織 或 細(xì) 胞 中 的 生物 化 學(xué) 物 質(zhì) 結(jié) 合 ， 再 用 顯 色 劑 使 之 顯 色 ，達(dá) 到 定 位 、 定 性 地 顯 示 組 織 或 細(xì) 胞 中 的某 種 物 質(zhì) 成 分 ， 這 種 技 術(shù) 稱 為 組 織 化 學(xué)和 細(xì) 胞 化 學(xué)

14、技 術(shù) 。 其 結(jié) 果 可 用 顯 微 鏡 和電 鏡 觀 察 。 結(jié) 合 定 量 病 理 學(xué) 技 術(shù) ， 還 可對 有 關(guān) 成 分 定 量 。 應(yīng) 用 糖 類 脂 類 核 酸 酶 類 膠 原 纖 維 彈 力 纖 維 神 經(jīng) 纖 維 細(xì) 胞 膜 、 核 膜 結(jié) 構(gòu) 五 、 免 疫 組 織 化 學(xué) 技 術(shù)概 念 ： 免 疫 組 織 化 學(xué) 技 術(shù) 是 指 利 用 已 知 的 抗 體 與 組 織 中 相 應(yīng) 的 抗 原 結(jié) 合 ， 并 利 用 顯 色 劑 在 原 位 將 抗 原 物 質(zhì) 顯 示 出 來原 理 ： 抗 原 抗 體 顯 色 劑特 點(diǎn) ： 在 組 織 中 原 位 顯 示 某 種 特 異 性

15、 抗 原常 用 顯 色 劑 種 類 ： 酶 、 金 屬 粒 子 、 同 位 素 生 物 素 、 化 學(xué) 顯 色 劑 （ DAB）結(jié) 果 觀 察 ： 顯 微 鏡 、 透 射 電 鏡 六 、 超 微 結(jié) 構(gòu) 的 基 本 技 術(shù) 超 微 結(jié) 構(gòu) 是 在 高 分 辨 條 件 下 觀 察 到 的細(xì) 胞 膜 、 細(xì) 胞 核 、 核 仁 、 核 膜 、 各 種 細(xì) 胞器 、 微 絨 毛 、 纖 毛 、 細(xì) 胞 連 接 結(jié) 構(gòu) 及 膠 原纖 維 、 彈 力 纖 維 等 光 鏡 水 平 觀 察 不 到 的 細(xì)微 結(jié) 構(gòu) 。 （ 一 ） 透 射 電 鏡 技 術(shù) 1. 取 材 ： 1 1mm3 2. 固 定 : 2

16、%戊 二 醛 2h 1%鋨 酸 1 2h 3. 脫 水 ： 逐 級 丙 酮 ， 環(huán) 氧 丙 烷 4. 包 埋 及 聚 合 ： 浸 透 、 包 埋 （ Epon812） 聚 合 （ 硬 化 ） 、 時(shí) 間 5. 超 薄 切 片 ： 超 薄 切 片 機(jī) 6. 染 色 ： 飽 和 醋 酸 鈾 、 1 檸 檬 酸 鉛 7. 透 射 電 鏡 觀 察 （ 二 ） 掃 描 電 鏡 技 術(shù) 1. 取 材 ： 1 1mm3 2. 固 定 : 2%戊 二 醛 2h 1%鋨 酸 1 2h 3. 脫 水 ： 逐 級 丙 酮 ， 環(huán) 氧 丙 烷 4. 干 燥 ： 臨 界 點(diǎn) 干 燥 ， 醋 酸 異 戊 酯 5. 噴 金

17、 ： 6. 掃 描 電 鏡 觀 察 七 、 定 量 病 理 學(xué) 技 術(shù) 體 視 學(xué) (Stereology)： 二 維 結(jié) 構(gòu) 信 息 定 量 推 論 三 維 結(jié) 構(gòu) 信 息 研 究 內(nèi) 容 ： 二 維 定 量 推 論 三 維 的 原 理 、 方 法 及 應(yīng) 用 ，圖 像 分 析 原 理 和 方 法 生 物 體 視 學(xué) (Biological Stereology) 用 體 視 學(xué) 原 理 和 方 法 研 究 生 物 組 織 的 三 維結(jié) 構(gòu) ， 并 據(jù) 生 物 組 織 的 結(jié) 構(gòu) 特 點(diǎn) 研 究 相 應(yīng) 的 體視 學(xué) 測 試 方 法 稱 為 生 物 體 視 學(xué) n 形 態(tài) 測 量 學(xué) （ M

18、orphometry）n 平 面 測 量 學(xué) （ Planimetry）n 體 視 學(xué) (Stereology)n 形 態(tài) 結(jié) 構(gòu) 要 素 計(jì) 數(shù) ， 如 核 分 裂 計(jì) 數(shù)n 顯 微 分 光 光 度 術(shù)n 流 式 細(xì) 胞 術(shù)n 激 光 共 聚 焦 顯 微 圖 像 分 析n 圖 像 分 析 特 點(diǎn)n 給 出 量 化 結(jié) 果n 提 高 結(jié) 果 表 達(dá) 的 客 觀 性 和 準(zhǔn) 確 性 應(yīng) 用 診 斷 預(yù) 后 分 析 基 礎(chǔ) 數(shù) 據(jù) 三 維 結(jié) 構(gòu) 定 量 分 析 形 態(tài) 與 機(jī) 能 有 機(jī) 結(jié) 合 八 、 分 子 病 理 學(xué) 技 術(shù) 廣 義 概 念 ： 狹 義 概 念 ： 將 分 子 生 物 學(xué)

19、方 法 與 病 理 形態(tài) 學(xué) 技 術(shù) 相 結(jié) 合 ， 從 分 子 生 物 學(xué) 水 平 原 位闡 明 病 變 的 特 點(diǎn) 和 規(guī) 律 謂 分 子 病 理 學(xué) 技 術(shù) 。 原 位 PCR技 術(shù) 原 位 雜 交 技 術(shù)顯 微 切 割 技 術(shù) 九 、 其 他 病 理 學(xué) 技 術(shù) 細(xì) 胞 及 組 織 培 養(yǎng) 技 術(shù) 細(xì) 胞 及 細(xì) 胞 器 分 離 技 術(shù) 顯 微 切 割 技 術(shù) 顯 微 攝 影 技 術(shù) 核 仁 組 成 區(qū) 技 術(shù) 熒 光 染 色 技 術(shù) 核 移 植 技 術(shù) 酶 組 織 化 學(xué) 技 術(shù) 放 射 自 顯 影 技 術(shù) 流 式 細(xì) 胞 技 術(shù) 激 光 共 聚 焦 掃 描 顯 微 鏡 技 術(shù) 附

20、: 常 規(guī) 病 理 學(xué) 技 術(shù) 詳 解n 一 、 標(biāo) 本 的 來 源 與 收 集(一 )1、 臨 床 活 檢2、 尸 體 解 剖3、 實(shí) 驗(yàn) 動(dòng) 物（ 二 ）1、 檢 查 申 請 單 的 姓 名 ， 標(biāo) 本 的 件 數(shù) 是 否 與 之 相符 合 。2、 標(biāo) 本 是 否 符 合 要 求 。 二 、 標(biāo) 本 的 處 理1、 對 送 檢 物 進(jìn) 行 編 號(hào) 登 記 ， 以 免 混 亂 。2、 小 組 織 全 部 包 埋 。3、 大 塊 組 織 切 取 其 中 部 分 組 織 ， 如 腫 瘤 和 腫 瘤邊 緣 組 織 ， 剩 余 組 織 在 病 理 報(bào) 告 發(fā) 出 后 約 一個(gè) 星 期 后 處 理 。

21、 三 、 組 織 的 固 定 將 取 好 的 組 織 放 入 固 定 液 進(jìn) 行 固 定 ， 活 檢 組織 的 固 定 ， 由 于 受 到 時(shí) 間 的 限 制 ， 不 能 過 多 的 占用 時(shí) 間 ， 最 多 只 能 占 2小 時(shí) ， 其 它 的 組 織 可 固 定10-20小 時(shí) ， 但 最 好 不 要 超 過 24小 時(shí) ， 因 這 個(gè) 時(shí)間 對 以 后 的 免 疫 組 化 的 顯 示 都 有 影 響 。 四 、 固 定 的 作 用 固 定 的 作 用 不 僅 是 使 細(xì) 胞 內(nèi) 蛋 白 質(zhì) 凝 固 ，終 止 或 減 少 外 源 性 酶 和 內(nèi) 源 性 酶 的 反 應(yīng) ， 防 止 細(xì)胞 自

22、 溶 ， 以 保 持 組 織 的 固 有 形 態(tài) 和 結(jié) 構(gòu) ， 更 重 要的 是 保 存 組 織 或 細(xì) 胞 的 抗 原 性 ， 不 但 使 抗 原 不 致失 活 ， 還 要 使 抗 原 不 發(fā) 生 彌 散 ， 以 免 在 免 疫 組 化染 色 時(shí) 產(chǎn) 生 過 深 的 背 景 。 五 、 固 定 的 目 的1、 能 防 止 細(xì) 菌 的 腐 蝕 和 抑 制 組 織 的 自 溶2、 能 凝 固 或 沉 淀 細(xì) 胞 內(nèi) 或 組 織 液 的 蛋 白 等3、 使 組 織 硬 化 ， 便 于 切 塊4、 對 某 些 具 有 傳 染 性 的 標(biāo) 本 ， 能 防 止 其 擴(kuò) 散5、 保 存 組 織 細(xì) 胞

23、中 固 有 的 物 質(zhì)6、 保 存 好 大 體 標(biāo) 本7、 可 增 強(qiáng) 染 色 六 、 固 定 時(shí) 的 注 意 事 項(xiàng)1、 組 織 塊 越 新 鮮 越 好2、 組 織 塊 不 宜 過 厚 過 大3、 根 據(jù) 需 要 選 擇 適 當(dāng) 的 固 定 液4、 組 織 固 定 時(shí) 間 不 宜 過 長 ， 也 不 能 太 短5、 固 定 液 的 量 要 充 分 ， 1： 56、 不 應(yīng) 強(qiáng) 行 將 組 織 裝 入 較 小 的 容 器 內(nèi)7、 特 殊 方 法 需 要 特 殊 的 固 定 液 七 、 固 定 液 的 選 擇1、 盡 量 選 擇 對 組 織 收 縮 少 ， 滲 透 快 的 固 定 液2、 選 擇

24、 較 通 用 的 固 定 液 ， 既 能 做 好 HE的 染 色 ， 又 能做 免 疫 組 化 標(biāo) 記3、 特 殊 的 病 例 選 擇 特 殊 的 固 定 液如 ：狂 犬 病 丙 酮磷 酸 酶 丙 酮糖 原 無 水 酒 精 八 、 固 定 液 的 分 類 .醛 類 ： 甲 醛 、 戊 二 醛 、 多 聚 乙 醛 、 丙 稀 醛 等 .氧 化 劑 類 ： 四 氧 化 餓 （ 奧 酸 ） 、 高 錳 酸 鉀 、重 鉻 酸 鉀 等 .蛋 白 變 性 類 ： 醋 酸 、 甲 醇 、 乙 醇 等 .其 它 ： 氯 化 汞 ， 苦 味 酸 等 。 九 、 固 定 液 的 使 用（ 一 ） 甲 醛 （ fo

25、rmaldehyde） 一 般 市 售 的 含 37-40%， 平 時(shí) 使 用 都 把 它 看 為 100%。它 由 甲 醛 氣 體 飽 和 于 水 而 成 。 比 重 為 1.12， 有 一 股 刺鼻 的 氣 味 。 甲 醛 與 組 織 蛋 白 質(zhì) 類 的 反 應(yīng) 是 多 樣 而 復(fù) 雜的 ， 因 為 它 能 和 多 種 不 同 的 功 能 基 團(tuán) 結(jié) 合 。 如 近 來 的抗 原 修 復(fù) 就 是 認(rèn) 為 組 織 中 的 蛋 白 與 醛 產(chǎn) 生 交 聯(lián) 蛋 白 后 ，要 將 它 們 顯 示 出 來 ， 就 必 須 應(yīng) 用 溫 度 高 達(dá) 92 以 上 的抗 原 修 復(fù) 液 ， 才 能 將 其

26、 交 聯(lián) 的 醛 鍵 打 開 ， 與 后 來 的 抗體 結(jié) 合 ， 將 其 表 達(dá) 出 來 。 甲 醛 的 優(yōu) 點(diǎn) ：1、 收 縮 較 小2、 固 定 較 為 均 勻 ， 穿 透 力 強(qiáng)3、 能 使 組 織 硬 化 并 富 有 彈 性4、 能 保 存 脂 肪 及 脂 類 物 質(zhì)5、 成 本 較 低 甲 醛 的 缺 點(diǎn) ：1、 成 分 不 純 ， 含 少 量 的 甲 醇 ， 影 響 酶 反 應(yīng)2、 含 少 量 的 甲 酸 ， 易 產(chǎn) 生 色 素3、 不 能 固 定 尿 酸 和 糖 類 物 質(zhì)4、 易 揮 發(fā) 、 污 染 環(huán) 境5、 易 產(chǎn) 生 醛 基 、 封 閉 抗 原 應(yīng) 用 甲 醛 配 成

27、的 固 定 液 有 ：1、 緩 沖 福 爾 馬 林 固 定 液 （ neutral buffered formaaldehyde） NaH2PO4H2O 4g Na2HPO4（ 無 水 ） 65g 蒸 餾 水 900ml 甲 醛 100ml 2、 10%福 爾 馬 林 固 定 液 甲 醛 10ml 自 來 水 90ml3、 10%福 爾 馬 林 鹽 固 定 液 甲 醛 10ml 自 來 水 90ml NaCl 0.9g 4、 Bouin氏 固 定 液 苦 味 酸 飽 和 水 溶 液 75ml 甲 醛 25ml 冰 醋 酸 5ml 5、 Zonker氏 液 氯 化 汞 5g 重 鉻 酸 鉀 2.

28、5g 硫 酸 鈉 1g 水 100ml注 ： 該 固 定 液 固 定 時(shí) 間 為 16-24h， 染 色 前 應(yīng) 用 碘酒 除 去 汞 鹽 的 沉 淀 ， 否 則 會(huì) 影 響 染 色 后 切片 的 觀 察 。 （ 二 ） 酒 精 （ alcohol） 有 無 水 酒 精 （ 99.8%） 和 工 業(yè) 酒 精 （ 95%） 在病 理 技 術(shù) 方 面 ， 酒 精 是 一 種 重 要 的 試 劑 ， 它 可 配成 不 同 的 濃 度 來 進(jìn) 行 脫 水 ， 如 ： 60%、 70%、 80%、90%、 95%等 ， 在 切 片 染 色 前 ， 用 酒 精 來 除 去 二 甲苯 ， 在 染 完 色 后

29、 則 用 其 來 脫 水 。 應(yīng) 當(dāng) 注 意 的 是 ， 組 織 脫 水 時(shí) 應(yīng) 根 據(jù) 組 織 的大 小 、 器 官 或 部 位 、 取 材 的 大 小 來 確 定 脫 水 時(shí) 間 ，一 般 認(rèn) 為 濃 度 越 低 ， 脫 水 時(shí) 間 可 以 相 對 延 長 ， 如70%可 用 來 長 期 保 存 標(biāo) 本 ， 但 如 果 在 100%的 酒 精里 時(shí) 間 就 不 能 太 長 ， 否 則 組 織 易 脆 不 利 于 切 片 。酒 精 可 以 與 其 它 試 劑 混 合 ， 配 成 混 合 固 定 液 ， 如AAF固 定 液 。 酒 精 的 優(yōu) 點(diǎn) ：1、 可 以 保 存 糖 原 和 尿 酸 結(jié)

30、 晶 。2、 能 在 任 何 比 例 的 情 況 下 與 水 混 合 。3、 能 溶 解 苯 類 物 質(zhì) ， 為 染 色 法 中 的 橋 梁 試 劑 。4、 能 脫 去 切 片 上 的 水 份 。5、 可 配 成 混 合 固 定 液 。6 、 可 作 為 保 存 標(biāo) 本 的 固 定 液 。7 、 可 用 來 消 毒 。 灑 精 的 缺 點(diǎn) ：1、 可 溶 解 脂 類 及 脂 肪 物 質(zhì) 。2、 可 沉 淀 白 蛋 白 ， 球 和 核 蛋 白 。3、 滲 透 力 不 強(qiáng) 。4、 可 脫 去 某 些 已 著 染 切 片 的 顏 色 。5、 不 作 為 單 獨(dú) 的 固 定 液 。6、 價(jià) 格 昂 貴

31、 。 病理組織切片的制作 一 、 石 蠟 切 片（ 一 ） 組 織 脫 水 人 體 或 各 種 動(dòng) 物 的 各 種 組 織 ， 都 含 有大 量 的 水 分 。 在 石 蠟 切 片 中 ， 水 與 蠟 不 能相 混 合 ， 必 須 想 辦 法 將 含 于 組 織 中 的 水 分脫 去 ， 才 能 完 成 一 系 列 的 操 作 過 程 ， 制 作好 的 切 片 。 1、 人 工 脫 水 法 優(yōu) 點(diǎn) ：（ 1） 可 根 椐 不 同 的 組 織 選 擇 最 佳 時(shí) 間 。（ 2） 可 避 免 細(xì) 小 的 組 織 經(jīng) 受 不 必 要 的 脫 水時(shí) 間 ,防 止 組 織 的 硬 脆 （ ） 可 靈 活

32、 掌 握 ， 隨 時(shí) 進(jìn) 行 觀 察 和 調(diào)整 2、 人 工 脫 水 法 的 不 是 之 處 ：（ 1） 需 耗 人 力 ；（ 2） 必 須 在 白 天 完 成 ， 晚 上 無 法 進(jìn) 行 換 液 ；（ 3） 如 機(jī) 器 發(fā) 生 故 障 ， 組 織 塊 被 擱 置 在 外邊 ， 致 使 組 織 干 涸 ， 影 響 了 制 片 的 質(zhì)量 。 人 工 脫 水 程 序(適 應(yīng) 于 3mm厚 的 組 織 塊 )1、 80%酒 精 24h2、 90%酒 精 12h3、 95%酒 精 4h4、 95%酒 精 4h5、 100%酒 精 2h6、 100%酒 精 2h 7、 二 甲 苯 40min8、 二 甲

33、 苯 40min9、 石 蠟 （ 軟 ） 1h10、 石 蠟 1h11、 石 蠟 1h 細(xì) 小 組 織 脫 水 程 序（ 適 合 于 胃 、 腸 鏡 活 檢 ， 肝 、 肺 、 腎 穿 刺 活 檢 的組 織 ）1、 80%酒 精 10-15min2、 90%酒 精 10-15min3、 95%酒 精 10-15min4、 100%酒 精 10-15min5、 二 甲 苯 5-10min6、 石 蠟 15-20min Shandan全 封 閉 電 腦 控 制 全 自 動(dòng) 組 織 脫 水 機(jī) 該 機(jī) 由 電 腦 、 反 應(yīng) 缸 和 試 劑 儲(chǔ) 存 缸 三部 分 構(gòu) 成 。 電 腦 屏 幕 可 顯

34、示 時(shí) 間 、 溫 度 、 所 需 時(shí)間 、 是 否 用 真 空 負(fù) 壓 等 ， 可 根 據(jù) 不 同 的 時(shí)間 要 求 ， 編 制 9套 不 同 的 組 織 脫 水 程 序 。 1、 正 常 室 溫 脫 水 程 序A、 10%福 爾 馬 林 2hB、 90%酒 精 1.5hC、 95%酒 精 1.5hD、 95%酒 精 1hE、 95%酒 精 1hF、 100%酒 精 1h G、 100%酒 精 1hH、 100%酒 精 1hI、 二 甲 苯 40minJ、 二 甲 苯 40minK、 石 蠟 65 真 空 負(fù) 壓 1hL、 石 蠟 65 真 空 負(fù) 壓 1h 2、 加 溫 脫 水 程 序 應(yīng)

35、 用 正 常 室 溫 的 脫 水 時(shí) 間 ， 再 編 入 加溫 程 序 ， 加 溫 的 溫 度 一 般 在 37-403、 真 空 負(fù) 壓 脫 水 程 序 應(yīng) 用 正 常 室 溫 的 脫 水 時(shí) 間 ， 再 編 入 真空 負(fù) 壓 脫 水 程 序 4、 周 末 程 序A、 10%福 爾 馬 林 10hB、 90%酒 精 10hC、 95%酒 精 10hD、 95%酒 精 10hE、 95%酒 精 10hF、 100%酒 精 2h G、 100%酒 精 2hH、 100%酒 精 2hI、 二 甲 苯 1hJ、 二 甲 苯 1hK、 石 蠟 65 真 空 負(fù) 壓 1hL、 石 蠟 65 真 空 負(fù)

36、壓 1h 該 機(jī) 的 特 點(diǎn) ：1、 容 量 大 ， 一 次 可 處 理 250-300個(gè) 包 埋 盒 。2、 全 部 密 閉 ， 試 劑 不 易 揮 發(fā) ， 保 護(hù) 了 環(huán) 境 。3、 帶 有 定 期 的 攪 動(dòng) 裝 置 ， 使 組 織 固 定 均 勻 ，脫 水 徹 底 ， 浸 蠟 充 分 。4、 脫 水 過 程 可 使 用 真 空 負(fù) 壓 和 加 熱 。5、 該 機(jī) 占 地 量 小 。 組 織 透 明 應(yīng) 用 于 透 明 組 織 的 試 劑 有 很 多 種 ， 有 ：二 甲 苯 ， 三 氯 甲 烷 （ 氯 仿 ） ， 香 柏 油 ， 苯酚 ， 松 節(jié) 油 等 。 二 甲 苯 的 主 要 性

37、 能 和 使 用 它 是 一 種 透 明 無 色 的 液 體 ， 揮 發(fā) 性 強(qiáng) ，打 開 后 即 可 聞 到 它 的 味 道 。 它 可 溶 于 灑 精 ，丙 酮 等 含 醇 類 的 物 質(zhì) ， 也 可 溶 解 石 蠟 ， 但不 溶 于 水 。 當(dāng) 脫 完 水 的 組 織 放 入 二 甲 苯 后 ，經(jīng) 過 一 定 的 時(shí) 間 組 織 即 可 透 明 ， 如 果 組 織四 周 透 明 ， 中 間 留 有 白 點(diǎn) ， 則 說 明 中 間 部分 沒 有 徹 底 脫 水 ， 此 時(shí) 應(yīng) 將 組 織 重 新 放 回灑 精 脫 水 。 但 經(jīng) 這 樣 處 理 后 的 組 織 切 片 效果 較 差 。 （

38、 二 ） 組 織 浸 蠟 將 透 明 的 組 織 移 放 入 65 左 右 的 電 熱恒 溫 箱 或 脫 水 機(jī) 上 的 特 設(shè) 蠟 缸 中 ， 浸 漬 一定 的 時(shí) 間 ， 這 個(gè) 過 程 稱 為 浸 蠟 。 1、 可 起 到 填 充 、 支 撐 的 作 用 。 組 織 經(jīng) 酒 精 、 二 甲 苯 的 作 用 后 ， 其 中有 許 多 物 質(zhì) 被 溶 解 去 ， 如 脂 肪 及 脂 類 物 質(zhì) 、糖 原 等 。 因 而 遺 留 下 許 多 腔 隙 ， 妨 礙 了 切片 。 在 切 片 時(shí) 由 于 誘 導(dǎo) 劑 的 作 用 下 石 蠟 可以 浸 入 到 物 質(zhì) 的 各 個(gè) 角 落 ， 當(dāng) 石 蠟

39、 冷 卻 時(shí) ，浸 入 到 各 處 的 石 蠟 就 填 充 在 各 處 的 空 隙 ，包 括 血 管 和 器 官 等 。 使 組 織 保 持 原 有 的 形狀 ， 也 使 包 埋 后 蠟 塊 保 持 平 整 ， 便 于 切 片 。 2、 使 切 片 能 完 整 的 切 除 并 保 持 切 片 的 美 觀3、 石 蠟 的 使 用（ 1） 石 蠟 的 性 質(zhì) 它 是 一 種 碳 氫 化 合 物 ， 熔 點(diǎn) 45-70 以 上 。 （ 2） 石 蠟 熔 點(diǎn) 的 種 類 45 52-54 54-56 56-58 58-60 60-62 （ 3） 石 蠟 性 質(zhì) 的 改 善 增 加 石 蠟 的 硬 度

40、， 如 加 入 脂 蠟 酸 、 柏 油 、楊 梅 蠟 等 。 增 加 石 蠟 的 粘 度 ， 如 加 入 蜂 蠟 、 硬 脂 肪等 。 加 熱 促 進(jìn) 石 蠟 性 質(zhì) 的 改 善 熔 化 冷 卻 熔 化 4、 浸 蠟 的 方 法 傳 統(tǒng) 浸 蠟 法 將 透 明 好 的 組 織 放 入 熔 化 的 石 蠟 中 浸漬 一 定 的 時(shí) 間 。 真 空 負(fù) 壓 浸 蠟 法 將 透 明 好 的 組 織 放 入 浸 蠟 缸 中 ， 然 后移 入 真 空 負(fù) 壓 箱 內(nèi) ， 或 者 脫 水 機(jī) 自 身 配 有的 真 空 負(fù) 壓 裝 置 進(jìn) 行 浸 蠟 。 浸 蠟 時(shí) 間 ， 真 空 負(fù) 壓 數(shù) 見 表 。

41、組 織 分 類 、 浸 蠟 時(shí)間 、 浸 蠟 方 法 鼻 咽 部 、 宮 內(nèi)膜 、 穿 刺 物 、排 出 物 甲 狀 腺 、 肝 、 腎 、淋 巴 結(jié) 等 子 宮 肌 、 平 滑 肌 、胃 、 腸 、 大 塊 的組 織 、 橫 紋 肌 所 需 溫 度 傳 統(tǒng) 浸 蠟 法 6090min 90150min 180min 以 上 65 真 空 負(fù) 壓 浸 蠟 法 1520min 2530min 60min 以 上 65 以 上 真 空 負(fù) 壓 壓 力 讀 數(shù) 26.733.3K pa 4053.3K pa 66.7K pa 以 上 真 空 負(fù) 壓 浸 蠟 時(shí) 間 壓 力 表注 ： 1、 計(jì) 時(shí) 應(yīng)

42、 以 石 蠟 全 部 溶 化 時(shí) 計(jì) 起 。 2、 當(dāng) 抽 氣 時(shí) ， 溫 度 應(yīng) 調(diào) 高 幾 度 ， 至 抽 氣 完 成 后才 調(diào) 至 所 需 溫 度 。 （ 四 ） 組 織 包 埋 將 浸 完 蠟 的 組 織 埋 葳 于 石 蠟 中 的 過 程 稱 為組 織 包 埋 。包 埋 時(shí) 的 注 意 事 項(xiàng) ：1、 所 使 用 的 鑷 子 ， 包 埋 框 ， 最 好 放 于 37的 恒 溫箱 內(nèi) ， 以 免 這 些 物 質(zhì) 過 冷 （ 在 冬 天 時(shí) ） 而 過早 冷 卻 包 埋 的 石 蠟 ， 影 響 包 埋 的 質(zhì) 量 ， 這 種現(xiàn) 象 在 沒 有 石 蠟 包 埋 機(jī) 的 單 位 較 為 明

43、顯 。 2、 打 開 脫 水 盒 ， 取 出 組 織 塊 ， 將 一 平 整 的 大 的一 面 朝 下 ， 并 用 鑷 子 壓 平 ， 使 其 保 持 在 一 水平 面 上 。 3、 每 包 埋 完 一 塊 ， 應(yīng) 附 上 標(biāo) 簽 ， 以 免 出 差 錯(cuò) 或張 冠 李 戴 。 如 為 塑 料 包 埋 盒 ， 則 可 少 去 這 一步 ， 極 為 方 便 。4、 對 于 管 腔 的 組 織 如 血 管 、 腸 、 氣 管 等 應(yīng) 豎 起來 包 埋 對 于 皮 膚 及 胃 、 腸 、 等 組 織 應(yīng) 辯 認(rèn) 好方 向 。 仔 細(xì) 包 埋 。 5、 細(xì) 小 多 塊 的 組 織 ， 可 包 埋 在 一

44、 個(gè) 蠟 塊 ，但 應(yīng) 保 持 在 同 一 平 面 上 ， 以 免 影 響 切片 。6、 包 埋 完 后 ， 蠟 面 凝 固 ， 便 可 放 入 水 中 加速 硬 化 ， 如 帶 有 冷 凍 設(shè) 備 的 包 埋 機(jī) ，則 可 少 去 這 一 步 。 7、 包 埋 時(shí) 組 織 塊 不 能 使 其 冷 卻 凝 固 ， 應(yīng)保 持 組 織 塊 上 的 蠟 處 于 熔 化 狀 態(tài) ， 這樣 包 埋 時(shí) 才 能 和 包 埋 蠟 溶 為 一 體 。 如果 組 織 塊 自 身 的 蠟 先 凝 固 ， 包 埋 后 的蠟 塊 切 片 時(shí) 組 織 與 邊 蠟 分 離 切 不 成 佳片 嚴(yán) 重 的 會(huì) 崩 掉 ， 影

45、 響 切 片 。 （ 五 ） 修 切 蠟 塊 應(yīng) 用 包 埋 框 包 埋 的 組 織 塊 ， 切 片 前 一 定要 將 其 切 好 ， 組 織 塊 與 邊 蠟 應(yīng) 保 持 有 0.5cm的厚 度 ， 才 有 利 于 切 片 。1、 有 利 于 切 片 ， 使 切 片 能 連 續(xù) 切 出 。2、 減 少 損 傷 刀 口 延 長 刀 口 的 壽 命 ， 以 利 多 切 蠟塊 。3、 有 利 于 切 片 的 裱 貼 。 例 如 一 張 載 片 要 裱 兩 塊組 織 時(shí) ， 修 切 好 的 蠟 塊 ， 就 能 使 它 們 擺 得 整齊 。 （ 六 ） 切 片 和 裱 片在 操 作 時(shí) 的 注 意 事

46、項(xiàng) ：1、 持 蠟 器 一 定 要 將 蠟 塊 挾 緊 挾 牢 ， 以 免 使其 跳 動(dòng) 而 影 響 切 片 。2、 刀 一 定 要 保 持 無 口 、 鋒 利 ， 一 次 性 刀 片做 到 這 一 點(diǎn) 較 容 易 ， 大 刀 片 要 做 到 上 述要 求 就 比 較 困 難 。 因 此 就 要 認(rèn) 真 地 磨 好刀 才 能 保 證 切 片 的 質(zhì) 量 。 3、 裱 片 的 水 溫 不 能 過 高 或 偏 低 ， 高 者 可 溶化 所 切 出 的 切 片 ， 低 者 則 展 不 開 切 片 ，使 切 片 留 有 皺 紋 ， 最 適 的 水 溫 應(yīng) 是 比 石蠟 的 溶 點(diǎn) 低 2-5 ， 如

47、石 蠟 的 溶 點(diǎn) 為 60-62 ， 裱 片 的 水 溫 則 可 達(dá) 55-57 ， 余者 類 推 。4、 對 于 細(xì) 小 的 組 織 ， 應(yīng) 特 別 小 心 修 切 ， 防止 一 刀 切 下 ， 全 部 皆 休 的 情 況 。 5、 對 于 多 塊 細(xì) 小 的 組 織 ， 原 則 上 是 每 一 細(xì)小 的 組 織 都 應(yīng) 有 一 個(gè) 切 面 。 修 切 的 時(shí) 候更 應(yīng) 特 別 小 心 。6、 每 切 完 一 塊 ， 裱 于 載 片 后 應(yīng) 隨 時(shí) 刻 上 編號(hào) ， 以 防 止 差 錯(cuò) 或 混 亂 的 現(xiàn) 象 發(fā) 生 ， 減少 差 錯(cuò) 的 苗 頭 。7、 挑 切 片 的 毛 筆 ， 應(yīng) 選

48、 用 細(xì) 小 柔 軟 的 毛 筆為 佳 ， 用 時(shí) 向 上 挑 ， 決 不 能 往 下 ， 以 免刀 口 傷 及 毛 筆 。 石 蠟 切 片 常 可 出 現(xiàn) 的 問 題1、 石 蠟 切 片 不 能 形 成 帶 狀 的 原 因 是 室 溫 低 ， 蠟塊 周 邊 不 整 齊 。2、 石 蠟 切 片 ， 切 片 卷 起 的 原 因 是 刀 的 傾 斜 角 度過 大 或 刀 不 快 。3、 石 蠟 切 片 出 現(xiàn) 的 皺 折 的 原 因 是 石 蠟 溶 點(diǎn) 低 ，純 度 不 足 。4、 石 蠟 切 片 出 現(xiàn) 厚 薄 不 均 勻 的 主 要 原 因 是 組 織塊 挾 不 牢 固 或 組 織 堅(jiān) 硬 如

49、 肌 瘤 等 。 5、 石 蠟 切 片 出 現(xiàn) 波 浪 狀 的 原 因 是 組 織 塊 太硬 或 骨 組 織 末 完 全 脫 鈣 。6、 石 蠟 切 片 ， 當(dāng) 切 片 放 入 水 中 裱 片 時(shí) ， 切片 周 圍 的 蠟 迅 即 向 四 邊 散 開 ， 其 主 要原 因 是 組 織 脫 水 不 徹 底 ， 浸 蠟 浸 不 進(jìn)去 。 包 埋 蠟 中 含 有 二 甲 苯 。7、 石 蠟 切 片 ， 當(dāng) 切 片 切 出 后 蠟 塊 向 上 時(shí) ，把 已 切 出 的 切 片 帶 走 并 損 壞 的 原 因 是切 片 刀 背 面 留 有 殘 余 石 蠟 。 8、 組 織 切 片 常 見 的 人 為 性

50、 色 素 沉 著 物 是 福爾 馬 林 色 素 ， 常 見 的 器 官 是 肝 、 脾 。9、 組 織 切 片 常 見 的 外 源 性 色 素 是 碳 末 ， 常見 的 器 官 是 肺 。10、 石 蠟 切 片 時(shí) 切 片 刀 的 最 宜 角 度 是 5 -3011、 一 般 所 稱 呼 的 標(biāo) 準(zhǔn) 室 溫 是 2012、 組 織 浸 蠟 的 溫 度 最 好 為12、 石 蠟 溶 點(diǎn) 的 最 高 度 高 2-3 即 65 。 （ 七 ） 石 蠟 切 片 的 烘 烤 石 蠟 切 片 在 染 色 前 ， 為 了 防 止 脫 落 ，都 必 須 進(jìn) 行 烘 烤 ， 以 促 進(jìn) 切 片 附 貼 的 牢

51、固性 。1、 常 規(guī) 切 片 烘 烤 常 規(guī) 石 蠟 切 片 切 完 后 ， 在 60 的 烤 箱中 烘 烤 20-30min便 可 進(jìn) 行 染 色 。 2、 免 疫 組 化 切 片 的 烘 烤 應(yīng) 用 于 免 疫 組 化 染 色 的 切 片 ， 由 于 整個(gè) 過 程 都 在 沖 沖 洗 洗 中 進(jìn) 行 ， 因 此 要 求 切片 附 貼 要 十 分 牢 固 ， 以 免 脫 片 ， 烘 烤 切 片的 時(shí) 間 可 為 1h、 1.5h、 2h、 3h等 ， 均 在60 的 烤 箱 中 烘 烤 。 病理切片常規(guī)染色 一 、 染 色 的 目 的 病 理 學(xué) 的 各 種 切 片 ， 都 必 須 應(yīng) 用

52、一 種以 上 的 染 料 通 過 不 同 的 方 法 將 切 片 的 各 種不 同 的 組 織 結(jié) 構(gòu) 給 予 顯 示 出 來 ， 以 利 于 鏡下 辨 別 其 各 種 不 同 的 形 態(tài) ， 做 出 正 確 的 診斷 。 二 、 染 色 的 作 用 1、 化 學(xué) 作 用 ： 染 液 中 的 陰 陽 離 子 與 組 織 中 的 陰 陽 離子 相 互 作 用 所 完 成 的 染 色 。 染 液 中 有 酸 性和 堿 性 染 料 之 分 ， 酸 性 染 料 有 染 色 作 用 的部 分 是 陰 離 子 ， 而 堿 性 染 料 有 染 色 作 用 的部 分 則 是 陽 離 子 。 組 織 的 各 種

53、 細(xì) 胞 中 細(xì) 胞核 為 酸 性 ， 它 可 與 蘇 木 素 液 中 的 陽 離 子 發(fā)生 反 應(yīng) 。 細(xì) 胞 槳 中 的 陽 離 子 則 與 伊 紅 液 中的 陰 離 子 發(fā) 生 反 應(yīng) ， 完 成 染 色 。 2、 物 理 作 用 ： 染 料 通 過 浸 透 ， 分 散 浸 入 到 組 織 的 間隙 中 ， 因 受 分 子 的 引 力 作 用 ， 染 液 中 的 色素 粒 子 被 吸 附 而 完 成 染 色 過 程 。3、 染 色 方 法 應(yīng) 用 于 常 規(guī) 病 理 切 片 的 染 色 方 法 稱 為普 通 染 色 法 或 HE染 色 法 ， 而 用 特 別 的 染 色法 則 稱 為 特

54、 殊 染 色 法 。 1、 二 甲 苯 510min 2、 二 甲 苯 510min 3、 無 水 酒 精 30se1min 4、 無 水 酒 精 30se1min 5、 95%酒 精 30se1min 6、 95%酒 精 30se1min 7、 90%酒 精 30se1min 8、 80%酒 精 30se1min 9、 H arris 蘇 木 素 10se15min 10、 自 來 水 洗 30sec1min 11、 1%鹽 酸 酒 精 30sec 12、 流 水 沖 洗 1015min 或 溫 水 洗 510min 13、 1%伊 紅 染 色 25min 14、 80%乙 醇 洗 去 多

55、余 的 染 色 1min 15、 90%酒 精 301min 16、 95%酒 精 301min 17、 95%酒 精 301min 18、 100%酒 精 301min 19、 100%酒 精 301min 20、 石 碳 酸 二 甲 苯 1min 21、 二 甲 苯 1min 22、 二 甲 苯 1min 23、 二 甲 苯 1min 24、 中 性 樹 膠 封 固 HE染 色 法 程 序 結(jié) 果 ： 細(xì) 胞 核 ： 藍(lán) 色 ， 軟 骨 基 質(zhì) 鈣 鹽 等 深藍(lán) 色 ； 細(xì) 胞 漿 深 淺 不 同 的 粉 紅 色 ，嗜 酸 性 顆 粒 鮮 紅 色 ； 膠 原 纖 維 呈 粉紅 色 ， 肌

56、纖 維 呈 鮮 紅 色 ， 彈 力 纖 維呈 亮 紅 色 ， 紅 血 球 為 桔 紅 色 ， 蛋 白基 質(zhì) 為 粉 紅 色 。 染 色 時(shí) 的 注 意 事 項(xiàng)（ 1） 切 片 烘 烤 以 切 片 附 貼 牢 固 為 原 則 ， 否則 容 易 掉 片 。（ 2） 切 片 脫 蠟 一 定 要 徹 底 ， 不 然 會(huì) 導(dǎo) 致 染色 深 淺 不 一 。（ 3） 切 片 染 蘇 木 素 前 可 令 其 無 水 化 ， 這 樣可 延 長 蘇 木 素 的 壽 命 。 因 為 每 次 染 色前 ， 切 片 水 洗 ， 然 后 進(jìn) 入 染 液 雖 然 每次 帶 入 的 水 分 很 少 ， 但 隨 著 次 數(shù) 的

57、 增加 ， 所 帶 入 的 水 分 足 可 以 稀 釋 染 液 影響 染 色 的 質(zhì) 量 。 （ 4） 切 片 在 蘇 木 素 的 染 色 時(shí) 間 應(yīng) 充 分 寧 過 勿 不足 。 對 于 初 學(xué) 者 來 說 更 應(yīng) 過 染 ， 否 則 分 化會(huì) 過 度 導(dǎo) 致 染 色 過 淺 。（ 5） 切 片 分 化 時(shí) ， 要 根 椐 不 同 的 組 織 來 確 定 分化 時(shí) 間 ， 并 不 斷 積 累 經(jīng) 驗(yàn) 。（ 6） 伊 紅 染 色 時(shí) 間 也 要 充 分 ， 經(jīng) 低 濃 度 灑 精 時(shí)應(yīng) 仔 細(xì) 觀 察 ， 必 要 時(shí) 快 速 通 過 ， 以 免 過 于褪 色 。 （ 7） 切 片 致 無 水

58、酒 精 后 ， 不 要 在 控 干 無 水 酒 精 時(shí)讓 切 片 干 涸 ， 可 以 不 經(jīng) 控 干 直 接 地 進(jìn) 入 碳酸 二 甲 苯 （ 也 可 以 進(jìn) 入 二 甲 苯 酒 精 混 合 1：1） 碳 酸 有 較 強(qiáng) 的 吸 水 性 透 明 也 好 很 適 合 南方 地 區(qū) 。（ 8） 切 片 從 二 甲 苯 中 取 出 封 固 時(shí) ， 切 不 能 讓 其 干涸 ， 因 南 方 地 區(qū) 空 氣 潮 濕 干 涸 的 切 片 與 空氣 接 觸 ， 可 吸 收 其 水 份 。 這 樣 的 切 片 很 容易 裉 色 。 切 片 不 干 涸 ， 表 面 被 著 二 甲 苯 ，由 于 它 不 溶 于

59、水 起 到 與 水 隔 絕 的 作 用 。 （ 9） 滴 中 性 樹 膠 封 蓋 切 片 ， 膠 不 能 太 濃 ，太 濃 膠 難 以 均 勻 鋪 開 ， 且 易 產(chǎn) 生 氣泡 ， 又 不 能 太 稀 過 稀 的 膠 由 于 二 甲苯 含 量 較 多 ， 當(dāng) 切 片 干 燥 時(shí) ， 二 甲苯 揮 發(fā) 掉 ， 膠 封 的 切 片 收 縮 ， 即 可導(dǎo) 致 一 半 切 片 沒 有 被 膠 封 固 的 結(jié) 果 。最 合 適 的 膠 應(yīng) 是 滴 下 成 珠 。 （ 10） 封 固 切 片 時(shí) ， 盛 膠 的 瓶 子 及 瓶 蓋 四周 不 要 留 有 余 膠 ， 否 則 瓶 蓋 難 以 打開 。 因 此

60、 每 次 用 完 后 都 必 須 將 其 擦干 凈 。 當(dāng) 打 不 開 瓶 蓋 時(shí) 應(yīng) 放 入 烤 箱中 烘 烤 ， 即 可 打 開 。 （ 11） 標(biāo) 簽 附 貼 要 認(rèn) 真 ， 不 要 貼 得 歪 歪 斜斜 ， 影 響 切 片 的 外 觀 . 染 液 的 配 制(一 ） 蘇 木 素 的 配 制1、 蘇 木 素 的 種 類 ：A、 明 礬 蘇 木 素 （ Harris,Mayer,Ehrlich）B、 鐵 蘇 木 素 （ Wiegert,Heidnhain）C、 鎢 蘇 木 素 （ PTAH）D、 鉛 蘇 木 素 （ Soecia） （ 1） Harris蘇 木 素 的 配 制 （ Harr

61、is.l900）蘇 木 素 0.5g無 水 乙 醇 5ml鉀 明 礬 （ 硫 酸 鋁 鉀 ） 10g蒸 餾 水 100ml氧 化 汞 0.25g冰 醋 酸 4ml 預(yù) 先 把 蘇 木 素 溶 于 無 水 酒 精 中 配 制 時(shí) ， 取一 三 角 瓶 倒 入 蒸 鎦 水 ， 再 加 入 鉀 明 礬 ， 于 電 爐 上加 熱 至 90 左 右 時(shí) ， 拔 去 電 源 加 入 酒 精 蘇 木 素 ，再 插 上 電 源 繼 續(xù) 加 熱 ， 持 續(xù) 35分 鐘 ， 拔 去 電 源 ，加 入 氧 化 汞 ， 此 時(shí) 可 產(chǎn) 生 大 量 的 氣 泡 ， 應(yīng) 防 止 其溢 出 瓶 外 。 再 繼 續(xù) 通 電

62、加 熱 ， 煮 沸 后 持 續(xù) 35分鐘 ， 此 時(shí) 溶 液 表 面 看 呈 深 紫 黑 色 ， 即 可 撤 離 電 源 ，用 備 好 的 冰 涼 水 ， 將 燒 瓶 迅 速 的 插 入 水 中 ， 讓 染液 迅 速 冷 卻 ， 中 止 氧 化 放 入 暗 處 。 于 第 二 天 過 濾后 再 加 入 冰 醋 酸 ， 即 可 使 用 ， 染 色 時(shí) 間 5 15分鐘 。 （ 2） Mayer氏 蘇 木 素 （ Mayer,1903）蘇 木 素 0.1g蒸 鎦 水 100ml鉀 明 礬 5g檸 檬 酸 0.1g水 合 醛 5g碘 酸 鈉 20mg 將 蒸 包 餾 水 稍 為 加 溫 ， 加 入

63、蘇 木 素 不停 地 攪 拌 直 至 溶 解 ， 再 加 入 鉀 明 礬 ， 令 其溶 解 后 再 加 入 碘 酸 鈉 過 濾 后 即 可 使 用 ， 染色 時(shí) 間 10 20分 鐘 ， 如 果 先 用 天 表 藍(lán) 為 媒染 劑 ， 染 色 時(shí) 可 在 2 3分 鐘 。 配 制 蘇 木 素 的 注 意 事 項(xiàng)1、 蘇 木 素 可 以 配 成 5%或 10%， 讓 其 氧 化 產(chǎn)生 蘇 木 紅 ， 然 后 根 椐 每 次 配 制 溶 液 的量 ， 再 決 定 加 入 多 少 。2、 在 配 制 蘇 木 素 時(shí) ， 三 角 燒 瓶 的 選 擇 也 很重 要 ， 例 如 ， 配 制 500ml 的

64、溶 液 ， 應(yīng)選 用 1500 2000ml的 三 角 燒 瓶 ， 配 制1000ml則 可 選 3000ml的 燒 瓶 ， 這 樣 溶液 在 加 入 氧 化 汞 時(shí) ， 才 不 會(huì) 噴 出 瓶 外 。 3、 冰 醋 酸 一 定 要 在 溶 液 過 濾 后 加 入 如 果過 濾 前 加 入 ， 則 在 過 濾 時(shí) 溶 液 很 難 通過 濾 紙 ， 這 主 要 是 冰 醋 酸 草 可 造 成 對濾 紙 的 損 害 。 (二 ） 伊 紅 的 配 制1、 1%伊 紅 灑 精 的 配 制 伊 紅 （ 水 溶 ） 5g 70%-75%酒 精 500ml 取 少 許 蒸 餾 水 來 溶 解 伊 紅 或 稱

65、 曙 紅 ， 當(dāng) 完 全溶 解 后 ， 再 加 入 酒 精 ， 然 后 再 加 入 少 許 冰 醋 酸 ，此 時(shí) 溶 液 即 可 變 為 鮮 紅 色 。注 意 ： 冰 醋 酸 一 定 要 加 進(jìn) 去 如 果 沒 有 加 入 冰 醋 酸 ，細(xì) 胞 漿 將 難 以 染 得 鮮 艷 。 1、 切 片 機(jī) 的 使 用 ， 應(yīng) 如 何 注 意 保 養(yǎng) ？ 切 片 機(jī) 座 應(yīng) 注 意 平 穩(wěn) ， 切 片 時(shí) 應(yīng) 注 意 搖 轉(zhuǎn) 速度 的 快 慢 要 盡 量 保 持 均 勻 一 致 。 滑 動(dòng) 面 要 經(jīng) 常 滴上 機(jī) 油 ， 以 利 于 滑 動(dòng) 及 旋 轉(zhuǎn) 自 如 和 防 銹 ， 切 片 完后 除 去 殘

66、 蠟 ， 取 下 切 片 刀 ， 先 用 濕 布 擦 去 余 蠟 ，繼 用 干 布 擦 干 ， 再 用 油 布 擦 一 遍 ， 最 后 用 罩 蓋 好切 片 機(jī) ， 以 防 灰 塵 落 于 機(jī) 上 ， 影 響 機(jī) 器 的 運(yùn) 轉(zhuǎn) 。 2、 化 學(xué) 試 劑 使 用 時(shí) 的 注 意 事 項(xiàng)（ 1） 已 打 開 的 藥 品 或 染 色 時(shí) 的 玻 璃 瓶 染 色 液 ，每 次 用 后 即 隨 手 蓋 緊 ， 以 免 揮 發(fā) ， 易 揮 發(fā)易 吸 潮 的 藥 品 用 后 蠟 封 。（ 2） 易 燃 的 試 劑 要 遠(yuǎn) 離 火 種 ， 謹(jǐn) 防 火 災(zāi) ， 因 病理 科 有 較 多 的 易 燃 化 學(xué) 試 劑 。 （ 3） 強(qiáng) 酸 ， 強(qiáng) 堿 試 劑 或 有 腐 蝕 性 的 廢 染 液 ，不 要 直 接 倒 入 下 水 道 ， 以 免 腐 蝕 下 水道 ， 造 成 下 必 要 的 損 失 。（ 4） 易 變 質(zhì) 或 易 氧 化 失 效 的 試 劑 ， 應(yīng) 標(biāo) 明配 制 日 期 ， 妥 為 保 存 ， 有 的 只 能 一 次性 用 完 ， 因 此 ,應(yīng) 本 著 節(jié) 約 的 原 則 ，用 多 少 ，