《血紅蛋白的提取和分離》

《《血紅蛋白的提取和分離》》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《《血紅蛋白的提取和分離》（59頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、課 題 3 血 紅 蛋 白 的 提 取 和 分 離 血 紅 蛋 白 含 有 四 條 肽 鏈 ,每 條 肽 鏈 環(huán) 繞 一 個(gè) 亞鐵 血 紅 素 基 團(tuán) ， 此 基 團(tuán) 可 攜 帶 一 分 子 氧 或 一 分 子 二氧 化 碳 ， 血 紅 蛋 白 因 含 有 血 紅 素 而 呈 紅 色 。 一 、 基 礎(chǔ) 知 識(shí) :學(xué) 生 活 動(dòng) 1:1 、 分 離 生 物 大 分 子 的 基 本 思 路 是 什 么 ？2 、 不 同 蛋 白 質(zhì) 的 特 性 在 哪 些 方 面 存 在 差 異 ？3 、 本 課 題 我 們 將 利 用 血 紅 蛋 白 與 雜 質(zhì) 蛋 白 哪 方 面的 差 異 進(jìn) 行 提 純 ？

2、4 、 為 什 么 不 用 雞 的 血 紅 細(xì) 胞 而 用 人 的 血 紅 細(xì) 胞 作 為實(shí) 驗(yàn) 材 料 ？5 、 用 什 么 方 法 分 離 相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 不 同 的 蛋 白 質(zhì) ？ 一 、 基 礎(chǔ) 知 識(shí) -蛋 白 質(zhì) 提 取 和 分 離 原 理 蛋 白 質(zhì) 提 取 與 分 離 的 依 據(jù) 蛋 白 質(zhì) 的 物 理 化學(xué) 性 質(zhì) ： 形 狀 、 大 小 、 電 荷 性 質(zhì) 和 多 少 、 溶 解 度 、 吸 附 性質(zhì) 、 親 和 力 等 千 差 萬(wàn) 別 。 提 取分 離方 法 凝 膠 色 譜 法 凝 膠 電 泳 法 （ 1） 原 理 ：（ 2） 材 料大 分 子 通 過(guò) 多 孔 凝

3、 膠 顆 粒 的 間 隙 ， 路 程 短 ， 流 動(dòng) 快 ；小 分 子 穿 過(guò) 多 孔 凝 膠 顆 粒 的 內(nèi) 部 ， 路 程 長(zhǎng) ， 流 動(dòng) 慢 。多 孔 性 的 多 糖 類 化 合 物 ， 如 葡 聚 糖 、 瓊 脂 糖 。 (一 )凝 膠 色 譜 法 （ 3） 分 離 過(guò) 程 混 合 物上 柱 洗脫 大 分 子 流 動(dòng) 快小 分 子 流 動(dòng) 慢 收 集大 分 子 收 集小 分 子 洗 脫 ： 從 色 譜 柱 上 端 不 斷 注 入 緩 沖 液 ， 促 使 蛋白 質(zhì) 分 子 的 差 速 流 動(dòng) 。 (一 )凝 膠 色 譜 法 1、 什 么 是 凝 膠 ？ 2、 什 么 是 凝 膠 色 譜

4、法 ？學(xué) 生 活 動(dòng) 2:3、 凝 膠 色 譜 法 的 原 理 是 什 么 ？4、 請(qǐng) 用 自 己 的 話 總 結(jié) 出 凝 膠 色 譜 法 分 離 相 對(duì) 分 子 質(zhì)量 不 同 蛋 白 質(zhì) 的 具 體 過(guò) 程 。 1 、 什 么 是 緩 沖 液 ？2、 緩 沖 液 的 作 用 是 什 么 ？學(xué) 生 活 動(dòng) 3:3、 緩 沖 液 是 如 何 配 制 的 ？ 你 所 學(xué) 過(guò) 的 人 體血 液 的 緩 沖 物 質(zhì) 有 哪 些 ？4、 本 實(shí) 驗(yàn) 加 的 是 什 么 緩 沖 液 ？ 為 何 要 加 緩 沖 液 ？（ 二 ） 、 緩 沖 溶 液 由 弱 酸 和 相 應(yīng) 的 強(qiáng) 堿 弱 酸 鹽 組 成 。

5、如 H2CO3/NaHCO3， 醋 酸 /醋 酸 鈉 ，NaH2PO4/Na2HPO4等緩 沖 溶 液 洗 脫 劑組 成 ：配 制 ：作 用 ：調(diào) 節(jié) 緩 沖 劑 的 比 例 ， 可 配 制 不 同 pH的 緩 沖 液 。抵 制 外 界 酸 堿 對(duì) 溶 液 pH的 干 擾 而 保 持 pH穩(wěn) 定 。（ 二 ） 、 緩 沖 溶 液 1 、 什 么 是 電 泳 ？2、 影 響 電 泳 遷 移 速 度 的 因 素 有 哪 些 ？學(xué) 生 活 動(dòng) 4:4、 電 泳 分 離 各 種 分 子 的 原 理 是 什 么 ？（ 三 ） 、 電 泳3、 如 何 消 除 電 荷 對(duì) 電 泳 遷 移 速 度 的 影 響

6、 ？5 、 請(qǐng) 描 述 電 泳 的 過(guò) 程 ？ 2 凝 膠 電 泳 法 ：（ 1） 原 理 ： 不 同 蛋 白 質(zhì) 的 帶 電 性 質(zhì) 、 電 量 、 形 狀 和 大 小不 同 ， 在 電 場(chǎng) 中 受 到 的 作 用 力 大 小 、 方 向 、 阻 力不 同 ， 導(dǎo) 致 不 同 蛋 白 質(zhì) 在 電 場(chǎng) 中 的 運(yùn) 動(dòng) 方 向 和 運(yùn)動(dòng) 速 度 不 同 。 影 響 蛋 白 質(zhì) 分 子 運(yùn) 動(dòng) 速 度 的 因 素(三 )電 泳1.電 泳 的 概 念指 帶 電 粒 子 在 電 場(chǎng) 的 作 用 下 發(fā) 生 遷 移 的 過(guò) 程 . 影 響 蛋 白 質(zhì) 分 子 運(yùn) 動(dòng) 速 度 的 因 素 決 定運(yùn) 動(dòng) 方

7、 向 形 成庫(kù) 侖 力 形 成阻 力 決 定運(yùn) 動(dòng) 速 率電 荷 性 質(zhì)電 荷 量分 子 形 狀分 子 大 小 在 一 定 pH下 ， 使 蛋 白 質(zhì) 基 團(tuán) 帶 上 正 電 或 負(fù) 電 ；加 入 帶 負(fù) 電 荷 多 的 SDS， 形 成 “ 蛋 白 質(zhì) SDS復(fù) 合物 ” ， 使 蛋 白 質(zhì) 遷 移 速 率 僅 取 決 于 分 子 大 小 。 （ 2） 分 離 方 法 ：（ 3） 分 離 過(guò) 程 ： 瓊 脂 糖 凝 膠 電 泳 、 聚 丙 烯 酰 胺 凝 膠 電 泳 等 。(三 )電 泳 電 泳 檢 測(cè) 結(jié) 果 二 、 實(shí) 驗(yàn) 操 作蛋 白 質(zhì) 的 提 取 和 分 離 一 般 分 為 四 步

8、 ：（ 1） 樣 品 處 理 ： 包 括 洗 滌 紅 細(xì) 胞 ； 血 紅 蛋 白 釋 放 ；離 心 分 離 等 操 作 收 集 到 的 血 紅 蛋 白 溶 液 。（ 2） 粗 分 離 ： 透 析 除 去 分 子 較 小 的 雜 質(zhì) 。（ 3） 純 化 ： 通 過(guò) 凝 膠 色 譜 法 將 分 子 量 較 大 的 雜 質(zhì) 蛋白 質(zhì) 除 去 。（ 4） 純 度 鑒 定 ： 通 過(guò) 聚 丙 烯 酰 胺 凝 膠 電 泳 鑒 定 。 （ 一 ） 樣 品 處 理1、 紅 細(xì) 胞 的 洗 滌 ： 目 的 是 去 除 雜 蛋 白 。 要 加 入 檸 檬 酸 鈉 防 止 血 液凝 固 ； 離 心 將 血 液 分

9、層 ， 用 膠 頭 吸 管 吸 出 黃 色 血 漿 ；用 生 理 鹽 水 洗 滌 。2、 血 紅 蛋 白 的 釋 放 ： 在 蒸 餾 水 和 甲 苯 作 用 下 ， 紅 細(xì) 胞 破 裂 釋 放3、 分 離 血 紅 蛋 白 溶 液 ： 離 心 分 層 ； 濾 紙 過(guò) 濾 去 除 脂 溶 性 沉 淀 層 ； 分 液漏 斗 分 出 紅 色 透 明 液 體 。4、 透 析 ： 裝 入 透 析 袋 并 置 于 磷 酸 緩 沖 液 中 （ PH為7.0） 透 析 。 樣 品 處 理粗 分 離純 化純 度 鑒 定 血 液 組 成 成 分 1.洗 滌 紅 細(xì) 胞 2.釋 放 血 紅 蛋 白 3.分 離 血 紅

10、 蛋 白 4.透 析 血 紅 蛋 白二 、 實(shí) 驗(yàn) 操 作 跳 轉(zhuǎn) 血 液 組 成 成 分閱 讀 思 考 ：1. 血 液 由 _和 _兩 部 分 組 成 。2. 血 細(xì) 胞 中 _細(xì) 胞 數(shù) 量 最 多 ， 紅 細(xì) 胞 的 含量 最 高 的 有 機(jī) 化 合 物 是 _。3. 該 化 合 物 是 由 _和 _構(gòu) 成 的 ， 其 中 每 個(gè) 亞 基 中 都 含 有 一 個(gè) 能 與 O2和CO2結(jié) 合 的 _基 團(tuán) 。血 漿 血 細(xì) 胞紅 細(xì) 胞 血 紅 蛋 白2條 -肽 鏈 2條 -肽 鏈 亞 鐵 血 紅 素 返 回 1.洗 滌 紅 細(xì) 胞閱 讀 思 考 ： 洗 滌 的 目 的 是 什 么 ？洗

11、滌 過(guò) 程 ：血 液100mL3g檸 檬 酸 鈉 低 速 離 心2 min 紅 細(xì) 胞血 漿吸出血漿紅 細(xì) 胞5倍體積生理鹽水?dāng)嚢?0min重 復(fù) 洗 滌 3次 ， 直 至 上 清 液 沒(méi) 有 黃 色 采 集 得 到 雞 血 初 次 離 心 后 的 結(jié) 果 3次 洗 滌 后 的 結(jié) 果 返 回 2.釋 放 血 紅 蛋 白閱 讀 思 考 ：1. 釋 放 血 紅 蛋 白 過(guò) 程 中 ， 在 洗 滌 好 的 紅 細(xì) 胞 加 入 了哪 些 物 質(zhì) ？2. 為 了 加 速 釋 放 過(guò) 程 ， 采 取 了 什 么 措 施 ？ 目 的 分 析 ： 蒸 餾 水 的 作 用 是 _。 加 入 甲 苯 的 作 用

12、 是 _。 充 分 攪 拌 的 目 的 是 _。使 紅 細(xì) 胞 大 量 吸 水 脹 裂溶 解 紅 細(xì) 胞 的 細(xì) 胞 膜加 速 紅 細(xì) 胞 的 破 裂 (2)血 紅 蛋 白 的 釋 放 ： 加 蒸 餾 水 到 原 血 液 體 積 ， 再 加 40 體 積 的 甲 苯 ，置 于 磁 力 攪 拌 器 上 充 分 攪 拌 10分 鐘 （ 加 速 細(xì) 胞 破裂 ） ,細(xì) 胞 破 裂 釋 放 出 血 紅 蛋 白 。 磁 力 攪 拌 器 返 回 3.分 離 血 紅 蛋 白分 離 過(guò) 程紅 細(xì) 胞混 合 液高 速 離 心10min 離心管濾 紙過(guò)濾脂類物質(zhì)燒杯 (3)分 離 血 紅 蛋 白 溶 液 ： 過(guò)

13、程 ： 將 攪 拌 好 混 合 液 轉(zhuǎn) 移 到 離 心 管 內(nèi) ， 以2000r/min的 速 度 離 心 10 min。 試 管 中 溶 液 層 次 ： 第 1層 （ 最 上 層 ） ： 甲 苯層 （ 無(wú) 色 透 明 ） ； 第 2層 （ 中 上 層 ） ： 脂 溶 性 物 質(zhì) 沉淀 層 （ 白 色 薄 層 固 體 ） ； 第 3層 （ 中 下 層 ） ： 血 紅 蛋白 的 水 溶 液 層 （ 紅 色 透 明 液 體 ） ； 第 4層 （ 最 下 層 ） ：雜 質(zhì) 沉 淀 層 （ 暗 紅 色 ） 。 分 離 ： 用 濾 紙 過(guò) 濾 ， 除 去 脂 溶 性 沉 淀 層 ， 于分 液 漏 斗 中

14、 靜 置 片 刻 后 ， 分 出 下 層 的 紅 色 透 明 液 體 。 甲 苯 層 （ 無(wú) 色 透 明 ）白 色 薄 層 固 體紅 色 透 明 液 體雜 質(zhì) 沉 淀 層 （ 暗 紅 色 ）試 管 中 溶 液 層 次 返 回 4.透 析 血 紅 蛋 白 20mmol/L磷酸緩沖液1mL 1mL 利 用 透 析 袋 透 析 透 析 過(guò) 程 返 回 純 化 凝 膠 色 譜 操 作1.凝 膠 色 譜 柱 的 制 作 ：2.凝 膠 色 譜 柱 的 裝 填 ： 教 材 圖 5 193.樣 品 的 加 入 和 洗 脫 返 回 （ 二 ） 凝 膠 色 譜 操 作（ 1） 凝 膠 色 譜 柱 的 制 作 ：

15、取 長(zhǎng) 40厘 米 ， 內(nèi) 徑 1.6厘 米 的 玻 璃 管 ， 兩 端 需 用 砂 紙磨 平 。 底 塞 的 制 作 ： 打 孔 挖 出 凹 穴 安 裝 移 液 管 頭 部 覆 蓋 尼 龍 網(wǎng) ， 再 用 100目 尼 龍 紗 包 好 ， 插 到 玻 璃 管 的 一端 。 注 意 事 項(xiàng) ： 底 塞 中 插 入 的 玻 璃 管 的 上 部 不 得 超 出橡 皮 塞 的 凹 穴 底 面 ， 否 則 難 以 鋪 實(shí) 尼 龍 網(wǎng) ， 還 會(huì) 導(dǎo) 致液 體 殘 留 ， 蛋 白 質(zhì) 分 離 不 徹 底 。 頂 塞 的 制 作 ： 打 孔 安 裝 玻 璃 管 。 組 裝 ： 將 上 述 三 者 按 相

16、應(yīng) 位 置 組 裝 成 一 個(gè) 整 體 。 安 裝 其 他 附 屬 結(jié) 構(gòu) 。 裝 配 好 的 凝 膠 柱 返 回 材 料 ： 交 聯(lián) 葡 聚 糖 凝 膠 G-75； 20mmol/L磷 酸 緩 沖 液裝 填 :2.凝 膠 色 譜 柱 的 裝 填 ：步 驟 操 作 要 求 立 刻 用 磷 酸 緩 沖 液 洗 滌 平 衡 12h洗 滌 平 衡 一 次 性 緩 慢 倒 入 ； 輕 輕 敲 打裝 填 懸 浮 液 凝 膠 顆 粒 洗 脫 液 沸 水 浴 凝 膠 顆 粒 蒸 餾 水 充 分 溶 脹根 據(jù) 色 譜 柱 體 積 計(jì) 算 凝 膠 用 量色 譜 柱 垂 直 固 定 在 支 架 上配 制 懸 浮

17、液計(jì) 算 稱 量 凝 膠固 定 色 譜 柱 （ 2） 凝 膠 色 譜 柱 的 裝 填 凝 膠 的 選 擇 ： A、 材 料 ： 交 聯(lián) 葡 聚 糖 凝 膠 （ G-75） 。 B、 代 表 意 義 ： “ G” 表 示 凝 膠 的 交 聯(lián) 程 度 ， 膨 脹程 度 及 分 離 范 圍 。 75表 示 凝 膠 的 得 水 值 ， 即 每 克 凝 膠 膨脹 時(shí) 吸 水 7.5克 。 凝 膠 的 前 處 理 ： 配 制 凝 膠 懸 浮 液 ： 計(jì) 算 并 稱 取 一定 量 的 凝 膠 浸 泡 于 蒸 餾 水 或 洗 脫 液 中 充 分 溶 脹 后 ， 配 成凝 膠 懸 浮 液 。 凝 膠 色 譜 柱

18、 的 裝 填 方 法 ： A、 固 定 ： 將 色 譜 柱 裝置 固 定 在 支 架 上 。 B、 裝 填 ： 將 凝 膠 懸 浮 液 一 次 性 的 裝填 入 色 譜 柱 內(nèi) ， 裝 填 時(shí) 輕 輕 敲 動(dòng) 色 譜 柱 ， 使 凝 膠 填 裝 均勻 。 注 意 ： 1、 凝 膠 裝 填 時(shí) 盡 量 緊 密 ， 以 降 低 凝 膠 顆 粒之 間 的 空 隙 。 2、 裝 填 凝 膠 柱 時(shí) 不 得 有 氣 泡 存 在 ： 因 為氣 泡 會(huì) 攪 亂 洗 脫 液 中 蛋 白 質(zhì) 的 洗 脫 次 序 ， 降 低 分 離 效 果 。 洗 滌 平 衡 ： 裝 填 完 畢 后 ，立 即 用 緩 沖 液 洗

19、 脫 瓶 ， 在 50cm高 的 操 作 壓 下 ， 用 300ml的20mmol/l的 磷 酸 緩 沖 液 （ pH為7.0） 充 分 洗 滌 平 衡 12小 時(shí) 。 注 意 ： 1、 洗 脫 液 面 不 要低 于 凝 膠 表 面 ， 否 則 可 能 有 氣泡 混 入 ， 影 響 液 體 在 柱 內(nèi) 的 流動(dòng) 與 最 終 生 物 大 分 子 物 質(zhì) 的 分離 效 果 。 2、 不 能 發(fā) 生 洗 脫 液流 干 ， 露 出 凝 膠 顆 粒 的 現(xiàn) 象 。返 回 3.樣 品 加 入 與 洗 脫 調(diào) 節(jié) 緩 沖 液 面 ： 打 開(kāi) 下 端 出 口 ， 使 柱 內(nèi) 緩 沖 液 緩 慢 下 降到 與

20、凝 膠 面 平 齊 ， 關(guān) 閉 出 口 。 滴 加 透 析 樣 品 ： 吸 管 吸 1ml樣 品 加 到 色 譜 柱 的 頂 端 ， 滴 加樣 品 時(shí) ， 吸 管 管 口 貼 著 管 壁 環(huán) 繞 移 動(dòng) 加 樣 ， 同 時(shí) 注 意 不 要 破 壞凝 膠 面 。 樣 品 滲 入 凝 膠 床 ： 加 樣 后 打 開(kāi) 下 端 出 口 ， 使 樣 品 滲 入 凝膠 床 內(nèi) ， 等 樣 品 完 全 進(jìn) 入 凝 膠 層 后 ， 關(guān) 閉 下 端 出 口 。 洗 脫 ： 小 心 加 入 pH=7.0 的 20mmol/l的 磷 酸 緩 沖 液 到 適 當(dāng)高 度 ， 連 接 緩 沖 液 洗 脫 瓶 ， 打 開(kāi)

21、下 端 出 口 進(jìn) 行 洗 脫 。 收 集 ： 待 紅 色 的 蛋 白 質(zhì) 接 近 色 譜 柱 底 端 時(shí) ， 用 試 管 收 集流 出 液 ， 每 5ml收 集 一 試 管 ， 連 續(xù) 收 集 。 （ 在 分 離 過(guò) 程 中 ， 如果 紅 色 區(qū) 帶 均 勻 一 致 的 移 動(dòng) ， 說(shuō) 明 色 譜 柱 制 作 成 功 ） 注 意 ： 正 確 的 加 樣 操 作 ： 1、 不 要 觸 及 并 破 壞 凝 膠 面 。 2、貼 壁 加 樣 。 3、 使 吸 管 管 口 沿 管 壁 環(huán) 繞 移 動(dòng) 。 3.樣 品 的 加 入 和 洗 脫 3.樣 品 加 入 與 洗 脫注 意 ： 正 確 的 加 樣

22、操 作 是 ： 1、 不 要 觸 及 并 破 壞 凝 膠 面 。2、 貼 壁 加 樣 。 3、 使 吸 管 管 口 沿 管 壁 環(huán) 繞 移 動(dòng) 。 收 集 得 到 的 純 化 后 的 血 紅 蛋 白 注 意 事 項(xiàng)1. 紅 細(xì) 胞 的 洗 滌 ： 洗 滌 次 數(shù) 不 能 過(guò) 少 ； 低 速 、 短 時(shí) 離 心 。2. 凝 膠 的 預(yù) 處 理 ： 沸 水 浴 法 時(shí) 間 短 ， 還 能 除 去 微 生 物 和 氣 泡3. 色 譜 柱 的 裝 填 ： 裝 填 盡 量 緊 密 ， 降 低 顆 粒 間 隙 ； 無(wú) 氣 泡 ； 洗脫 液 不 能 斷 流 。4. 色 譜 柱 成 功 標(biāo) 志 ： 紅 色 區(qū)

23、 帶 均 勻 一 致 地 移 動(dòng) 。為 什 么 ？返 回 觀 察 你 處 理 的 血 液 樣 品 離 心 后 是 否 分 層 （ 見(jiàn) 教 科書(shū) 圖 5-18） ， 如 果 分 層 不 明 顯 ， 可 能 是 洗 滌 次 數(shù) 少 、未 能 除 去 血 漿 蛋 白 的 原 因 。 此 外 ， 離 心 速 度 過(guò) 高 和 時(shí)間 過(guò) 長(zhǎng) ， 會(huì) 使 白 細(xì) 胞 和 淋 巴 細(xì) 胞 一 同 沉 淀 ， 也 得 不 到純 凈 的 紅 細(xì) 胞 ， 影 響 后 續(xù) 血 紅 蛋 白 的 提 取 純 度 。三 、 實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 分 析 與 評(píng) 價(jià)1、 你 是 否 完 成 了 對(duì) 血 液 樣 品 的 處 理 ？

24、你 能 描 述 處理 后 的 樣 品 發(fā) 生 了 哪 些 變 化 嗎 ？ 2、 你 裝 填 的 凝 膠 色 譜 柱 是 否 有 氣 泡 產(chǎn) 生 ？ 你 的 色譜 柱 裝 填 得 成 功 嗎 ？ 你 是 如 何 判 斷 的 ？ 由 于 凝 膠 是 一 種 半 透 明 的 介 質(zhì) ， 因 此 可 以 在 凝 膠 柱旁 放 一 支 與 凝 膠 柱 垂 直 的 日 光 燈 ， 檢 查 凝 膠 是 否 裝 填 得均 勻 。 此 外 ， 還 可 以 加 入 大 分 子 的 有 色 物 質(zhì) ， 例 如 藍(lán) 色葡 聚 糖 2000或 紅 色 葡 聚 糖 ， 觀 察 色 帶 移 動(dòng) 的 情 況 。 如果 色 帶

25、 均 勻 、 狹 窄 、 平 整 ， 說(shuō) 明 凝 膠 色 譜 柱 的 性 能 良 好 。如 果 色 譜 柱 出 現(xiàn) 紋 路 或 是 氣 泡 ， 輕 輕 敲 打 柱 體 以 消 除 氣泡 ， 消 除 不 了 時(shí) 要 重 新 裝 柱 。 如 果 凝 膠 色 譜 柱 裝 填 得 很 成 功 、 分 離 操 作 也 正 確的 話 ， 能 清 楚 地 看 到 血 紅 蛋 白 的 紅 色 區(qū) 帶 均 勻 、 狹 窄 、平 整 ， 隨 著 洗 脫 液 緩 慢 流 出 ； 如 果 紅 色 區(qū) 帶 歪 曲 、 散亂 、 變 寬 ， 說(shuō) 明 分 離 的 效 果 不 好 ， 這 與 凝 膠 色 譜 柱 的裝 填 有

26、 關(guān) 。 3、 你 能 觀 察 到 蛋 白 質(zhì) 的 分 離 過(guò) 程 中 ， 紅 色 區(qū) 帶的 移 動(dòng) 嗎 ？ 請(qǐng) 描 述 紅 色 區(qū) 帶 的 移 動(dòng) 情 況 ， 并 據(jù) 此 判斷 分 離 效 果 ？ 知 識(shí) 總 結(jié)血紅蛋白的提取和分離 蛋 白 質(zhì) 分 子 的 差 異 性凝 膠 色 譜 法 原 理 分 離 過(guò) 程凝 膠 電 泳 法緩 沖 溶 液 組 成 作 用蛋 白 質(zhì) 的提 取 分 離 樣 品 處 理 粗 分 離純 化純 度 鑒 定 教 學(xué) 反 饋 1 凝 膠 色 譜 法 是 根 據(jù) （ ） 分 離 蛋 白 質(zhì) 的 有 效 方 法 。 A分 子 的 大 小 B相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 的 大 小

27、 C帶 電 荷 的 多 少 D溶 解 度2 緩 沖 液 的 作 用 是 ： 在 一 定 范 圍 內(nèi) ， 抵 制 外 界 的 影 響 來(lái)維 持 （ ） 基 本 不 變 。 A溫 度 B pH C滲 透 壓 D氧 氣 濃 度BB 3 電 泳 是 指 帶 電 粒 子 在 電 場(chǎng) 的 作 用 下 向 著 與 其 所 帶 電荷 （ ） 的 電 極 移 動(dòng) 。 A相 同 B相 反 C相 對(duì) D相 向4. 哺 乳 動(dòng) 物 和 人 的 成 熟 的 紅 細(xì) 胞 中 的 （ ） 與氧 氣 的 運(yùn) 輸 有 關(guān) 。 A血 紅 蛋 白 B肌 紅 蛋 白 C肌 動(dòng) 蛋 白 D肌 球 蛋 白B A 5 血 液 由 血 漿

28、和 各 種 血 細(xì) 胞 組 成 ， 其 中 （ ） 的含 量 最 多 。 A白 細(xì) 胞 B血 小 板 C紅 細(xì) 胞 D淋 巴 細(xì) 胞6 為 防 止 血 液 凝 固 ， 在 采 血 容 器 中 要 預(yù) 先 加 入 抗 凝血 劑 （ ） 。 A. NaCl B.甲 苯 C.蒸 餾 水 D.檸 檬 酸 鈉 CD 7 將 攪 拌 好 的 混 合 液 轉(zhuǎn) 移 到 離 心 管 中 ， 離 心 后 ， 可 以 明顯 看 到 試 管 中 的 溶 液 分 為 4層 ， 其 中 第 3層 是 （ ） A無(wú) 色 透 明 的 甲 苯 層 B脂 溶 性 物 質(zhì) 的 沉 淀 層 C血 紅 蛋 白 的 水 溶 液 D其 他

29、 雜 質(zhì) 的 暗 紅 色 沉 淀 物 C 1、 隨 著 人 類 跨 入 蛋 白 質(zhì) 組 時(shí) 代 ， 對(duì) 蛋 白 質(zhì) 的 研 究 和應(yīng) 用 越 來(lái) 越 深 入 ， 首 先 要 做 的 一 步 是A 弄 清 各 種 蛋 白 質(zhì) 的 空 間 結(jié) 構(gòu)B 弄 清 各 種 蛋 白 質(zhì) 的 功 能C 弄 清 各 種 蛋 白 質(zhì) 的 合 成 過(guò) 程D 獲 得 高 純 度 的 蛋 白 質(zhì)練 習(xí) 鞏 固 2、 用 凝 膠 色 譜 法 分 離 蛋 白 質(zhì) 的 過(guò) 程 中 ， 關(guān) 于 蛋 白 質(zhì)的 敘 述 ， 正 確 的 是A 相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 較 小 的 蛋 白 質(zhì) 行 程 大 于 相 對(duì) 分 子 質(zhì)量 較

30、大 的 蛋 白 質(zhì)B 相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 較 小 的 蛋 白 質(zhì) 行 程 小 于 相 對(duì) 分 子 質(zhì)量 較 大 的 蛋 白 質(zhì)C 相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 較 小 的 蛋 白 質(zhì) 行 程 等 于 相 對(duì) 分 子 質(zhì)量 較 大 的 蛋 白 質(zhì)D 二 者 根 本 無(wú) 法 比 較 3、 使 用 SDS-聚 丙 烯 酰 胺 電 泳 過(guò) 程 中 ， 不 同 蛋 白 質(zhì)的 電 泳 遷 移 率 完 全 取 決 于A 電 荷 的 多 少 B 分 子 的 大 小C 肽 鏈 的 多 少 D 分 子 形 狀 的 差 異4、 在 采 血 容 器 中 加 入 檸 檬 酸 鈉 的 目 的 是A 調(diào) 節(jié) pH B 維 持 紅 細(xì) 胞 的 能 量 供 應(yīng)C 防 止 微 生 物 生 長(zhǎng) D 防 止 血 液 凝 固 5、 一 分 子 血 紅 蛋 白 最 多 可 攜 帶 的 O2分 子 數(shù) 和 CO2分 子 數(shù) 分 別 是A 4、 2 B 4、 4 C 2、 1 D、 1、 16、 記 住 樣 品 處 理 中 的 血 紅 蛋 白 溶 液 離 心 后 分 層 順序 自 上 而 下 是 ：有 機(jī) 溶 劑 -脂 類 物 質(zhì) -血 紅 蛋 白 溶 液 -紅 細(xì) 胞 破 碎 物 沉 淀