《人教版高中生物選修1專題5課題2《多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段》導(dǎo)學(xué)案》由會員分享,可在線閱讀,更多相關(guān)《人教版高中生物選修1專題5課題2《多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段》導(dǎo)學(xué)案(2頁珍藏版)》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、人教版高中生物選修1專題5課題2《多聚酶鏈?zhǔn)椒?
應(yīng)擴(kuò)增dna片段》word導(dǎo)學(xué)案
一、基礎(chǔ)知識
1.PCR原理填寫下列表格
參與的組分
在DNA復(fù)制中的作用
解旋晦
DNA母鏈
合成子鏈的原料
DNA聚合酶
引物
DNA的兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械模ǔNA的羥基末端稱為,而磷酸基團(tuán)的末端稱為。DXA聚合酶不能開始合成DNA,而只能,因此,DNA復(fù)
制需要引物。DNA的合成方向總是,在DNA的復(fù)制過程中,復(fù)制的前提是o在體外可通過操縱
來實現(xiàn)。在的溫度范疇內(nèi),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體,雙鏈分開,那個過程稱
為oPCR利用了DNA的原理,通過操縱溫度來
2、操縱雙鏈的解聚與結(jié)
合。由于PCR過程的溫度高,導(dǎo)致DNA聚合酶失活,后來的DNA聚合酶的發(fā)覺和應(yīng)
用,大大增加了PCR的效率。PCR反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中提供:,,
,,同時通過■操縱溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行。2.PCR的反應(yīng)過程
PCR一樣要經(jīng)歷循環(huán),每次循環(huán)能夠分為、和三步。
從第二輪循環(huán)開始,上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反應(yīng),同時由延伸而成
的DNA單鏈會與.結(jié)合,進(jìn)行DNA的延伸,如此,DNA聚合酶只能,使這段固定長度的序列成指數(shù)擴(kuò)增。3一實驗操作在實驗室中,做PCR通常使用,它是一種薄壁塑料管。具體操作時,用微量移液器,按PCR反應(yīng)體系的配方,在:中依次加入
3、各組分,,再參照下表的設(shè)置設(shè)計好PCR儀的循環(huán)程序即可。4.操作提示
為匯光外源DNA等|,、|或溝小兔,PCRg哈中使用的、、以及蒸噩水等在使用前必須進(jìn)行PCR所用的緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份,并在一
儲存。使用前,將所需試劑從冰箱拿出,放在冰塊上緩慢融解。在微量離心管中添加反應(yīng)成分時,移液管上的槍頭要。[疑難點(diǎn)撥]1.PCR技術(shù)簡介
PCR是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù),它能以極少量的DNA為模板,在幾小時?內(nèi)復(fù)制出上百萬份的D叫拷貝。這項技術(shù)有效地解決了因為樣品中DNA含量太低而難以對樣品進(jìn)行分析研究的咨詢題,被廣泛的應(yīng)用于遺傳疾病的診斷、刑偵破案、古生物學(xué)、基因克隆和DXA序列測
4、定等各方面。
2.細(xì)胞內(nèi)參與DNA復(fù)制的各種組成成分及其作用
①解旋酶:打開DNA雙鏈②D\A母鏈:提供DX丸復(fù)制的模板③4種脫氧核甘酸:合成子
鏈的原料④DXA聚合酶:催化合成DNA子鏈⑤引物:使DNA聚合酶能夠從引物的3.端開始連接脫氧核甘酸(引物是一小段DNA或RNA,它能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對。用于PCR的引物長度通常為20—30個核昔酸)3.DNA的合成方向
DNA的兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?,通常將DXA的羥基末端稱為3-端,而磷酸基團(tuán)的末端稱為51端。DXA聚合酶不能從頭開始合成DXA,而只能從3.端延伸DNA鏈,因此,DXA復(fù)制需要引物。當(dāng)引物與DXA母鏈通過堿基互
5、補(bǔ)配對結(jié)合后,DNA聚合酶就能從引物的3端開始延伸DNA鏈,DNA的合成方向總是從子鏈的51端向3端延伸。
4. PCR的反應(yīng)過程
PCR一樣要經(jīng)歷三十多次循環(huán),每次循環(huán)能夠分為變性(當(dāng)溫度上升到90℃以上時,雙鏈DNA解聚為單鏈)、復(fù)性(溫度下降到50℃左右,,兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合)和延伸(溫度上升到72℃左右,溶液中的四種脫氧核甘酸在DNA聚合酶的作用下,依照堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈)三步。從第二輪循環(huán)開,始,上一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反應(yīng),同時由引物【延伸而成的DNA單鏈會與引物II結(jié)合,進(jìn)行DNA的延伸,如此,DXA聚合酶只能特異的復(fù)制處于兩個引物之間的DNA序列,使這段固定長度的序列成指數(shù)擴(kuò)增。
5. PCR技術(shù)與DNA的復(fù)制
PCR反應(yīng)是通過操縱溫度使DXA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行。PCR反應(yīng)的實質(zhì)確實是DNR復(fù)制,因此有關(guān)PCR反應(yīng)的題目與DNA復(fù)制的原理相同,運(yùn)算方法也大體相同。例如:PCR反應(yīng)中的目的片段一樣以2n的方式積存,其中n為反應(yīng)循環(huán)次數(shù)。一個DNA片段在30次循環(huán)后反應(yīng)物中大約有10億個如此的片段。(280)