江蘇省灌南高級中學高三生物 微生物的培養(yǎng)與應用課件

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1、 了解有關微生物及培養(yǎng)基的基礎知識，了解有關微生物及培養(yǎng)基的基礎知識，進行無菌技術的操作，進行微生物的培養(yǎng)。進行無菌技術的操作，進行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標：一、課題目標： 掌握掌握培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌和和平平板劃線法板劃線法等基本操作技術，熟練、規(guī)范地等基本操作技術，熟練、規(guī)范地進行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。進行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。 無菌技術的操作。無菌技術的操作。二、課題重點和難點：二、課題重點和難點：三、技能目標：三、技能目標：微生物包括哪五類：微生物包括哪五類：真菌真菌原生動物原生動物特點：特點：結(jié)構(gòu)簡單結(jié)構(gòu)簡單, ,形體微小形體微小. .通

2、常要用光學顯微鏡或通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結(jié)構(gòu)電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結(jié)構(gòu). . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、基礎知識： (一)微生物細菌的外形與大小細菌：細菌：單細胞不分枝的原核微生物單細胞不分枝的原核微生物。細菌細胞細菌細胞，通常用適當染料，通常用適當染料后顯微鏡觀后顯微鏡觀察察圖圖1-1 常見的三種細菌典型形態(tài)常見的三種細菌典型形態(tài)A.球菌球菌 B.桿菌桿菌 C.弧菌弧菌細菌細胞由外向里依次有、菌菌（、，。細菌的構(gòu)造*細胞壁細胞壁有哪些功能？細胞壁有哪些功能？ 傷傷寒寒桿桿菌菌細細胞胞壁壁中中含含毒毒素

3、素 有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做體，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌. .菌落： 單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一單

4、個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體，叫做菌落落。 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細菌的菌落特征細菌的菌落特征因種而異因種而異 細菌的營養(yǎng)類型 根據(jù)細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為根據(jù)細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。兩大營養(yǎng)類型。 自養(yǎng)菌自養(yǎng)菌: :分類分類, ,舉例舉例? ? 異養(yǎng)菌異養(yǎng)菌: : 腐生菌腐生菌 寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌光合自養(yǎng)型光合自養(yǎng)型:光合細菌光合細菌化能自養(yǎng)型化能自養(yǎng)型:硝化細菌硝化細菌,鐵細菌鐵細

5、菌,硫細菌硫細菌1 1、結(jié)構(gòu)：、結(jié)構(gòu)：單細胞原核單細胞原核分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）真菌真菌1、培養(yǎng)基可以分為哪兩類？2、培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要滿足哪些要求？3、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是什么？ 4、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面 5、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟 7、如何倒平板？（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。（1 1）按物理狀態(tài)分：）按物理狀

6、態(tài)分：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種保存及。其中固體培養(yǎng)基用于菌種保存及分離、鑒定菌落、活菌計數(shù)等，半固體培養(yǎng)基可分離、鑒定菌落、活菌計數(shù)等，半固體培養(yǎng)基可觀察微生物的運動，液體培養(yǎng)基常用于發(fā)酵工業(yè)。觀察微生物的運動，液體培養(yǎng)基常用于發(fā)酵工業(yè)。（2 2）按功能分：）按功能分：選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基。（3 3）按成分分：）按成分分：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基。1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離

7、酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導入了目的基因的受體細胞分離導入了目的基因的受體細胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的核苷的培養(yǎng)基培養(yǎng)基: :分離雜交瘤細胞分離雜交瘤細胞天然培養(yǎng)基有血清、血漿、天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和和組織提取液（如雞胚和牛胚

8、浸液）。牛胚浸液）。優(yōu)點：優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好養(yǎng)效果好缺點：缺點：來源受限來源受限; ;成分復雜，成分復雜，影響對某些實驗產(chǎn)物的提影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析取和實驗結(jié)果的分析; ;易發(fā)易發(fā)生支原體污染生支原體污染; ; 根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。物質(zhì)。 優(yōu)點：優(yōu)點：標準化生產(chǎn)，組分標準化生產(chǎn)，組分和含量相對固定和含量相對固定;

9、;成本低成本低 缺點：缺點： 缺少某些成分，缺少某些成分，不能完全滿足體外細胞生長不能完全滿足體外細胞生長需要。需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: :天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水水、碳源碳源、和和氮源氮源、 無機鹽無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對滿足微生物生長對pHpH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)特殊營養(yǎng)物質(zhì), ,例例如如: :生長因子生長因子(即細菌生長必需，而自身不即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶) )以及以及氧氣氧氣、二氧化碳二氧化碳、滲

10、透壓滲透壓等的要求。等的要求。 培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)2、培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要滿足哪些要求？1碳源、氮源及生長因子的來源與功能歸納碳源、氮源及生長因子的來源與功能歸納營養(yǎng)要素營養(yǎng)要素來源來源功能功能碳碳源源無機碳無機碳源源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無機等含碳無機物物構(gòu)成細胞物質(zhì)構(gòu)成細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；和一些代謝產(chǎn)物；有機碳既是碳有機碳既是碳源又是能源源又是能源有機碳有機碳源源糖類、脂質(zhì)、蛋白糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機酸、石油、質(zhì)、有機酸、石油、花生粉餅等花生粉餅等氮源氮源無機氮源無機氮源無機氮：無機氮：NH3、銨鹽、銨鹽、硝酸鹽、硝酸鹽、N2等等將無機

11、氮合成含氨的將無機氮合成含氨的代謝產(chǎn)物代謝產(chǎn)物有機氮源有機氮源牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸核酸、尿素、氨基酸合成蛋白質(zhì)、核酸及合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物含氮的代謝產(chǎn)物生長因子生長因子維生素、氨基酸、堿基維生素、氨基酸、堿基酶和核酸的組成成酶和核酸的組成成分；分；參與代謝過程參與代謝過程中的酶促反應中的酶促反應血清中含有：血清中含有：多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）鐵蛋白等）多種金屬離子；多種金屬離子； 激素；激素；促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。球蛋白、膠原等。各種生長因子各種生長因子轉(zhuǎn)移蛋白

12、轉(zhuǎn)移蛋白不明成分不明成分 人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀生長固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：無動力無動力 有動力有動力( (彌散彌散) )( (是否運動是否運動) ) 4.4.培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌液體培養(yǎng)基：增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保

13、種3、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是什么？ 4、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面 5、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？消毒與滅菌消毒與滅菌消毒：指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌：指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。滅菌與消毒技術是微生物有關工作中最普滅菌與消毒技術是微生物有關工作中最普通也是最重要的技術。通也是最重要的技術。（）（）消毒定義：消毒定義：利用化學或物理方法，殺死大部份致病微生物利用化學或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。區(qū)分為的過程。區(qū)分為高程度消毒高程度消毒、中程度消毒中程度消毒、低程

14、度低程度消毒消毒三種方式。三種方式。2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2 2）滅菌的定義：）滅菌的定義：以化學劑或物理方法消滅以化學劑或物理方法消滅所有所有微生物，包微生物，包括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而括所有細菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達到達到完全無菌完全無菌之過程。之過程。 滅菌消毒技術是微生物有關工作中最普通滅菌消毒技術是微生物有關工作中最普通也是最重要的技術。也是最重要的技術。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min

15、或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化學藥劑消毒法、化學藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔爾酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒滅等進行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線消毒、紫外線消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2 2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170 160-170 下加下加熱熱1-2h1-2h。3 3、高壓蒸氣滅菌：、高壓蒸氣滅菌：100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min.15-30min.(2)滅菌的方法：滅菌的方法： 最常用的滅菌方法是

16、最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌高溫干熱滅菌。為了防止。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中

17、的其他微生物不能通過。過，而空氣中的其他微生物不能通過。 而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設計的。專為防止空氣中微生物的污染而設計的。 分類分類定義定義方法方法滅菌法滅菌法殺滅一切微生物殺滅一切微生物 物理法：熱力、輻射、微物理法：熱力、輻射、微波、等離子體波、等離子體化學法：醛類、烷化劑化學法：醛類、烷化劑高效消高效消毒法毒法殺滅一切致病微殺滅一切致病微生物生物紫外線、含氯劑、臭氧、紫外線、含氯劑、臭氧、復配劑等復配劑等中效消中效消毒法毒法殺滅除芽孢外的殺滅除芽孢外的致病微生物致病微生物超聲波、碘類、醇類、酚超聲

18、波、碘類、醇類、酚類類低效消低效消毒法毒法殺滅細菌繁殖體、殺滅細菌繁殖體、親脂病毒親脂病毒單鏈季胺鹽、雙胍類、中單鏈季胺鹽、雙胍類、中草藥、金屬離子草藥、金屬離子1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7、菌種的保存、菌種的保存1.1.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。如果需要，請選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2）

19、玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒。）需要消毒。三、實驗操作三、實驗操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）1 1計算、稱量計算、稱量2 2溶化溶化3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 64 4過濾：這一步可以省去過濾：這一步可以省去。5 5分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過引起污染。分裝三角燒瓶的量以不

20、超過三角燒瓶容積的一半為宜。三角燒瓶容積的一半為宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步驟操作步驟 8 8滅菌滅菌: : 將將50ml50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為鍋，在壓力為100kPa100kPa、溫度為、溫度為121121，滅菌，滅菌151530min30min。將培養(yǎng)基用舊報紙包裹，放入干。將培養(yǎng)基用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2h2h。 9 9倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50

21、50 左右時，在酒精燈附左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）近倒平板。（倒平板操作見課本）2d2d后觀察平后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種板，無雜菌污染才可用來接種. . 10 10無菌檢查：無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培的溫室中培養(yǎng)養(yǎng)24482448小時，以檢查滅菌是否徹底。小時，以檢查滅菌是否徹底。 1.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時，左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基

22、的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。以進行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝

23、結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌接種方法有：接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃

24、線法: :通過接種環(huán)在瓊脂固體培通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作, ,將聚集的菌鐘將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后, ,可以分離到由一個細胞可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體, ,這就這就是菌落是菌落. . 平板劃線的操作方法平板劃線的操作方法交叉劃線法交叉劃線法連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法 平板劃線時不能劃破培養(yǎng)基的原因 一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的； 二是存留在劃破處的單個細胞無

25、法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。破處生長，會形成一個條狀的菌落。 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，

26、接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。免細菌污染環(huán)境和感染操作者。 2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：

27、以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。 涂布平板的所有操作都應在火焰附近涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要

28、進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第求，想一想，第2 2步應如何進行無菌操作？步應如何進行無菌操作？ 應從操作的各個細節(jié)保證應從操作的各個細節(jié)保證“無菌無菌”。例如，。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。等。 1 1、臨時保藏：、臨時保藏：接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后養(yǎng)基，菌落長成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長期保存：、長期保存：甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作

29、是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達

30、到要求，需要分析原因，接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習。再次練習。 （三）是否進行了及時細致的觀察與記錄（三）是否進行了及時細致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察顯不同，及時觀察記錄的同學會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣。良好的科學態(tài)度與習慣。本課題知識小結(jié)本課題知識小結(jié): :【典例解析典例解析】 例例1 1關微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的

31、關微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的無機物只提供無機鹽除水以外的無機物只提供無機鹽 D.D.無機氮源也能提供能量無機氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于生物的具體情況分析。對于A A、B B選項，它的表達是不完整的。有選項，它的表達是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3N

32、H4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C C選項，除水以外的無機物種類選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而NaClNaCl則只能則只能提供無機鹽。對于提供無機鹽。對于D D選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如如NH3NH3可為

33、硝化細菌提供能量和氮源?？蔀橄趸毦峁┠芰亢偷?。答案：答案：D例例2 2下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解的是的是A.A.防止雜菌污染防止雜菌污染 B.B.消滅雜菌消滅雜菌C.C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設備都必須滅菌培養(yǎng)基和發(fā)酵設備都必須滅菌 D.D.滅菌必須在接種前滅菌必須在接種前答案：答案：B 解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A A說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確

34、的；所以是正確的；B B是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。全部微生物。C C是正確的，因為與發(fā)酵有關的所有設備是正確的，因為與發(fā)酵有關的所有設備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。所接菌種也殺死。編號編號成分成分含量含量粉狀硫粉狀硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK

35、K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物培右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1 1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型的微生物類型是是 。（2 2）若不慎將過量）若不慎將過量NaClNaCl加入培養(yǎng)基中。加入培養(yǎng)基中。如不想浪費此培養(yǎng)基，如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入可再加入 . .自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物 含碳有機物含碳有機物 （3 3）若除去成分，加入（）若除去成分，加入（CH2OCH2O），），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng) 。（4 4）表中營養(yǎng)成分共有）表中營養(yǎng)成分共有 類。類。（5 5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都）不論何種培養(yǎng)基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是溶化后分裝前，要進行的是 。（6 6）右表中各成分重量確定的原則）右表中各成分重量確定的原則是是 。（7 7）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應）若右表培養(yǎng)基用于菌種鑒定，應該增加的成分該增加的成分 。固氮微生物固氮微生物 3 調(diào)整調(diào)整pHpH 依微生物的生長需要確定依微生物的生長需要確定 瓊脂（或凝固劑）瓊脂（或凝固劑）