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1、1234實驗二實驗二 血紅蛋白測定、網(wǎng)織紅血紅蛋白測定、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血沉細胞計數(shù)、血沉 測定測定 血紅蛋白測定血紅蛋白測定 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)網(wǎng)織紅細胞計數(shù) 紅細胞沉降率紅細胞沉降率，血細胞比容測定血細胞比容測定 紅細胞形態(tài)，嗜堿點彩紅細胞紅細胞形態(tài)，嗜堿點彩紅細胞主要內(nèi)容主要內(nèi)容氰化高鐵血紅蛋白測定法氰化高鐵血紅蛋白測定法(HiCN)RBC被破壞被破壞Hb文齊液文齊液K3 Fe(CN)6Fe2+Fe3+HiCN+CN540nmSHb除外除外原理：原理：Hb測定流程：測定流程：5ml 轉(zhuǎn)化液轉(zhuǎn)化液20ul 全血全血混勻混勻/靜置靜置5min540nm比色比色器材：末梢血或靜脈血，器材：末梢血或
2、靜脈血，5ml5ml移液管，分光光度計移液管，分光光度計試劑：試劑：HiCNHiCN轉(zhuǎn)化液（文齊液），蒸餾水轉(zhuǎn)化液（文齊液），蒸餾水上清液上清液洗洗3次次A：為為540nm處測定的標本吸光度處測定的標本吸光度64 458：血紅蛋白平均分子量：血紅蛋白平均分子量44 000：血紅蛋白毫摩爾消光系數(shù)：血紅蛋白毫摩爾消光系數(shù)64458=251367.744000AAHb(g/L)Hb(g/L) 報告方式：報告方式：XXg/L 注意事項：注意事項：轉(zhuǎn)化液中的轉(zhuǎn)化液中的KCNKCN有劇毒，不能與酸性液體混合有劇毒，不能與酸性液體混合高白細胞、高球蛋白血癥致試液渾，高白細胞、高球蛋白血癥致試液渾，不能測定
3、不能測定SHbSHbHbCOHbCO反應慢反應慢( (加大試劑中加大試劑中K K3 3FeFe（CNCN）6 6含量）含量）廢液處理：每升廢液加次氯酸鈉廢液處理：每升廢液加次氯酸鈉40ml,40ml,充分振搖混充分振搖混勻，敞開容器，置室溫勻，敞開容器，置室溫3h3h以上以上質(zhì)量控制：質(zhì)量控制：血標本、方法、器材、采血部位血標本、方法、器材、采血部位參考值：參考值：成年：男性成年：男性120120160g /L160g /L女性：女性：110110150g/L150g/L新生兒：新生兒：170170200g/L200g/L老年（老年（7070歲以上）：男性：歲以上）：男性：94.294.212
4、2.2g/L122.2g/L 女性：女性：86.586.5111.8g/L111.8g/L臨床意義：臨床意義：與紅細胞計數(shù)相似，但與紅細胞計數(shù)相似，但對貧血程度判斷的對貧血程度判斷的 準確性優(yōu)于準確性優(yōu)于紅細胞計數(shù)。紅細胞計數(shù)。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)網(wǎng)織紅細胞計數(shù)概念：概念： 介于晚幼紅細胞到完全成熟紅細胞之間的過渡細介于晚幼紅細胞到完全成熟紅細胞之間的過渡細胞，其胞質(zhì)中殘存的嗜堿性物質(zhì)核糖核酸（胞，其胞質(zhì)中殘存的嗜堿性物質(zhì)核糖核酸（RNA），），經(jīng)堿性染料煌焦油藍，亞甲藍等活體染色后，嗜堿性經(jīng)堿性染料煌焦油藍，亞甲藍等活體染色后，嗜堿性物質(zhì)凝聚成藍色或紫色點狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而得名。物質(zhì)凝聚成藍色或紫色點
5、狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而得名。網(wǎng)織紅細胞網(wǎng)織紅細胞reticulocyte ,Ret 計數(shù)計數(shù)RetRet形態(tài)特點和分型形態(tài)特點和分型較成熟紅細胞稍大，直徑較成熟紅細胞稍大，直徑8.08.09.5 um9.5 um絲球型，外周血中無絲球型，外周血中無破網(wǎng)型，外周血少見破網(wǎng)型，外周血少見網(wǎng)型，外周血極少見網(wǎng)型，外周血極少見點粒型，外周血多見點粒型，外周血多見檢測原理：檢測原理：1.普通光學顯微鏡法：普通光學顯微鏡法： 核蛋白體、核蛋白體、RNA + 煌焦油藍煌焦油藍 活體染色活體染色 紅細胞中的紅細胞中的藍色網(wǎng)狀、顆粒狀藍色網(wǎng)狀、顆粒狀 2.血液分析儀法：熒光染色用流式細胞術(shù)計數(shù)血液分析儀法：熒光染色用流
6、式細胞術(shù)計數(shù)手工計數(shù)法：手工計數(shù)法：米勒窺盤法（米勒窺盤法（Miller methodMiller method）B31A將將MillerMiller窺盤放在顯微鏡窺盤放在顯微鏡目鏡中目鏡中, ,通過窺盤中大小通過窺盤中大小方格間的方格間的9 9比比1 1比例關(guān)系計比例關(guān)系計算算RBCRBC數(shù)和網(wǎng)織數(shù)和網(wǎng)織RBCRBC。方法評價：方法評價：水分易蒸發(fā)，故不易涂片；水分易蒸發(fā)，故不易涂片；染色時間短，結(jié)果偏低。染色時間短，結(jié)果偏低。玻片法：玻片法：試管法：試管法：器材：器材：顯微鏡一套、試管、玻璃棒、推玻片、玻片顯微鏡一套、試管、玻璃棒、推玻片、玻片試劑：試劑： 10g/L煌焦油藍（煌焦油藍（b
7、rilliant cresyl blue) 2滴煌焦油藍滴煌焦油藍2滴全血滴全血混勻混勻/靜置靜置15-20min油鏡油鏡兼顧邊緣和尾部兼顧邊緣和尾部Ret絕對值（Ret/L)=RBC數(shù)/L Ret百分數(shù)1000=100% 1000計數(shù)個RBC中的網(wǎng)織紅細胞數(shù)網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)計算：計算：Miller 窺盤窺盤=100%9大方格B內(nèi)的網(wǎng)織紅細胞數(shù)網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)小方格A內(nèi)RBC數(shù)質(zhì)量控制：質(zhì)量控制： 染料選擇：染料選擇： 新亞甲藍：新亞甲藍：WHOWHO推薦，染色好推薦，染色好 煌焦油藍：染料易附著煌焦油藍：染料易附著RBCRBC，受變性珠蛋白小體、，受變性珠蛋白小體、 HbH HbH包涵體影響
8、包涵體影響 正確辨認正確辨認RetRet：凡含凡含2 2個以上網(wǎng)織顆粒的個以上網(wǎng)織顆粒的RBCRBC RetRet計數(shù)方法：計數(shù)方法： Miller Miller窺盤：縮小分布誤差，降低勞動強度窺盤：縮小分布誤差，降低勞動強度 RBCRBC計數(shù)量：計數(shù)量： Ret Ret越越多多，所需計數(shù)的，所需計數(shù)的RBCRBC越越少少 報告方式：報告方式：網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)：網(wǎng)織紅細胞百分數(shù)：X.X%網(wǎng)織紅細胞絕對數(shù)：網(wǎng)織紅細胞絕對數(shù)：XX109/L參考區(qū)間：參考區(qū)間：1.Ret1.Ret百分數(shù)：百分數(shù)： 成人和兒童成人和兒童: 0.5%: 0.5%1.5%1.5% 新生兒新生兒: 2.0%: 2.0%6.
9、0%6.0%2.Ret2.Ret絕對數(shù)：成人和兒童絕對數(shù)：成人和兒童 (24(2484)84)10109 9/L/L 24紅細胞沉降率，血細胞比容測定紅細胞沉降率，血細胞比容測定魏氏法魏氏法 Westergren原理原理: 將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中，直立于特制血沉架上，中，直立于特制血沉架上，1h后讀取紅細胞下沉后讀取紅細胞下沉后血漿的高度。后血漿的高度。器材：器材：Westergren血沉管、血沉架、吸管、試管血沉管、血沉架、吸管、試管標本：標本：109mmol/L枸櫞酸鈉抗凝全血枸櫞酸鈉抗凝全血紅細胞沉降率紅細胞沉降率 ESR操作：
10、操作： 抗凝劑抗凝劑0.4ml+血血1.6ml（1：4） 吸入血沉管至吸入血沉管至0刻度刻度 直立血沉管直立血沉管 1h結(jié)果觀察結(jié)果觀察混勻混勻601min，RBC界面上界面上1mm處的透明血漿層處的透明血漿層全自動血沉分析法全自動血沉分析法原理：原理： 將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中，直將一定量的枸櫞酸鈉抗凝全血置于特制血沉管中，直立于儀器中，立于儀器中，紅外線自動檢測血液的不同液面高度，換算成紅外線自動檢測血液的不同液面高度，換算成與魏氏法相關(guān)的值，可選擇與魏氏法相關(guān)的值，可選擇30min30min或或60min60min檢測時間檢測時間, , 讀取儀讀取儀器上的數(shù)據(jù)。器上的數(shù)
11、據(jù)。器材：器材：靜脈采血一套，靜脈采血一套，血沉儀、血沉管、吸管、試管血沉儀、血沉管、吸管、試管 ，標本：標本：109mmol/L109mmol/L枸櫞酸鈉抗凝全血枸櫞酸鈉抗凝全血 操作：操作： 抗凝劑抗凝劑0.4ml+血血1.6ml（1：4） 倒入血沉管至刻度處倒入血沉管至刻度處 直立血沉管于儀器中直立血沉管于儀器中 0.5h結(jié)果觀察結(jié)果觀察混勻混勻質(zhì)量保證：質(zhì)量保證：魏氏法注意事項魏氏法注意事項: : 抗凝劑，血沉管，溫度，時間，讀數(shù)抗凝劑，血沉管，溫度，時間，讀數(shù)自動血沉儀：穩(wěn)定的全血質(zhì)控品自動血沉儀：穩(wěn)定的全血質(zhì)控品影響因素：血漿，紅細胞，感染，藥物等影響因素：血漿，紅細胞，感染，藥物
12、等參考范圍：男性參考范圍：男性0 0 15mm/h 15mm/h，女性，女性0 0 20mm/h 20mm/h報告方式報告方式: XX : XX mm/hmm/h血細胞比容（血細胞比容（hematocrit,HCT）溫氏法原理：溫氏法原理： 將定量的抗凝血液在一定的速度和時間離心后，將定量的抗凝血液在一定的速度和時間離心后，血液中的各種不同成分互相分離，計算壓實紅細胞血液中的各種不同成分互相分離，計算壓實紅細胞占全血的比值。占全血的比值。器材：溫氏管，離心機器材：溫氏管，離心機標本：標本：EDTA-K2或肝素或肝素抗凝全血抗凝全血溫氏法：溫氏法：血細胞比容結(jié)果讀數(shù)：血細胞比容結(jié)果讀數(shù)：33紅細
13、胞形態(tài)，嗜堿點彩紅細胞紅細胞形態(tài)，嗜堿點彩紅細胞正常形態(tài)紅細胞：正常形態(tài)紅細胞：雙凹圓盤形雙凹圓盤形大小均一，大小均一，7.2um7.2um淺染區(qū)為直徑淺染區(qū)為直徑1/31/3小紅細胞小紅細胞：直徑：直徑6um10um10um巨紅細胞巨紅細胞：直徑：直徑15um15um紅細胞大小不均：紅細胞大小不均：直徑相差一倍以上直徑相差一倍以上紅細胞大小不均紅細胞大小不均anisocytosis球形紅細胞球形紅細胞spherocytes形似小球形似小球直徑直徑6um2.6um2.6um淡染區(qū)消失淡染區(qū)消失口形紅細胞口形紅細胞Stomatocyte (Mouth Cell)淡染區(qū)扁平淡染區(qū)扁平形如魚口形形如
14、魚口形少量增多：肝硬化、輕型地貧、血型不合輸血、鉛中毒、傳單、惡性腫瘤及酒精中毒等 遺傳口形紅細胞增多癥10%鐮形紅細胞鐮形紅細胞Drepanocyte Drepanocyte 形如鐮刀形如鐮刀鐮狀細胞性貧血鐮狀細胞性貧血 靶形紅細胞靶形紅細胞 target cell形如射擊之靶。形如射擊之靶。比正常紅細胞薄比正常紅細胞薄珠蛋白生成障礙性貧血珠蛋白生成障礙性貧血棘形紅細胞棘形紅細胞紅細胞表面針尖突起，間距不規(guī)則，突起長寬不紅細胞表面針尖突起，間距不規(guī)則，突起長寬不一，尾端略圓一，尾端略圓吸收不良反應、肝病、脾切除后、吸收不良反應、肝病、脾切除后、PKPK缺乏性貧血、缺乏性貧血、先天性缺乏先天性
15、缺乏-脂蛋白血癥脂蛋白血癥 ，酒精中毒性肝病，尿，酒精中毒性肝病，尿毒癥毒癥皺縮皺縮RBCRBC棘形棘形RBCRBC淚滴形紅細胞淚滴形紅細胞骨髓纖維化骨髓纖維化鋸齒狀紅細胞鋸齒狀紅細胞 細胞周邊呈鋸齒狀，突起均勻排列，細胞周邊呈鋸齒狀，突起均勻排列，大小一致，外端較尖大小一致，外端較尖尿毒癥尿毒癥裂裂紅紅細細胞胞盔盔形形紅紅細細胞胞緡錢紅細胞緡錢紅細胞Rouleaux Formation 異常高分子蛋白異常高分子蛋白見于多發(fā)性骨髓瘤、巨球見于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥以及免疫球蛋白增蛋白血癥以及免疫球蛋白增多癥多癥紅細胞自凝紅細胞自凝red cell agglutination高色素紅細胞高色
16、素紅細胞生理淺染區(qū)消失，胞體大生理淺染區(qū)消失，胞體大低色素紅細胞低色素紅細胞低色素紅細胞低色素紅細胞hypochromic erythrocyte淺染區(qū)擴大淺染區(qū)擴大嗜多色性紅細胞嗜多色性紅細胞未完全成熟紅細胞，胞體較大未完全成熟紅細胞，胞體較大內(nèi)含嗜堿性物質(zhì)內(nèi)含嗜堿性物質(zhì)RNA提示骨髓造紅細胞功能活躍提示骨髓造紅細胞功能活躍 見于增生性貧血見于增生性貧血，溶貧溶貧豪焦豪焦小體小體Howell-Jolly Bodies 核殘余物核殘余物見于巨幼貧見于巨幼貧脾切除脾切除，無脾癥無脾癥卡波氏環(huán)卡波氏環(huán)Cabot ringCabot ring 淡紫紅色環(huán)形或淡紫紅色環(huán)形或8 8字形字形 環(huán)狀物環(huán)狀物
17、 核的殘余和豪周氏小核的殘余和豪周氏小 體變種體變種退變細胞中凝集和變性退變細胞中凝集和變性 的蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì) 見于鉛中毒、溶貧、白見于鉛中毒、溶貧、白 血病、惡性瘧疾等。血病、惡性瘧疾等。有核有核RBCRBC 提示紅細胞成熟紊亂，是嚴重疾病的提示紅細胞成熟紊亂，是嚴重疾病的反應反應 各種溶貧、巨幼貧、紅細胞酶缺乏性各種溶貧、巨幼貧、紅細胞酶缺乏性貧血、貧血、Hb病以及極度貧血病以及極度貧血 急慢性白血病、急慢性白血病、骨髓增生異常綜合征骨髓增生異常綜合征、骨髓纖維化以及其他一些骨髓增殖性疾骨髓纖維化以及其他一些骨髓增殖性疾病和真紅、血小板增多癥。病和真紅、血小板增多癥。 晚期腫瘤反應及臨床危象反應晚期腫瘤反應及臨床危象反應 瑞氏染色瑞氏染色，成熟紅細胞或幼紅細胞的胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)不一的藍色點狀物，成熟紅細胞或幼紅細胞的胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)不一的藍色點狀物，即核糖核酸（即核糖核酸（RNA），屬于未完全成熟紅細胞，其顆粒大小不一、多少不等。），屬于未完全成熟紅細胞，其顆粒大小不一、多少不等。 多見于重金屬中毒，常作為鉛中毒診斷篩選指標。多見于重金屬中毒，常作為鉛中毒診斷篩選指標。嗜堿點彩紅細胞計數(shù)嗜堿點彩紅細胞計數(shù)嗜堿點彩紅細胞嗜堿點彩紅細胞未完全成熟紅細胞未完全成熟紅細胞正常人偶見正常人偶見增多見于鉛，增多見于鉛，鉍鉍，汞中毒汞中毒
臨床基礎(chǔ)檢驗學：實驗二血紅蛋白測定、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血沉測定
