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1、實驗二實驗二 紅細胞計數(shù)紅細胞計數(shù) 顯微鏡的使用顯微鏡的使用 紅細胞計數(shù)紅細胞計數(shù)光學部分：光學部分：1 1、目鏡：、目鏡：10102 2、物鏡：、物鏡：低倍（低倍（1010）、高倍（）、高倍（4040）、油鏡（）、油鏡（100100）3 3、聚光鏡、光柵、光、聚光鏡、光柵、光源源機械部分：機械部分：1 1、鏡筒、鏡臂、鏡筒、鏡臂2 2、載物臺、載物臺3 3、粗、細調(diào)焦螺旋、粗、細調(diào)焦螺旋 4 4、鏡座、鏡座顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡的構(gòu)造1.1.取鏡和安放取鏡和安放 一手握住鏡臂，一手托住底座，保持直立、平穩(wěn)一手握住鏡臂，一手托住底座，保持直立、平穩(wěn) 顯微鏡置于平穩(wěn)的實驗臺的左上角顯微鏡置于平穩(wěn)的實
2、驗臺的左上角 鏡檢姿勢要端正鏡檢姿勢要端正2.2.低倍鏡的操作低倍鏡的操作 調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，物鏡（調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，物鏡（1010）靠近標本）靠近標本 細調(diào)螺旋，至目標清晰細調(diào)螺旋，至目標清晰 標本移動螺旋移動玻片觀察部位標本移動螺旋移動玻片觀察部位 （同向移動）同向移動）3.3.高倍鏡的操作高倍鏡的操作 旋動轉(zhuǎn)換器換高倍鏡旋動轉(zhuǎn)換器換高倍鏡 調(diào)節(jié)細調(diào)節(jié)細調(diào)調(diào)螺旋，視野清晰螺旋，視野清晰（只細不粗只細不粗） 調(diào)節(jié)細調(diào)節(jié)細調(diào)調(diào)螺旋時防止鏡頭與載玻片強力接觸，損壞鏡頭或螺旋時防止鏡頭與載玻片強力接觸，損壞鏡頭或載玻片。載玻片。4.4.油鏡的操作油鏡的操作 載玻片上滴香柏油，旋動轉(zhuǎn)換器換油鏡載玻片上滴香柏
3、油，旋動轉(zhuǎn)換器換油鏡 側(cè)面觀察，調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋使側(cè)面觀察，調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋使油鏡頭浸沒油中油鏡頭浸沒油中，剛好貼近載，剛好貼近載玻片，細調(diào)螺旋微微向上調(diào)至清晰（玻片，細調(diào)螺旋微微向上調(diào)至清晰（光線最強光線最強） 觀察完畢，擦鏡紙擦拭鏡頭觀察完畢，擦鏡紙擦拭鏡頭 5. 5.顯微鏡使用后的維護顯微鏡使用后的維護觀察結(jié)束后，觀察結(jié)束后，調(diào)節(jié)光源到最小調(diào)節(jié)光源到最小再關掉電源開關再關掉電源開關先降載物臺，取下載玻片。先降載物臺，取下載玻片。用擦鏡液拭去鏡頭上的油，再用干凈的擦鏡紙擦去殘留用擦鏡液拭去鏡頭上的油，再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的擦鏡液的擦鏡液 清潔顯微鏡的金屬部件。清潔顯微鏡的金屬部件。將各部分還原
4、，將各部分還原，將物鏡轉(zhuǎn)成將物鏡轉(zhuǎn)成“八八”字形字形，同時把，同時把聚光鏡聚光鏡降下降下，以免物鏡和聚光鏡發(fā)生碰撞危險。，以免物鏡和聚光鏡發(fā)生碰撞危險。罩上防塵罩，罩上防塵罩，把顯微鏡放回原處。把顯微鏡放回原處。使用步驟：使用步驟： 觀察前的準備觀察前的準備 （取鏡和安放）（取鏡和安放）低倍鏡觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察高倍鏡觀察油浸鏡觀察油浸鏡觀察 顯微鏡的維護顯微鏡的維護 鏡轉(zhuǎn)成鏡轉(zhuǎn)成“八八”形形 聚光鏡降下聚光鏡降下 對光，調(diào)焦對光，調(diào)焦只細不粗只細不粗同向移動同向移動油鏡浸在香柏油中油鏡浸在香柏油中粗調(diào)將載物臺升起粗調(diào)將載物臺升起光線最強光線最強使用注意事項使用注意事項1 1、低倍鏡調(diào)焦、
5、觀察、低倍鏡調(diào)焦、觀察 高倍鏡高倍鏡 油鏡油鏡2 2、油鏡要求光線最強：光圈最大、聚光鏡最上、光源最亮油鏡要求光線最強：光圈最大、聚光鏡最上、光源最亮3 3、對焦時以轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋為主，盡量少用細調(diào)螺旋、對焦時以轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋為主，盡量少用細調(diào)螺旋4 4、粗調(diào)螺旋只能將鏡頭上移，不可下移、粗調(diào)螺旋只能將鏡頭上移，不可下移5 5、污點的判斷：、污點的判斷：玻片移，物鏡換，目鏡轉(zhuǎn)玻片移，物鏡換，目鏡轉(zhuǎn)6 6、收鏡時，取下載物臺上物品，、收鏡時，取下載物臺上物品，將油鏡頭擦干凈將油鏡頭擦干凈，物鏡物鏡 轉(zhuǎn)成轉(zhuǎn)成“八八”字形字形，聚光鏡下降至最低處聚光鏡下降至最低處，一手握鏡臂、一，一手握鏡臂、一手托鏡座
6、，放入柜內(nèi)。手托鏡座，放入柜內(nèi)。顯微鏡使用視頻顯微鏡使用視頻紅細胞計數(shù)紅細胞計數(shù) (red blood cell count(red blood cell count，RBCRBC) )手工顯微鏡法手工顯微鏡法l 認識認識計數(shù)板計數(shù)板l 紅細胞計數(shù)紅細胞計數(shù)Neubauer計數(shù)板計數(shù)板0.1mm0.1mmcounting chamber紅色部分是紅細胞，紅色部分是紅細胞，血小板計數(shù)區(qū)域血小板計數(shù)區(qū)域 上，下兩個計數(shù)室上，下兩個計數(shù)室 每個計數(shù)室內(nèi)劃有長、寬各每個計數(shù)室內(nèi)劃有長、寬各3.0mm3.0mm的方格，平均的方格，平均分分9 9個大方格個大方格，其高其高0.1mm0.1mm，每個大方格面
7、積，每個大方格面積1.0mm1.0mm2 2，容積為容積為0.1mm0.1mm3 3（ulul） 四角的大方格各分為四角的大方格各分為1616個中方格個中方格，中央中央的一個大的一個大方格分為方格分為2525個中方格，每個中方格又分為個中方格，每個中方格又分為1616個小個小方格方格 正中及四角的正中及四角的5 5個中方格是個中方格是RBCRBC，PLTPLT計數(shù)區(qū)計數(shù)區(qū) 位于四角的位于四角的4 4個大方格為個大方格為WBCWBC計數(shù)區(qū)計數(shù)區(qū)白細胞計數(shù)區(qū)域白細胞計數(shù)區(qū)域紅細胞計數(shù)區(qū)域紅細胞計數(shù)區(qū)域鏡下觀鏡下觀鏡下觀鏡下觀原理：原理：等滲稀釋液等滲稀釋液將血液將血液稀釋一定倍數(shù)稀釋一定倍數(shù)(20
8、0倍倍)，充入計數(shù)，充入計數(shù) 池后，在顯微鏡下池后，在顯微鏡下計數(shù)一定區(qū)域內(nèi)計數(shù)一定區(qū)域內(nèi)的紅細胞數(shù)量，經(jīng)的紅細胞數(shù)量，經(jīng) 換算求出換算求出每升每升血液中的紅細胞數(shù)量。血液中的紅細胞數(shù)量。 器材：器材：一次性消毒采血針、一次性消毒采血針、微量吸管、試管、微量吸管、試管、2ml2ml移液管、移液管、 75% 75%乙醇棉球、無菌干棉球、顯微鏡、改良乙醇棉球、無菌干棉球、顯微鏡、改良NeubauerNeubauer計計 數(shù)板、蓋玻片、玻璃棒等。數(shù)板、蓋玻片、玻璃棒等。試劑：試劑： 生理鹽水生理鹽水或紅細胞稀釋液或紅細胞稀釋液(Hayem液液)紅細胞計數(shù)紅細胞計數(shù)紅細胞計數(shù)流程紅細胞計數(shù)流程2ml
9、N.S10ul全血全血稀釋稀釋/混勻混勻充池，充池，靜置靜置2-3min計數(shù)計數(shù)5個中方個中方格格RBC總數(shù)總數(shù)上清洗上清洗3次次低倍鏡瀏覽，低倍鏡瀏覽，高倍鏡計數(shù)高倍鏡計數(shù)RBCLoading the counting chamber 混勻，一次完成，不能滿溢、不足、不能有氣泡，靜置混勻，一次完成，不能滿溢、不足、不能有氣泡，靜置2-3min濕潤支持柱，濕潤支持柱，推壓的方法蓋推壓的方法蓋上蓋玻片上蓋玻片計數(shù)原則：計數(shù)原則：遵循一定方向，壓線細胞數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右遵循一定方向，壓線細胞數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右不能重復，不能漏數(shù)不能重復，不能漏數(shù)Hemacytometer counting
10、chamber 報告方式：報告方式：X.XXX.XX10101212/L/L計算公式：計算公式：RBC/L 6101225=10 201 10510 =10100NNN注意事項：注意事項：采血部位的選擇，采血應順利采血部位的選擇，采血應順利稀釋倍數(shù)要準確（血量稀釋倍數(shù)要準確（血量/稀釋液量）稀釋液量）稀釋液、小試管、稀釋液、小試管、計數(shù)板，蓋玻片均清潔干燥計數(shù)板，蓋玻片均清潔干燥混勻，充池一次完成，不能滿溢、不足、有氣泡混勻，充池一次完成，不能滿溢、不足、有氣泡壓線細胞計數(shù)：數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右壓線細胞計數(shù)：數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右每個中方格之間細胞相差每個中方格之間細胞相差20個要重新充池個
11、要重新充池2次計數(shù)不超次計數(shù)不超5%參考值：參考值： 成年：成年：男性男性 (4.05.5)1012/L 女性女性 (3.55.0)1012/L新生兒：新生兒： (6.07.0)1012/L。 臨床意義臨床意義: : 1 1生理性變化生理性變化 年齡與性別的差異年齡與性別的差異 精神因素精神因素 劇烈體力運動和勞動劇烈體力運動和勞動 氣壓降低氣壓降低 妊娠中、后期妊娠中、后期2 2病理性變化病理性變化(1) (1) 紅細胞和血紅蛋白量減少：在臨床最常見于紅細胞和血紅蛋白量減少：在臨床最常見于各各 種原因的貧血種原因的貧血 急慢性紅細胞丟失過多急慢性紅細胞丟失過多: :各種原因的出血。各種原因的
12、出血。 紅細胞壽命縮短：如各種原因的溶血紅細胞壽命縮短：如各種原因的溶血 造血原料不足造血原料不足 骨髓造血功能減退骨髓造血功能減退（2 2）紅細胞增多）紅細胞增多 原發(fā)性紅細胞增多：真性紅細胞增多等原發(fā)性紅細胞增多：真性紅細胞增多等 繼發(fā)性紅細胞增多：引起繼發(fā)性紅細胞增多：引起低氧血癥低氧血癥的疾病如心血管的疾病如心血管病、肺疾病、腎上腺皮質(zhì)功能亢進（庫欣病病、肺疾病、腎上腺皮質(zhì)功能亢進（庫欣病) )等等 相對性紅細胞增多相對性紅細胞增多紅細胞計數(shù)視頻紅細胞計數(shù)視頻作業(yè)：作業(yè)：1、繪畫并簡單描述牛鮑計數(shù)板的顯微鏡視、繪畫并簡單描述牛鮑計數(shù)板的顯微鏡視野結(jié)構(gòu)圖，并標示紅細胞、白細胞和血小野結(jié)構(gòu)圖，并標示紅細胞、白細胞和血小板計數(shù)區(qū)域。板計數(shù)區(qū)域。2、實驗結(jié)果及分析。、實驗結(jié)果及分析。下周實驗預告下周實驗預告 血紅蛋白測定血紅蛋白測定 血沉，比容血沉，比容 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)網(wǎng)織紅細胞計數(shù) 點彩紅細胞點彩紅細胞
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