高考生物總復習 第十一單元 生物技術實踐 1140 微生物的培養(yǎng)和應用課件

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1、第第40講講微生物的培養(yǎng)和應用微生物的培養(yǎng)和應用考綱導航考綱導航 1.微生物的分離和培養(yǎng)。微生物的分離和培養(yǎng)。2.培培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。養(yǎng)基對微生物的選擇作用。3.某種微生物數某種微生物數量的測定。量的測定。4.微生物在其他方面的應用。微生物在其他方面的應用。 考點一考點一微生物的實驗室培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)1培養(yǎng)基培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對概念：人們按照微生物對_的不同需求，的不同需求，配制出供其配制出供其_的營養(yǎng)基質。的營養(yǎng)基質。(2)營養(yǎng)組成：一般都含有營養(yǎng)組成：一般都含有_和無機鹽。和無機鹽。此外，還需要滿足微生物生長對此外，還需要滿足微生物生長對_、氧氣以及、氧氣以及_

2、的要求。的要求。營養(yǎng)物質營養(yǎng)物質生長繁殖生長繁殖水、碳源、氮源水、碳源、氮源pH特殊營養(yǎng)物質特殊營養(yǎng)物質(3)種類種類按照物理性質可分為按照物理性質可分為_培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基。按照成分的來源可分為天然培養(yǎng)基和按照成分的來源可分為天然培養(yǎng)基和_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、_培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基等。2無菌技術無菌技術(1)含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止_ 的方法。的方法。(2)關鍵：防止關鍵：防止_的入侵。的入侵。液體液體合成合成鑒別鑒別雜菌污染雜菌污染外來雜菌

3、外來雜菌(3)不同對象的無菌操作方法：不同對象的無菌操作方法：3大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(2)純化大腸桿菌的方法純化大腸桿菌的方法平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面面_的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。散到培養(yǎng)基的表面?！咎貏e提醒特別提醒】 1.操作第一步即取菌種之前及每次操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進行火焰灼燒滅菌，劃線操作結束時劃線之前都需要進行火焰灼燒滅菌，劃線操作結束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：連續(xù)劃線連續(xù)

4、劃線第一次操作每次劃線之前劃線結束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者2.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。殺死菌種。3第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐漸減少，最終始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。得到由單個細菌繁殖而來的菌落。4劃線時最

5、后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。5劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的_，然后將不同稀釋度的菌液分別，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。梯度稀釋梯度稀釋(3)菌種的保存方法菌種的保存方法對于頻繁使用的菌種，可以采用對于頻繁使用的菌種，可以采用_的方法。的方法。對于需要長期保存的菌種，可以采用對于需要長期保存的菌種，可以采用_的方法。的方法?！九袛嗯c思考判斷與思考】1判斷下列說法的正

6、誤。判斷下列說法的正誤。(1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有時還需培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有時還需要加入一些特殊的物質。要加入一些特殊的物質。()(2)倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。皿蓋上。()臨時保藏臨時保藏甘油管藏甘油管藏(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害。，又減少消毒劑對細胞的傷害。()(4)為了防止污染，接種環(huán)經火焰滅菌后應為了防止污染，接種環(huán)經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落。趁熱快速挑取菌落。()(5)用稀釋涂布平板法純

7、化大腸桿菌時，只用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。個菌落。()2根據題圖，回答問題。根據題圖，回答問題。如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請思考：法接種后培養(yǎng)的效果圖，請思考：(1)獲得圖獲得圖A效果和圖效果和圖B效果的接種方法分別是什么？效果的接種方法分別是什么？【提示提示】 獲得效果獲得效果A的接種方法為稀釋涂布平板法，的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得效果獲得效果B的接種方法為平板劃線法。的接種方法為平板劃線法。(2)某同學在純化土壤中的細菌時，發(fā)

8、現培某同學在純化土壤中的細菌時，發(fā)現培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應當怎樣操作才可避免此種現象？什么？應當怎樣操作才可避免此種現象？【提示提示】 最可能的原因是菌液濃度過高最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅或劃線時在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數或每次劃新菌；采取的措施是增大稀釋倍數或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。(3)接種操作為什么一定要在火焰附近進行接種操作為什么一定要在火焰附近進行？【提示提示】 火焰附近存在著無菌區(qū)域。火焰附近存在著無菌區(qū)域?？挤?/p>

9、法1培養(yǎng)基及其制備方法分析培養(yǎng)基及其制備方法分析1(2018云南民族大學附屬中學高三月考云南民族大學附屬中學高三月考)下表為某培下表為某培養(yǎng)基的配方，有關敘述正確的是養(yǎng)基的配方，有關敘述正確的是() 成分牛肉膏葡萄糖K2HPO4伊紅美藍青霉素瓊脂蒸餾水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1萬單位適量1 000 mLA.能在此培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌，擬核能在此培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌，擬核上有抗青霉素的基因上有抗青霉素的基因B此培養(yǎng)基是天然鑒別培養(yǎng)基此培養(yǎng)基是天然鑒別培養(yǎng)基C此培養(yǎng)基可以用來檢測自來水中細菌此培養(yǎng)基可以用來檢測自來水中細菌含量是否符合飲用水標準含量是否符合飲用水標準D

10、此培養(yǎng)基可以用于選育轉基因大腸桿此培養(yǎng)基可以用于選育轉基因大腸桿菌菌種的基因工程的操作過程中菌菌種的基因工程的操作過程中【解析】 本題考查培養(yǎng)基的類型和作用，要求考生能根據培養(yǎng)基的配方，確定其中的青霉素、伊紅和美藍的應用，進而分析、判斷各選項。分析培養(yǎng)基的配方可知，培養(yǎng)基中含有牛肉膏和葡萄糖，能為微生物提供碳源、氮源和能源，培養(yǎng)基中還含有青霉素(是一種抗生素)和伊紅、美藍，由于大腸桿菌對青霉素敏感，因此自然環(huán)境中的大腸桿菌無法在該培養(yǎng)基中生活，故不能在此培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌，且大腸桿菌的擬核上不含有抗青霉素的基因，A錯誤；此培養(yǎng)基中的青霉素對細菌有選擇作用，此培養(yǎng)基中的青霉素對細菌有選擇作用，

11、故該培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基，故該培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基，B錯誤；細菌對抗錯誤；細菌對抗生素敏感，此培養(yǎng)基中含有青霉素，細菌不生素敏感，此培養(yǎng)基中含有青霉素，細菌不可以在此培養(yǎng)基上生長繁殖，可以在此培養(yǎng)基上生長繁殖，C錯誤；由于錯誤；由于轉基因轉基因(運載體中含有青霉素抗性基因運載體中含有青霉素抗性基因)的大腸的大腸桿菌菌種可以在含有青霉素的培養(yǎng)基中生長桿菌菌種可以在含有青霉素的培養(yǎng)基中生長繁殖，且大腸桿菌在含有伊紅美藍的培養(yǎng)基繁殖，且大腸桿菌在含有伊紅美藍的培養(yǎng)基中形成的菌落呈黑色，因此該培養(yǎng)基可以用中形成的菌落呈黑色，因此該培養(yǎng)基可以用于選育轉基因大腸桿菌菌種的基因工程的操于選育轉基因大腸桿菌菌種的

12、基因工程的操作過程中，作過程中，D正確。正確?！敬鸢复鸢浮?D2(2018廣東省肇慶市高中畢業(yè)班第一次廣東省肇慶市高中畢業(yè)班第一次統(tǒng)一檢測統(tǒng)一檢測)絕大多數微生物對人類、動物及植絕大多數微生物對人類、動物及植物都是有益的，而且都是必需的，在醫(yī)學工物都是有益的，而且都是必需的，在醫(yī)學工業(yè)方面和日常生活中，我們都是利用微生物業(yè)方面和日常生活中，我們都是利用微生物的發(fā)酵法制造出來相應的制品。自然界中的的發(fā)酵法制造出來相應的制品。自然界中的各種微生物是混合生存在一起的，因此在進各種微生物是混合生存在一起的，因此在進行某項具體生產時首先要純化微生物。行某項具體生產時首先要純化微生物。(1)分離提純微生物

13、常用分離提純微生物常用_法和法和_法。法。(2)用接種環(huán)進行微生物接種時，操作的第用接種環(huán)進行微生物接種時，操作的第一步及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，目的一步及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，目的是對接種環(huán)是對接種環(huán)_。(3)配制培養(yǎng)基的操作步驟：配制培養(yǎng)基的操作步驟：_(用字母順序回答用字母順序回答)。 a倒平板倒平板b計算計算c溶化溶化d稱量稱量e滅菌滅菌(4)在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時，平板冷凝后，應在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時，平板冷凝后，應將平板倒置，目的是將平板倒置，目的是_。(5)要確定培養(yǎng)液中某種微生物的含量，常用要確定培養(yǎng)液中某種微生物的含量，常用_法法和和_法進行計數。某

14、同學涂布了四個平板，統(tǒng)計的菌法進行計數。某同學涂布了四個平板，統(tǒng)計的菌落數是落數是21、212、231和和256，則應該取值為，則應該取值為_?！窘馕鼋馕觥?本題考查培養(yǎng)基的配制、微生物培養(yǎng)與計數本題考查培養(yǎng)基的配制、微生物培養(yǎng)與計數等知識，要求考生掌握微生物培養(yǎng)與計數的方法，能熟練等知識，要求考生掌握微生物培養(yǎng)與計數的方法，能熟練進行相關的操作，并能對實驗結果數據進行正確的處理和進行相關的操作，并能對實驗結果數據進行正確的處理和分析。分析。(1)分離提純微生物的常用方法有稀釋涂布平板法和平分離提純微生物的常用方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法。板劃線法。(2)平板劃線操作的第一步之前要灼燒接種

15、環(huán)，是為了平板劃線操作的第一步之前要灼燒接種環(huán)，是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基；以后的每次避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基；以后的每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，目的是對接種環(huán)滅菌，保證后劃線之前都要灼燒接種環(huán)，目的是對接種環(huán)滅菌，保證后一次劃線的菌種僅來自于前一次劃線的末端。一次劃線的菌種僅來自于前一次劃線的末端。(3)配制培養(yǎng)基的操作步驟是：計算稱量溶化滅菌倒平板。(4)要確定培養(yǎng)液中某種微生物的含量，常用稀釋涂布平板法和血球計數板計數法(顯微鏡直接計數法)進行計數。該同學涂布了四個平板，但其中一個平板的計數結果與另兩個相差太遠，說明操作過程出現錯誤，實驗數據缺乏正確性。應

16、該去除統(tǒng)計的菌落數21，得到菌落數為(212231235)/3233?！敬鸢浮?(1)平板劃線稀釋涂布平板(2)滅菌(3)BDCEA(4)防止培養(yǎng)皿內壁上出現的冷凝水污染培養(yǎng)基(5)稀釋涂布平板顯微鏡直接計數/血球計數板計數233【總結歸納】 1.培養(yǎng)基的配制原則(1)目的要明確：配制時應根據微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。(2)營養(yǎng)要協(xié)調：注意各種營養(yǎng)物質的濃度和比例。(3)PH要適宜：細菌為6.57.5，放線菌為7.58.5，真菌為5.06.0，培養(yǎng)不同微生物所需的PH不同。2微生物對主要營養(yǎng)物質的需求特點微生物對主要營養(yǎng)物質的需求特點(1)自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質是無

17、自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質是無機鹽，碳源可來自大氣中的機鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由，氮源可由含氮無機鹽提供。含氮無機鹽提供。(2)異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質主要是有異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物提供，氮源機物，即碳源必須由含碳有機物提供，氮源也主要是由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也主要是由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。也可以利用無機氮源?？挤挤?無菌技術的操作無菌技術的操作3(2018華大新高考聯(lián)盟高三教學質量測評華大新高考聯(lián)盟高三教學質量測評)我國乳制我國乳制品國家標準中，原奶細菌數允許最大值為每毫升品國家標準中，原奶細菌數

18、允許最大值為每毫升200萬個萬個。下圖是某高中生物興趣小組進行的牛奶消毒及細菌檢測。下圖是某高中生物興趣小組進行的牛奶消毒及細菌檢測實驗的過程圖。請回答下列相關問題：實驗的過程圖。請回答下列相關問題： ( 1 ) 圖 示 過 程圖 示 過 程 采 用 的 方 法 是采 用 的 方 法 是_，對從富含纖維素的，對從富含纖維素的土壤中分離分解纖維素的細菌進行計數前一土壤中分離分解纖維素的細菌進行計數前一般般_(填填“需要需要”或或“不需要不需要”)進行過進行過程程，理由是，理由是_。(2)過程過程是采用是采用_法接種培養(yǎng)得到法接種培養(yǎng)得到的結果，該統(tǒng)計結果一般情況下的結果，該統(tǒng)計結果一般情況下_(

19、填填“低于低于”或或“高于高于”)實際值。實際值。(3)過程過程后應將培養(yǎng)基放入后應將培養(yǎng)基放入_中，中，一段時間后取出，統(tǒng)計一段時間后取出，統(tǒng)計4個平板上的菌落數分個平板上的菌落數分別是別是16、82、126和和167。經過消毒后的牛奶。經過消毒后的牛奶中，細菌數大約是中，細菌數大約是_個個/mL。(4)小明用下圖所示的方法在培養(yǎng)基上接種小明用下圖所示的方法在培養(yǎng)基上接種牛奶中的細菌，在圖中牛奶中的細菌，在圖中_(填圖中字母填圖中字母)區(qū)域更易獲得單菌落。區(qū)域更易獲得單菌落?！窘馕鼋馕觥?據圖分析，圖中據圖分析，圖中表示用巴士消毒法對牛奶表示用巴士消毒法對牛奶進行消毒，步驟進行消毒，步驟表示

20、對牛奶進行系列稀釋，步驟表示對牛奶進行系列稀釋，步驟表示表示利用稀釋涂布平板法對牛奶中細菌進行培養(yǎng)計數。利用稀釋涂布平板法對牛奶中細菌進行培養(yǎng)計數。(1)根據以上分析已知，圖中根據以上分析已知，圖中表示用巴士消毒法對牛表示用巴士消毒法對牛奶進行消毒；富含纖維素的土壤中的分解纖維素的微生物奶進行消毒；富含纖維素的土壤中的分解纖維素的微生物數目較多，在進行計數前要進行梯度稀釋，因此需要進行數目較多，在進行計數前要進行梯度稀釋，因此需要進行過程。過程。(2)步驟步驟表示利用稀釋涂布平板法對牛奶中細菌進行表示利用稀釋涂布平板法對牛奶中細菌進行培養(yǎng)計數，由于細菌的菌落會重疊，所以該統(tǒng)計結果一般培養(yǎng)計數，

21、由于細菌的菌落會重疊，所以該統(tǒng)計結果一般情況下低于實際值。情況下低于實際值。(3)將過程接種后的培養(yǎng)基放入37 恒溫培養(yǎng)箱中，一段時間后取出，統(tǒng)計4個平板上的菌落數分別是16、82、126和167，由于16數值偏差太大，不予計算，又因為圖中稀釋倍數為103，因此，經過消毒后的牛奶中，細菌數大約是(82126167)31031.25105104個/ML。(4)如題圖所示的方法為平板劃線法，劃線的次數越多，菌落越少，所以圖中C區(qū)更容易獲得單菌落?！敬鸢浮?(1)巴氏滅菌法(或巴氏消毒法)需要富含纖維素的土壤中的分解纖維素的微生物數目較多，在進行計數前要進行梯度稀釋(2)稀釋涂布平板低于(3)恒溫培

22、養(yǎng)箱1.25105(4)C4(2018寧夏育才中學高三上學期第二次寧夏育才中學高三上學期第二次月考月考)豆?jié){是人們喜愛的食品之一，很多家庭豆?jié){是人們喜愛的食品之一，很多家庭自制豆?jié){作早餐食品，為了檢測自制豆?jié){中自制豆?jié){作早餐食品，為了檢測自制豆?jié){中細菌含量，做如下圖所示操作?；卮鹣铝杏屑毦?，做如下圖所示操作?；卮鹣铝杏嘘P問題：關問題：(1)在接種前，常常隨機取若干滅菌后的空白平板進行在接種前，常常隨機取若干滅菌后的空白平板進行培養(yǎng)一段時間，這樣做的目的是培養(yǎng)一段時間，這樣做的目的是_。(2)為了對自制豆?jié){中細菌進行計數，應采用的接種方為了對自制豆?jié){中細菌進行計數，應采用的接種方法是法是_。

23、采用這種方法接種培養(yǎng)時，取最終的豆?jié){。采用這種方法接種培養(yǎng)時，取最終的豆?jié){稀釋液稀釋液0.1 mL滴在平板培養(yǎng)基上，操作前一般用滴在平板培養(yǎng)基上，操作前一般用_法對接種工具進行滅菌。法對接種工具進行滅菌。(3)用上述方法接種、培養(yǎng)后統(tǒng)計用上述方法接種、培養(yǎng)后統(tǒng)計4個培養(yǎng)皿，菌落數分個培養(yǎng)皿，菌落數分別為別為25個、個、31個、個、33個、個、35個，則可以推測每毫升自制豆個，則可以推測每毫升自制豆?jié){中含細菌數為漿中含細菌數為_個。該結果往往較實際值偏小，個。該結果往往較實際值偏小，原因是原因是_?！窘馕鼋馕觥?分析圖示操作過程可知，分析圖示操作過程可知，10 mL豆?jié){中加豆?jié){中加90 mL無菌

24、水，表示對豆?jié){稀釋了無菌水，表示對豆?jié){稀釋了10倍，之后每取出倍，之后每取出1 mL稀釋后的豆?jié){液加稀釋后的豆?jié){液加9 mL無菌水，再稀釋無菌水，再稀釋3個個10倍，累計可得倍，累計可得10 mL豆?jié){最后被稀釋了豆?jié){最后被稀釋了104倍，再取最后的稀倍，再取最后的稀釋豆?jié){進行涂布平板培養(yǎng)，觀察、統(tǒng)計菌落釋豆?jié){進行涂布平板培養(yǎng)，觀察、統(tǒng)計菌落數。數。(1)在接種前，培養(yǎng)滅菌后的空白平板的目在接種前，培養(yǎng)滅菌后的空白平板的目的是檢測培養(yǎng)基是否感染雜菌或是否徹底滅的是檢測培養(yǎng)基是否感染雜菌或是否徹底滅菌。菌。(2)為了對豆?jié){中細菌進行計數，常采用稀釋涂布平板法。對接種工具涂布器滅菌常采用灼燒滅菌。(

25、3)若用上述方法培養(yǎng)設置4個培養(yǎng)皿，其中一個平板的菌落數只有25個，沒有達到計數菌落數要求的范圍(30300個)，應舍去；其余三個平板菌落數分別為31個、33個、35個用于求平均值計數。根據題干信息，豆?jié){被稀釋了104倍，因此可以推測豆?jié){中每毫升含細菌數(313335)30.11043.3106個。由于個別菌落可能是由2個或多個細菌形成，因此運用這種方法統(tǒng)計的結果往往較實際值偏小?！敬鸢浮?(1)檢測培養(yǎng)基是否感染雜菌或是否徹底滅菌(2)稀釋涂布平板法灼燒(3)3.3106少數菌落可能是由2個或多個細菌形成【易錯警示易錯警示】 消毒和滅菌消毒和滅菌考法考法3大腸桿菌的純化方法及過程分析大腸桿菌

26、的純化方法及過程分析5下圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平下圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線法的操作結果。板劃線法的操作結果。下列敘述中錯誤的是下列敘述中錯誤的是()A甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能取菌液才能取菌液B對于濃度較高的菌液，如甲中的稀釋對于濃度較高的菌液，如甲中的稀釋倍數僅為倍數僅為102，則所得的菌落不一定是由單一，則所得的菌落不一定是由單一的細胞或孢子繁殖而成的細胞或孢子繁殖而成C乙培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求乙培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求D乙中連續(xù)劃線的起點是上一次劃線的乙中連續(xù)劃線的起點是上一次劃線的末端末端【解

27、析解析】 灼燒后的涂布器如果沒有冷卻灼燒后的涂布器如果沒有冷卻就接觸菌種，會將菌體殺死，就接觸菌種，會將菌體殺死，A正確；稀釋正確；稀釋倍數過低會導致多個菌體聚集在一起繁殖成倍數過低會導致多個菌體聚集在一起繁殖成菌落，菌落，B正確；平板劃線法中最后一次劃線的正確；平板劃線法中最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細胞或孢子末端處形成的菌落才是由單一的細胞或孢子繁殖而成，這種菌落才符合要求，繁殖而成，這種菌落才符合要求，C錯誤；錯誤；連續(xù)劃線中，除了第一次劃線外，每一次劃連續(xù)劃線中，除了第一次劃線外，每一次劃線的起點是上一次劃線的末端，目的是使得線的起點是上一次劃線的末端，目的是使得菌體的密

28、度越來越小，保證最后劃線末端處菌體的密度越來越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細胞或孢子繁殖而成，的菌落是由單一的細胞或孢子繁殖而成，D正確。正確?！敬鸢复鸢浮?C6下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關問題。方法，請回答相關問題。(1)圖甲是利用圖甲是利用_法進行微生物接種法進行微生物接種，圖乙是利用，圖乙是利用_法進行微生物接種。法進行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是這兩種方法所用的接種工具分別是_和和_；對這兩種接種工具進行滅菌和；對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方法依次是消毒的方法依次是_和酒精消毒。和酒精消毒。(2)接種操作為

29、什么一定要在火焰附近進行接種操作為什么一定要在火焰附近進行？_。(3)接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細菌時為接種后，在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)細菌時為什么進行倒置培養(yǎng)？什么進行倒置培養(yǎng)？_。(4)如圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的如圖是采用上述接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，其接種方法是效果圖解，其接種方法是_(填填“圖甲圖甲”或或“圖乙圖乙”)?！窘馕鼋馕觥?圖甲和圖乙分別是平板劃線法和稀釋涂布平圖甲和圖乙分別是平板劃線法和稀釋涂布平板法，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器板法，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環(huán)和涂布器。由于在酒精燈火焰附近存在著無菌區(qū)域，因此接種常在。由于在酒精燈火焰附近存

30、在著無菌區(qū)域，因此接種常在火焰附近進行。在微生物培養(yǎng)過程中會產生水，對微生物火焰附近進行。在微生物培養(yǎng)過程中會產生水，對微生物的生長造成影響，故需要倒置培養(yǎng)。的生長造成影響，故需要倒置培養(yǎng)?！敬鸢复鸢浮?(1)平板劃線平板劃線稀釋涂布平板稀釋涂布平板接種環(huán)接種環(huán)涂布涂布器器灼燒滅菌灼燒滅菌(2)火焰附近存在著無菌區(qū)域火焰附近存在著無菌區(qū)域(3)避免培養(yǎng)過程產生的水分影響微生物的生長避免培養(yǎng)過程產生的水分影響微生物的生長(4)圖乙圖乙【歸納總結歸納總結】 兩種純化細菌方法的比較兩種純化細菌方法的比較考點二考點二微生物的篩選和計數微生物的篩選和計數1土壤中分解尿素的細菌的分離與計數土壤中分解尿素的

31、細菌的分離與計數(1)分離原理：土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因分離原理：土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成為它們能合成_，這種物質在把尿素分解成無機物，這種物質在把尿素分解成無機物的過程中起到的過程中起到_作用。作用。脲酶脲酶催化催化( 2 ) 統(tǒng) 計 菌 落 數 目 一 般 用統(tǒng) 計 菌 落 數 目 一 般 用_法。法。稀釋涂布平板稀釋涂布平板統(tǒng)計菌落數目時，培養(yǎng)基表面生長的統(tǒng)計菌落數目時，培養(yǎng)基表面生長的1個菌落，來源于樣品稀釋液中個菌落，來源于樣品稀釋液中_個活菌。個活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數在為了保證結果準確，一般選擇菌落數在_的平板進行計數。的平板進行計數

32、。從平板上的菌落數推測出每克樣品中的從平板上的菌落數推測出每克樣品中的菌落數的計算方法是菌落數的計算方法是_。利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計菌落數目利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計菌落數目的關鍵是恰當的的關鍵是恰當的_。130300(平均菌落數平均菌落數涂布的稀釋液體積涂布的稀釋液體積)稀釋倍數稀釋倍數稀釋度稀釋度【特別提醒特別提醒】 用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數往往比活菌的實際數目低，這是因為菌落數往往比活菌的實際數目低，這是因為當兩個或多個細胞在一起時，平板上觀察到當兩個或多個細胞在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。的只是一個菌落。( 3 ) 實 驗 流 程 ： 土 壤 取

33、樣實 驗 流 程 ： 土 壤 取 樣_微生物的培養(yǎng)與觀察微生物的培養(yǎng)與觀察細細菌的計數。菌的計數。樣品的稀釋樣品的稀釋【知識拓展知識拓展】 用顯微鏡直接計數法計數用顯微鏡直接計數法計數：血細胞計數板法：血細胞計數板法(1)結構：常用的是1 MM1 MM0.1 MM方格的計數板(如圖)。每個計數板上有兩個計數室，每個計數室上刻有9個大方格，其中只有中間的大方格為計數室，大方格的長和寬各為1 MM，深度為0.1 MM，其容積為0.1 MM3；大方格內分為25中格，每一中格又分為16小格，即大方格是由400個小方格組成。(2)操作：將清潔干燥的血球計數板的計數室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的

34、菌液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，充滿計數室。(3)計數：在顯微鏡下計數45個中方格內的菌體數，求出每個小方格所含有的細菌的平均數，按照以下公式計算：每毫升原液含有的菌數每小格平均細菌數400104原液被稀釋倍數。(2)纖維素分解菌的篩選纖維素分解菌的篩選原理原理篩選方法：篩選方法：_染色法，即染色法，即通過是否產生通過是否產生_來篩選纖維素分解來篩選纖維素分解菌。菌。培養(yǎng)基：以培養(yǎng)基：以_為唯一碳源的選為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。擇培養(yǎng)基。實驗流程實驗流程土壤取樣：富含土壤取樣：富含_的環(huán)境的環(huán)境選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)：用_培養(yǎng)，以增培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的濃度加纖維素分解菌的濃度剛果

35、紅剛果紅透明圈透明圈纖維素纖維素纖維素纖維素選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基_：制備系列稀釋液：制備系列稀釋液涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產生挑選產生_的菌落的菌落 【判斷與思考判斷與思考】1判斷下列說法的正誤。判斷下列說法的正誤。(1)選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類。選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類。()(2)對細菌進行計數只能采用稀釋涂布平板法，而不能對細菌進行計數只能采用稀釋涂布平板法，而不能用平板劃線法。用平板劃線法。()梯度稀釋梯度稀釋透明圈透明圈(3)篩選能分解尿素的細菌所利用的培養(yǎng)基篩選能分解尿素的細菌所利用的培養(yǎng)

36、基中，尿素是唯一的氮源。中，尿素是唯一的氮源。()(4)分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低。尿素轉化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低。()(5)剛果紅可以與纖維素形成透明復合物，剛果紅可以與纖維素形成透明復合物，所以可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素所以可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。分解菌。()2根據題圖，回答問題。根據題圖，回答問題。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落如圖幾株有透明降解圈的菌落如圖1所示，并用篩所示，并用篩選到的纖維素酶高產菌株選到的纖維素

37、酶高產菌株J1和和J4，在不同的溫，在不同的溫度和度和pH條件下進行發(fā)酵，測得發(fā)酵液中酶活條件下進行發(fā)酵，測得發(fā)酵液中酶活性的結果見圖性的結果見圖2，請分析：，請分析：(1)透明圈是如何形成的？透明圈是如何形成的？【提示提示】 剛果紅可以與纖維素形成紅色剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，但并不與纖維素降解產物纖維二糖復合物，但并不與纖維素降解產物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。細菌分泌的纖維素和葡萄糖發(fā)生這種反應。細菌分泌的纖維素酶能將培養(yǎng)基中的纖維素降解成纖維二糖和酶能將培養(yǎng)基中的纖維素降解成纖維二糖和葡萄糖，形成透明圈。葡萄糖，形成透明圈。(2)圖圖1中透明圈大小代表什么？降解纖維中透明圈大

38、小代表什么？降解纖維素能力最強的菌落是哪種？素能力最強的菌落是哪種？【提示提示】 透明圈大小與纖維素酶的量和透明圈大小與纖維素酶的量和活性有關，降解纖維素能力最強的是菌落活性有關，降解纖維素能力最強的是菌落。(3)結合圖結合圖2推測哪種菌株更適合用于人工推測哪種菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵？瘤胃發(fā)酵？【提示提示】 J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)酵?？挤挤?選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析選擇培養(yǎng)基成分及配制方法的分析1(2016四川理綜改編四川理綜改編)下圖是從土壤中篩選產脲酶細下圖是從土壤中篩選產

39、脲酶細菌的過程。菌的過程。(1)圖中選擇培養(yǎng)基應以圖中選擇培養(yǎng)基應以_為唯一氮源；鑒別培為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加養(yǎng)基還需添加_作指示劑，產脲酶細菌在該培養(yǎng)基作指示劑，產脲酶細菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成_色。色。(2)在在5個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數為個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數為105的土的土壤樣品溶液壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數分別為菌落數分別為13、156、462、178和和191。該過程采取的接。該過程采取的接種方法是種方法是_，每

40、克土壤樣品中的細菌數量為，每克土壤樣品中的細菌數量為 _108個；與血細胞計數板計數法相比，此計數方個；與血細胞計數板計數法相比，此計數方法測得的細菌數較法測得的細菌數較_?！窘馕鼋馕觥?(1)脲酶由分解尿素的細菌產生脲酶由分解尿素的細菌產生，故需用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選該，故需用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選該類微生物。分解尿素的細菌合成的脲酶可以類微生物。分解尿素的細菌合成的脲酶可以將尿素分解成氨，故培養(yǎng)基中加入酚紅指示將尿素分解成氨，故培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑后，菌落周圍將出現紅色。劑后，菌落周圍將出現紅色。(2)稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計樣品中的活稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計樣品中的活菌數

41、，在計數時一般選擇菌落數在菌數，在計數時一般選擇菌落數在30300的的平板進行計數，并取平均值。每克樣品中的平板進行計數，并取平均值。每克樣品中的菌株數菌株數(C/V)M。因培養(yǎng)基上兩個或多個。因培養(yǎng)基上兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故統(tǒng)計結果往往較實際數目少；而用菌落，故統(tǒng)計結果往往較實際數目少；而用血細胞計數板計數時，死亡的、活的菌體都血細胞計數板計數時，死亡的、活的菌體都計數在內。計數在內?！敬鸢复鸢浮?(1)尿素尿素酚紅酚紅紅紅(2)稀釋涂稀釋涂布平板法布平板法1.75少少2苯酚是工業(yè)生產排放的有毒污染物質苯酚是工業(yè)生產排放

42、的有毒污染物質，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中廠產生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，如圖所示，為土壤樣品。請據圖回答下列為土壤樣品。請據圖回答下列問題：問題：(1)中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應加中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應加入入_作為碳源，作為碳源，中不同濃度碳源的中不同濃度碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)基_(填填“影響影響”或或“不影響不影響”)細細菌的數量，如

43、果要測定菌的數量，如果要測定中活細菌數量，常中活細菌數量，常采用采用_法。法。(2)為對照，微生物在為對照，微生物在中不生長，在中不生長，在中生長，中生長，與與培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于_；使用使用_法可法可以在以在上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細菌 時 進 行 倒 置 培 養(yǎng) 的 原 因 是 ：菌 時 進 行 倒 置 培 養(yǎng) 的 原 因 是 ： _。(3)實驗過程中如何防止其他微生物的污染實驗過程中如何防止其他微生物的污染？_?！窘馕鼋馕觥?根據微生物對營養(yǎng)的需求，在根據微生物對營養(yǎng)的需求，在培養(yǎng)基中加入或不加某些物質以達到促進目培養(yǎng)基中加入或不

44、加某些物質以達到促進目的菌生長，抑制或阻止其他雜菌生長的目的的菌生長，抑制或阻止其他雜菌生長的目的，然后再用稀釋涂布平板法、平板劃線法或，然后再用稀釋涂布平板法、平板劃線法或其他方法篩選出單個目的菌落，再進行接種其他方法篩選出單個目的菌落，再進行接種培養(yǎng)即可獲得純目的菌。為防止培養(yǎng)基中水培養(yǎng)即可獲得純目的菌。為防止培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)形成的水珠落入培養(yǎng)基中影響菌體生分蒸發(fā)形成的水珠落入培養(yǎng)基中影響菌體生長，所以要將培養(yǎng)皿倒置。在設計實驗時要長，所以要將培養(yǎng)皿倒置。在設計實驗時要注意單一變量原則和對照原則，操作中要嚴注意單一變量原則和對照原則，操作中要嚴格進行無菌操作。格進行無菌操作?！敬鸢浮?(1

45、)苯酚影響稀釋涂布平板(2)的培養(yǎng)基中沒有加入苯酚作為碳源，的培養(yǎng)基中加入了苯酚作為碳源稀釋涂布平板法或平板劃線防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基(3)培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程進行無菌操作【總結歸納總結歸納】 選擇培養(yǎng)基的制作方法選擇培養(yǎng)基的制作方法(1)在培養(yǎng)基全部營養(yǎng)成分具備的前提下，在培養(yǎng)基全部營養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質：依據某些微生物對某些物質的抗加入物質：依據某些微生物對某些物質的抗性，在培養(yǎng)基中加入某些物質，以抑制不需性，在培養(yǎng)基中加入某些物質，以抑制不需要的微生物生長，促進所需要的微生物生長要的微生物生長，促進所需要的微生物生長，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時

46、可抑制多種，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時可抑制多種細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中長，從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時可抑制細菌、放線菌的生長，加入青霉素時可抑制細菌、放線菌的生長，從而分離得到酵母菌和霉菌。從而分離得到酵母菌和霉菌。(2)通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達到分離微通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可分離生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機碳源氮源而無

47、法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的用空氣中的CO2制造有機物生存。制造有機物生存。(3)利用培養(yǎng)基的特定化學成分分離特定微利用培養(yǎng)基的特定化學成分分離特定微生物：如當石油是唯一碳源時，可抑制不能生物：如當石油是唯一碳源時，可抑制不能利用石油的微生物生長，使能夠利用石油的利用石油的微生物生長，使能夠利用石油的微生物生長，從而分離出能消除石油污染的微生物生長，從而分離出能消除石油污染的微生物。微生物。(4)通過某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高通過某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高鹽環(huán)境

48、中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離時易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無法生存。境中因酶失活而無法生存。考法考法2微生物的分離與計數微生物的分離與計數3(2018甘肅省會寧縣第一中學高三上學甘肅省會寧縣第一中學高三上學期月考期月考)甲、乙兩同學學習完微生物的實驗室甲、乙兩同學學習完微生物的實驗室培養(yǎng)與分離后，要利用所學知識研究環(huán)境中培養(yǎng)與分離后，要利用所學知識研究環(huán)境中微生物的情況。請回答相關問題：微生物的情況。請回答相關問題：.甲同學為了檢測飲用水中是否會有某種甲同

49、學為了檢測飲用水中是否會有某種細菌，配制如下培養(yǎng)基進行培養(yǎng)：細菌，配制如下培養(yǎng)基進行培養(yǎng)：蛋白胨10 g乳糖5 g蔗糖5 gK2HPO42 g蒸餾水1 000 mL將pH調到7.2(1)該培養(yǎng)基所含有的碳源有該培養(yǎng)基所含有的碳源有_；培養(yǎng)基的制備包括；培養(yǎng)基的制備包括計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，最后一步待培養(yǎng)基冷卻計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，最后一步待培養(yǎng)基冷卻至至_左右時，在左右時，在_火焰附近倒平板。火焰附近倒平板。(2)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進行基和培養(yǎng)器皿進行_(“消毒消毒”或或“滅菌滅菌”)

50、；操作者；操作者的雙手需進行清潔和的雙手需進行清潔和_(“消毒消毒”或或“滅菌滅菌”)。(3)對獲得的菌種可以依據菌落的對獲得的菌種可以依據菌落的_特特征對細菌進行初步的鑒定。征對細菌進行初步的鑒定。.乙同學從土壤中分離分解尿素細菌的相乙同學從土壤中分離分解尿素細菌的相關實驗。關實驗。(1)在培養(yǎng)基中加入在培養(yǎng)基中加入_指示劑，可初指示劑，可初步鑒定出該種細菌是否分解尿素。步鑒定出該種細菌是否分解尿素。(2)為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結果，為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結果，應 將 接 種 后 的 培 養(yǎng) 基 倒 置 于應 將 接 種 后 的 培 養(yǎng) 基 倒 置 于_中培養(yǎng)。要使該實驗中培養(yǎng)。

51、要使該實驗所得結果可靠，還應該同時在另一平板上接所得結果可靠，還應該同時在另一平板上接種等量的種等量的_作為對照進行實驗。作為對照進行實驗。(3)該同學利用該同學利用_法統(tǒng)計土壤樣品中法統(tǒng)計土壤樣品中尿素分解菌的菌落數時，尿素分解菌的菌落數時，1g樣品被稀釋樣品被稀釋106倍后，每個嚴格倍后，每個嚴格滅菌的培養(yǎng)皿中用了滅菌的培養(yǎng)皿中用了0.5 mL稀釋液，最終所用的稀釋液，最終所用的5個培養(yǎng)個培養(yǎng)皿所得的菌落數分別是皿所得的菌落數分別是112、132、141、130、140，則每，則每克樣品中的菌株數為克樣品中的菌株數為_?！窘馕鼋馕觥?本題考查微生物的培養(yǎng)和分離本題考查微生物的培養(yǎng)和分離計數

52、的相關知識。題目比較簡單，解題思路計數的相關知識。題目比較簡單，解題思路是根據題意梳理相關基礎知識，然后結合題是根據題意梳理相關基礎知識，然后結合題目要求分析作答即可。目要求分析作答即可。.(1)由表格內容可知，該培養(yǎng)基的碳源主由表格內容可知，該培養(yǎng)基的碳源主要是乳糖、蔗糖，蛋白胨作為主要的氮源也要是乳糖、蔗糖，蛋白胨作為主要的氮源也能提供碳源；培養(yǎng)基的制備包括計算、稱量能提供碳源；培養(yǎng)基的制備包括計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，最后一步待培養(yǎng)基、溶化、滅菌、倒平板，最后一步待培養(yǎng)基冷卻至冷卻至50 左右時，在酒精燈火焰附近倒平左右時，在酒精燈火焰附近倒平板。板。(2)消毒是指使用較為溫和的物

53、理或化學方消毒是指使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分微生物法殺死物體表面或內部的部分微生物(不包括不包括芽孢和孢子芽孢和孢子)。滅菌則是指使用強烈的理化因。滅菌則是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜孢子。在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進行滅菌；菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿進行滅菌；操作者的雙手需進行清潔和消毒。操作者的雙手需進行清潔和消毒。(3)當單個或少數細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，便會當單個或少數細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，便會形成一個肉眼可

54、見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，稱形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，稱為菌落。每種細菌在一定條件下形成的菌落，可以作為菌種為菌落。每種細菌在一定條件下形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據。因此，對獲得的菌種可以依據菌落的形狀鑒定的重要依據。因此，對獲得的菌種可以依據菌落的形狀、大小、顏色和隆起程度等特征對細菌進行初步的鑒定。、大小、顏色和隆起程度等特征對細菌進行初步的鑒定。.(1)在細菌分解尿素的反應中，細菌產生的脲酶可將尿在細菌分解尿素的反應中，細菌產生的脲酶可將尿素分解成為氨。為證明分離得到的細菌是否可以分解尿素，素分解成為氨。為證明分離得到的細菌是否可以分解尿素，可

55、在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若該指示劑變紅，則可初步可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若該指示劑變紅，則可初步鑒定該細菌可以分解尿素。鑒定該細菌可以分解尿素。(2)要想使微生物快速地繁殖，就要置于適宜的條件下，特別是溫度，所以要將接種后的培養(yǎng)基倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；要使該實驗所得結果可靠，還應該同時在另一平板上接種等量的無菌水作為對照進行實驗。(3)常用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中的活菌數。每克樣品中的菌株數(CV)M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，本實驗中的C(112132141130140)5131，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積，本實驗中的V0.5 ML，M代表稀釋倍數，本實

56、驗中的M106，因此，每克樣品中的菌株數為(1310.5)1062.62108?！敬鸢复鸢浮?.(1)蔗糖、乳糖和蛋白胨蔗糖、乳糖和蛋白胨50 酒精燈酒精燈(2)滅菌滅菌消毒消毒(3)形狀、大小、顏色和隆起程度等形狀、大小、顏色和隆起程度等.(1)酚紅酚紅(2)恒溫培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)箱無菌水無菌水(3)稀釋涂布平板稀釋涂布平板2.621084(2018江西省贛州市第四中學高三上學期月考江西省贛州市第四中學高三上學期月考)進入進入冬季，部分城市出現嚴重霧霾，與秸稈野外焚燒有一定關冬季，部分城市出現嚴重霧霾，與秸稈野外焚燒有一定關系。為破解秸稈處理瓶頸，微生物專家力圖通過微生物降系。為破解秸稈處理瓶頸

57、，微生物專家力圖通過微生物降解技術使秸稈能盡快腐爛掉，增加土壤肥力，緩解環(huán)境污解技術使秸稈能盡快腐爛掉，增加土壤肥力，緩解環(huán)境污染。試分析并回答有關問題：染。試分析并回答有關問題：(1)專家研制的降解秸稈的催腐劑是十余種專家研制的降解秸稈的催腐劑是十余種能分解纖維素的霉菌、細菌和酵母菌的組合能分解纖維素的霉菌、細菌和酵母菌的組合。其中。其中_在細胞結構上與其他兩者在細胞結構上與其他兩者不同。不同。(2)纖維素酶是一種復合酶，其中的葡萄糖纖維素酶是一種復合酶，其中的葡萄糖苷酶可以將苷酶可以將_分解為分解為_。(3)微生物專家為從發(fā)黑的樹干上分離出有微生物專家為從發(fā)黑的樹干上分離出有分解纖維素能力

58、的高產菌株，制備了選擇培分解纖維素能力的高產菌株，制備了選擇培養(yǎng)基，將菌液進行一系列養(yǎng)基，將菌液進行一系列_，從而，從而得到單個菌落，得到單個菌落， 再采用再采用_方法進方法進行鑒定，得到上圖的菌落。那么，圖中降解行鑒定，得到上圖的菌落。那么，圖中降解纖維素能力最強的菌落是纖維素能力最強的菌落是_(填圖中序號填圖中序號)。(4)圖中所示培養(yǎng)基從物理狀態(tài)上看，屬于圖中所示培養(yǎng)基從物理狀態(tài)上看，屬于_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。【解析解析】 本題主要考查分離土壤中能分解纖維素的微生物本題主要考查分離土壤中能分解纖維素的微生物的相關知識，要求考生能夠識記原核細胞與真核細胞結構的的相關知識，要求考生能夠識記原核細

59、胞與真核細胞結構的異同點，識記纖維素酶的種類及其專一性，掌握微生物分離異同點，識記纖維素酶的種類及其專一性，掌握微生物分離與培養(yǎng)的一般步驟。與培養(yǎng)的一般步驟。纖維素的單體是葡萄糖，纖維素酶能夠將纖維素分解為葡纖維素的單體是葡萄糖，纖維素酶能夠將纖維素分解為葡萄糖。纖維素酶是一種復合酶，包括萄糖。纖維素酶是一種復合酶，包括C1酶、酶、Cx酶和葡萄糖苷酶和葡萄糖苷酶。纖維素分解菌可以用剛果紅染液進行鑒別，剛果紅可以酶。纖維素分解菌可以用剛果紅染液進行鑒別，剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成，會出現以纖維

60、素分解菌為中心的透明圈色復合物無法形成，會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。，我們可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。(1)霉菌和酵母菌屬于真核生物中的真菌，細菌屬于原核霉菌和酵母菌屬于真核生物中的真菌，細菌屬于原核生物，原核細胞和真核細胞在結構上最主要的區(qū)別是原核細生物，原核細胞和真核細胞在結構上最主要的區(qū)別是原核細胞沒有核膜包被的成形的細胞核。胞沒有核膜包被的成形的細胞核。(2)纖維素酶是一種復合酶，其中的葡萄糖苷酶可以將纖纖維素酶是一種復合酶，其中的葡萄糖苷酶可以將纖維二糖分解為葡萄糖。維二糖分解為葡萄糖。(3)微生物專家為從發(fā)黑的樹干

61、上分離出有分解纖維素能微生物專家為從發(fā)黑的樹干上分離出有分解纖維素能力的高產菌株，制備了選擇培養(yǎng)基，將菌液進行一系列梯度力的高產菌株，制備了選擇培養(yǎng)基，將菌液進行一系列梯度稀釋，從而得到單個菌落，再采用剛果紅染色方法進行鑒定稀釋，從而得到單個菌落，再采用剛果紅染色方法進行鑒定；纖維素酶的量越多，活性越強，分解的纖維素越多，透明；纖維素酶的量越多，活性越強，分解的纖維素越多，透明降解圈越大，所以圖中降解纖維素能力最強的菌株是降解圈越大，所以圖中降解纖維素能力最強的菌株是。(4)圖中所示培養(yǎng)基從物理狀態(tài)上看，屬于固體培養(yǎng)基。圖中所示培養(yǎng)基從物理狀態(tài)上看，屬于固體培養(yǎng)基?！敬鸢复鸢浮?(1)細菌細菌

62、(2)纖維二糖纖維二糖葡萄糖葡萄糖(3)梯度稀釋梯度稀釋剛果紅染色剛果紅染色(4)固體固體【歸納總結歸納總結】 兩種微生物篩選方法的比兩種微生物篩選方法的比較較項目土壤中分解尿素的細菌的分離分解纖維素的微生物的分離方法使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行培養(yǎng)利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進行培養(yǎng)1(2018海淀中學高三第一學期期中練習海淀中學高三第一學期期中練習)在微生物培在微生物培養(yǎng)的過程中，需要通過選擇培養(yǎng)或鑒別培養(yǎng)的方法來篩選養(yǎng)的過程中，需要通過選擇培養(yǎng)或鑒別培養(yǎng)的方法來篩選出目標菌種，下列與之相關的敘述中不正確的是出目標菌種，下列與之相關的敘述中不正確的是()A纖維素分解菌能夠分解剛果紅染

63、料，從而使菌落周纖維素分解菌能夠分解剛果紅染料，從而使菌落周圍出現透明圈圍出現透明圈B尿素分解菌能夠將尿素分解為氨，從而使酚紅指示尿素分解菌能夠將尿素分解為氨，從而使酚紅指示劑變紅劑變紅C在培養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具在培養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具有相應抗性的菌株有相應抗性的菌株D在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上生長的乳酸在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上生長的乳酸菌菌落周圍會出現菌菌落周圍會出現“溶鈣圈溶鈣圈”【解析解析】 纖維素分解菌能夠分解纖維素纖維素分解菌能夠分解纖維素，在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的，在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物，當纖維素被分解后纖維素形成紅色復合物，

64、當纖維素被分解后，紅色復合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現以，紅色復合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，纖維素分解菌為中心的透明圈，A錯誤；尿錯誤；尿素分解菌能夠將尿素分解為氨，使培養(yǎng)基呈素分解菌能夠將尿素分解為氨，使培養(yǎng)基呈堿性，從而使酚紅指示劑變紅，堿性，從而使酚紅指示劑變紅，B正確；在培正確；在培養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具有相應抗性養(yǎng)基中加入抗生素能夠篩選出具有相應抗性的菌株，的菌株，C正確；在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上正確；在含有碳酸鈣的培養(yǎng)基上生長的乳酸菌菌落周圍會出現生長的乳酸菌菌落周圍會出現“溶鈣圈溶鈣圈”，D正確。正確?！敬鸢复鸢浮?A2(2018北京海淀首師大附中

65、高三月考北京海淀首師大附中高三月考)硝化細菌廣泛存在于通氣性較好的土壤中，硝化細菌廣泛存在于通氣性較好的土壤中，下列關于其代謝敘述正確的是下列關于其代謝敘述正確的是()A碳源為葡萄糖碳源為葡萄糖B培養(yǎng)時需隔絕空氣培養(yǎng)時需隔絕空氣 C氮源是氮氣氮源是氮氣 D培養(yǎng)時需適宜的溫度培養(yǎng)時需適宜的溫度【解析解析】 硝化細菌可以利用氨氧化過程產生的化學能將硝化細菌可以利用氨氧化過程產生的化學能將二氧化碳和水轉變成有機物，屬于化能自養(yǎng)型生物，所以培二氧化碳和水轉變成有機物，屬于化能自養(yǎng)型生物，所以培養(yǎng)硝化細菌時培養(yǎng)基成分不需要有機碳源，其碳源為二氧化養(yǎng)硝化細菌時培養(yǎng)基成分不需要有機碳源，其碳源為二氧化碳，碳

66、，A項錯誤；由題干中項錯誤；由題干中“硝化細菌廣泛存在于通氣性較好硝化細菌廣泛存在于通氣性較好的土壤中的土壤中”可知，硝化細菌應屬于需氧型生物，所以培養(yǎng)時可知，硝化細菌應屬于需氧型生物，所以培養(yǎng)時不需要隔絕空氣，不需要隔絕空氣，B項錯誤；固氮微生物的氮源是氮氣，而項錯誤；固氮微生物的氮源是氮氣，而硝化細菌不能直接利用氮氣做氮源，硝化細菌不能直接利用氮氣做氮源，C項錯誤；硝化細菌能項錯誤；硝化細菌能利用利用NH3氧化釋放的能量把二氧化碳和水合成有機物，需要氧化釋放的能量把二氧化碳和水合成有機物，需要酶的催化作用，所以培養(yǎng)時需要適宜的溫度，酶的催化作用，所以培養(yǎng)時需要適宜的溫度，D項正確。項正確。【答案答案】 D3(2018山東省濱州博興三中高三期末山東省濱州博興三中高三期末)下面有關倒平板的操作，錯誤的是下面有關倒平板的操作，錯誤的是()A將滅過菌的空培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌將滅過菌的空培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上面上B使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰C等待平板冷卻凝固后，將平板倒過來等待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置放置D把培養(yǎng)皿打開，將培養(yǎng)皿蓋倒放在桌把培養(yǎng)皿打