2018版高考生物一輪復(fù)習(xí) 第十二單元 生物技術(shù)實踐 第二講 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用學(xué)案 新人教版

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1、 第二講　微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 [考綱展示] 1．微生物的分離和培養(yǎng)　2.某種微生物數(shù)量的測定　3.培養(yǎng)基對微生物的選擇作用　4.微生物在其他方面的應(yīng)用 授課提示：對應(yīng)學(xué)生用書第277頁 一、微生物的實驗室培養(yǎng) 1．培養(yǎng)基 (1)概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。 (2)營養(yǎng)構(gòu)成：水、無機鹽、碳源、氮源和生長因子。 (3)類型：根據(jù)物理性質(zhì)可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基；根據(jù)功能可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。 2．無菌技術(shù) (1)含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。 (2)關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵。

2、 (3)方法 3．大腸桿菌的純化培養(yǎng) (1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。 (2)純化大腸桿菌 ①關(guān)鍵的步驟是接種。 ②純化培養(yǎng)方法：平板劃線法和稀釋涂布法。 ③純化培養(yǎng)原理：在培養(yǎng)基上得到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的菌落，即可獲得較純的菌種。 二、土壤中分解尿素的細菌的分離和計數(shù) 1．分離原理：土壤中細菌之所以能分解尿素，是由于它們能合成脲酶，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起催化作用。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基能促進分解尿素的細菌的生長和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生長，從而將目的菌分離。 2．統(tǒng)計菌落數(shù)目：統(tǒng)計樣品中的活菌一般用稀釋

3、涂布平板法。 3．實驗流程：土壤取樣→制備培養(yǎng)基→微生物的培養(yǎng)與觀察→細菌的計數(shù)。 三、分解纖維素的微生物的分離 1．纖維素酶 (1)組成：纖維素酶是一種復(fù)合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用 2．菌種篩選 (1)方法：剛果紅染色法。 (2)原理 　　　　　　　　　纖維素分解菌 　　　　　　　　　　　↓ →紅色復(fù)合物紅色消失、出現(xiàn)透明圈。 即：使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。 3．篩選流程 土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境 　↓ 選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解 　　 菌的數(shù)量 　↓

4、 梯度稀釋 　↓ 涂布平板：將樣品涂布于含CR的鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 　 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍出現(xiàn)透明圈 1．無菌操作技術(shù)包括消毒和滅菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學(xué)藥劑消毒和紫外線消毒等；滅菌包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。 2．培養(yǎng)基的制備包括計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。 3．大腸桿菌的純化包括平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法要求多次劃線，稀釋涂布平板法要求菌液要充分地稀釋。 4．微生物的計數(shù)要求制作多個平板，且每個平板上能長出30～300個菌落。

5、 5．尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。 有關(guān)微生物培養(yǎng)的易混易錯點 兩種常用剛果紅(CR)染色法的比較 方法 先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應(yīng) 在倒平板時就加入剛果紅 過程 培養(yǎng)基長出菌落―→覆蓋CR溶液(質(zhì)量濃度為1 mg/mL)倒去CR溶液―→加入NaCl溶液(物質(zhì)的量濃度為1 mol/L)倒掉NaCl溶液―→產(chǎn)生透明圈 配制CR溶液(質(zhì)量濃度為10 mg/mL)―→滅菌―→按照1 mL CR溶液/200 mL培養(yǎng)基比例混勻―→倒平板―→培養(yǎng)―→透明圈 優(yōu)點 顯示出的顏

6、色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用 操作簡便，不存在菌落的混雜問題 授課提示：對應(yīng)學(xué)生用書第278頁 考點一　培養(yǎng)基及微生物的純化培養(yǎng)技術(shù) [核心考點通關(guān)] 一、微生物的培養(yǎng)基 1．微生物的培養(yǎng)基 營養(yǎng)要素 來源 功能 碳源 無機碳源 CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無機物 ①構(gòu)成細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物 ②既是碳源又是能源(有機碳源) 有機碳源 糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機酸、石油、花生粉餅等 氮源 無機氮源 無機氮：NH3、銨鹽、硝酸鹽、N2等 合成含氮的代謝產(chǎn)物 有機氮源 牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸 合成蛋白質(zhì)、

7、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物 生長因子 維生素、氨基酸、堿基 ①酶和核酸的組成成分 ②參與代謝過程中的酶促反應(yīng) 2.按物理狀態(tài)分類 培養(yǎng)基種類 特點 用途 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑 工業(yè)生產(chǎn) 固體培養(yǎng)基 加凝固劑(如瓊脂) 微生物分離、鑒定，活菌計數(shù)，菌種保藏 半固體培養(yǎng)基 觀察微生物的運動、分類、鑒定 3.按功能分類 種類 制備方法 原理 用途 舉例 選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì) 依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的特殊需求或抗性而設(shè)計 從眾多微生物中分離所需的微生物 加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌 鑒別培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化

8、學(xué)藥品 產(chǎn)生特定的顏色或其他變化 鑒別不同種類的微生物 用伊紅—美藍培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌 二、消毒與滅菌 條件 結(jié)果 常用方法 應(yīng)用范圍 消毒 較為溫和的物理或化學(xué)方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對人體有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高溫的液體 化學(xué)藥劑消毒法 用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源 滅菌 強烈的理化因素 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 燃燒滅菌法 接種工具 干熱滅菌法 玻璃器皿、金屬工具 高壓蒸汽滅菌法 培養(yǎng)基及容器 三、大腸桿菌的純化 1．原理：在培養(yǎng)基上將細

9、菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是純化的細菌菌落。 2．純化微生物的接種方法 比較項目 平板劃線法 稀釋涂布平板法 關(guān)鍵操作 接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線 ①一系列的梯度稀釋； ②涂布平板法操作 注意事項 每次劃線前后均需灼燒接種環(huán) 稀釋度要足夠高，為確保實驗成功可以增加稀釋度 菌體獲取 在具有顯著的菌落特征的菌落中挑取菌體 從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體 優(yōu)點 可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生物的單細胞菌落 既可以獲得單細胞菌落，又能對微生物計數(shù) 缺點 不能對微生物計數(shù) 操作復(fù)雜，需要涂布多個平板 3.平板劃線操作的

10、注意事項 (1)操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要對接種環(huán)進行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表： 第一次操作 每次劃線之間 劃線結(jié)束 目的 殺死接種環(huán)上原有的微生物 殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少 殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者 (2)灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。 (3)第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。 (4)劃線時

11、最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。 (5)劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。 [針對訓(xùn)練] 1．甲、乙兩同學(xué)學(xué)習(xí)完微生物的實驗室培養(yǎng)后，要利用所學(xué)知識研究水中微生物的情況。 Ⅰ.甲同學(xué)為了檢測飲用水中是否含有某種細菌，配制如下培養(yǎng)基進行培養(yǎng)： 蛋白胨 10 g 乳糖 5 g 蔗糖 5 g K2HPO4 2 g 蒸餾水 1 000 mL 將pH調(diào)到7.2 (1)該培養(yǎng)基所含有的碳源有________，其功能是 ________________________________________________________________________

12、 ________________________________________________________________________。 (2)該培養(yǎng)基所含有的氮源有________，其功能是 ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)該培養(yǎng)基除含碳源、氮源外，還有微生物需要的其他營養(yǎng)物質(zhì)是_______________

13、_________________________________________________________。 (4)用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時，還需要控制哪些理化條件？________________________________________________________________________。 Ⅱ.乙同學(xué)為了調(diào)查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察。請回答與此實驗相關(guān)的問題。 (1)乙同學(xué)配制的培養(yǎng)基為________(物理性質(zhì))培養(yǎng)基，其中含有的蛋白胨、淀粉分別為細菌提供了________和________。 (2)

14、對培養(yǎng)基進行滅菌時，應(yīng)該采用的方法是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于______________中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 ℃。要使該實驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種______________作為對照進行實驗。 解析：Ⅰ.對異養(yǎng)微生物來說，含C、H

15、、O、N的化合物既是碳源，又是氮源，因此蛋白胨既可作為碳源，又可作為氮源。培養(yǎng)微生物需要控制的理化條件有溫度、氧氣濃度和pH等。Ⅱ.調(diào)查湖水中細菌的污染情況，就要計數(shù)，用固體培養(yǎng)基；蛋白胨來源于動物原料，含有維生素、糖和有機氮等營養(yǎng)物質(zhì)，在培養(yǎng)基中主要是作為氮源。實驗室的滅菌方法一般有灼燒滅菌法(適合于接種工具的滅菌)、干熱滅菌法(適合于耐高溫的、需要保持干燥的物品的滅菌)、高壓蒸汽滅菌法(適合于培養(yǎng)基等物體的滅菌)。要想使微生物快速地繁殖，就要將培養(yǎng)基置于適宜的條件下，特別是溫度，所以要置于恒溫培養(yǎng)箱中，對照實驗就是要設(shè)置一個接種了無菌水的培養(yǎng)基進行比較。 答案：Ⅰ.(1)蔗糖、乳糖、蛋白

16、胨　主要用于提供能量以及構(gòu)成微生物的細胞物質(zhì)和代謝產(chǎn)物　(2)蛋白胨　主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物　(3)水、無機鹽　(4)溫度、氧氣濃度等 Ⅱ.(1)固體　氮源(碳源不作要求)　碳源　(2)高壓蒸汽滅菌　(3)恒溫培養(yǎng)箱　無菌水 考點二　微生物的計數(shù)方法 [核心考點通關(guān)] 1．兩種計數(shù)方法的比較 比較項目 間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法) 直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法) 原理 當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌 利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容

17、積的樣品中微生物的數(shù)量 公式 每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×M C：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)； V：涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)； M：稀釋倍數(shù) 每毫升原液所含細菌數(shù)：每小格平均細菌數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù) 缺點 當(dāng)兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落 不能區(qū)分細胞死活 結(jié)果 比實際值偏小 比實際值偏大 2.設(shè)置對照和重復(fù) 比較項目 對照 重復(fù) 目的 排除非測試因素對實驗結(jié)果的影響 排除偶然因素對實驗結(jié)果的影響 實例 空白對照：確定培養(yǎng)基制作是否合格 同一稀釋度涂布至少3個平板 [易混易錯] “選擇菌落數(shù)

18、在30～300的平板”的兩個提醒 用稀釋涂布平板法計數(shù)微生物時，要求選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。解題時易出現(xiàn)以下誤解： (1)只得到1個菌落數(shù)在30～300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復(fù)原則，易受到偶然因素的影響。 (2)得到3個或3個以上菌落數(shù)在30～300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況： ①不同平板間差異較大，如得到3個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖然菌落數(shù)均在“30～300”，這也是不正確的，因為“34”與“230”“240”差異太大，應(yīng)重新實驗找出原因。 ②不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。 可見

19、，并不是只要得到3個“菌落數(shù)在30～300的平板”即可，而應(yīng)該是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數(shù)在30～300的平板”且無較大差異，說明實驗操作合格，才能按照計算公式進行計算。 [針對訓(xùn)練] 2．圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。 (1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以________為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加________作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成________色。 (2)在5個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品溶液0.1 mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13

20、、156、462、178和191。 該過程采取的接種方法是________，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為________×108個；與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)較 ________。 (3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為________，突變基因表達的蛋白含________個氨基酸。 解析：(1)脲酶由分解尿素的細菌產(chǎn)生，故需用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選該類微生物。分解尿素的細菌合成的脲酶可以將尿素分解

21、成氨，故培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑后，菌落周圍將出現(xiàn)紅色。(2)稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)，在計數(shù)時一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)，并取平均值。每克樣品中的菌株數(shù)＝(C/V)×M。因培養(yǎng)基上兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故統(tǒng)計結(jié)果往往較實際數(shù)目少；而用血細胞計數(shù)板計數(shù)時，死亡的、活的菌體都計數(shù)在內(nèi)。(3)乙圖顯示，mRNA在箭頭以前有273個核苷酸(為91個密碼子)，箭頭處增加的70個核苷酸與后續(xù)的AG剛好組成24個密碼子，后面的UGA為終止密碼。突變基因表達的蛋白質(zhì)含91＋24＝115(個)氨基酸。 答案：(1)尿素　酚紅　紅　(2)稀釋涂布平板

22、法　1.75　少　(3)UGA　115 考點三　微生物的篩選與鑒別 [核心考點通關(guān)] 1．微生物的鑒別方法 (1)菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別。 (2)指示劑鑒別法：如以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說明該種微生物能夠分解尿素。 (3)染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來篩選分解纖維素的微生物。 2．篩選微生物的三種方法 (1)單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落

23、挑取的方法獲得目的微生物。 (2)選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對微生物進行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物。 (3)鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物。 3．篩選微生物的兩個實例比較 比較項目 土壤中分解尿素的細菌的分離 分解纖維素的微生物的分離 方法 利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng) 利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng) 原理 只有分解尿素的細菌能夠合成脲酶，才能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長 因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機會而大量繁殖 鑒別 在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，指

24、示劑變紅說明菌落中的菌體為分解尿素的細菌 剛果紅染色法，周圍出現(xiàn)透明圈的菌落為分解纖維素的微生物的菌落 [針對訓(xùn)練] 3．金黃色葡萄球菌是一種具有高度耐鹽性的微生物，可引起人類肺炎、腸炎等疾病。金黃色葡萄球菌在血平板(培養(yǎng)基中添加適量血液)上生長時，可破壞菌落周圍的紅細胞，使其褪色。圖為定性檢測鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌的操作流程，請回答相關(guān)問題： (1)按細胞結(jié)構(gòu)分類，金黃色葡萄球菌屬于________生物，從培養(yǎng)過程分析，金黃色葡萄球菌可進行________呼吸。 (2)7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基為微生物提供的營養(yǎng)成分包括________________，用7.5%

25、 NaCl肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)的主要目的是____________________________。 (3)操作中在血平板上的接種方法是________，接種操作前后需要對接種工具進行________滅菌。 (4)在制備血平板時需將pH調(diào)節(jié)至________(填“微酸性”或“微堿性”)后滅菌，待培養(yǎng)基________后，再加入適量血液。按培養(yǎng)基功能分類，血平板屬于________培養(yǎng)基。 (5)經(jīng)多次規(guī)范操作、重復(fù)實驗，血平板上均出現(xiàn)________的菌落，初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌，但鮮牛奶供應(yīng)商仍認為此菌并非鮮牛奶所攜帶，因此，要對本操作進行完善，完善的方案是_______

26、_________________________。 解析：(1)金黃色葡萄球菌是一種細菌，屬于原核生物。培養(yǎng)過程無密閉處理，故它進行有氧呼吸。(2)7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基可為微生物提供生長所需要的碳源、氮源、水和無機鹽。用7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)是為了增加高度耐鹽性的金黃色葡萄球菌的數(shù)量。(3)圖示用的接種工具是接種環(huán)，說明在血平板上接種的方法是平板劃線法。接種工具在接種前后都要進行滅菌處理。(4)金黃色葡萄球菌的生長環(huán)境為弱堿性，培養(yǎng)基在滅菌前要先調(diào)節(jié)pH，因金黃色葡萄球菌能破壞紅細胞，使其褪色，血平板上出現(xiàn)周圍存在透明圈的菌落，說明有金黃色葡萄球菌，故血平板是鑒別

27、培養(yǎng)基。(5)為增強實驗結(jié)論的嚴謹性，應(yīng)增加空白對照組。 答案：(1)原核　有氧 (2)碳源、氮源、水和無機鹽　增加金黃色葡萄球菌的數(shù)量 (3)平板劃線法　灼燒 (4)微堿性　冷卻　鑒別 (5)周圍存在透明圈　設(shè)置不加鮮牛奶但其他操作均相同的對照組 授課提示：對應(yīng)學(xué)生用書第281頁 練全國高考真題——知考查重點 1．(2016·高考全國卷Ⅰ)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下： ①配制培養(yǎng)基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)； ②制作無菌

28、平板； ③設(shè)置空白對照組和若干實驗組，進行相關(guān)操作； ④將各組平板置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時間，統(tǒng)計各組平板上菌落的平均數(shù)。 回答下列問題： (1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于________________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是________。 (2)步驟③中，實驗組的操作是____________________________________。 (3)若在某次調(diào)查中，某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了________現(xiàn)象。若將30(即36－6)個/平板作為本組菌落數(shù)的平均

29、值，該做法________(填“正確”或“不正確”)。 解析：(1)培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨可為培養(yǎng)基中的微生物提供氮源；制備固體培養(yǎng)基需加入瓊脂。(2)該實驗的目的是了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況，所以需在教室不同高度的位置分別用平板收集微生物即開蓋暴露一段時間。(3)該實驗中空白對照組不應(yīng)出現(xiàn)菌落，若空白對照組出現(xiàn)了菌落，則說明此次調(diào)查中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象，實驗組的污染情況不能確定，故不能用實驗組與空白對照組菌落數(shù)的差值作為實驗結(jié)果，而應(yīng)重新進行實驗。 答案：(1)牛肉膏、蛋白胨　瓊脂 (2)將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間 (3)污染　不正確

30、 2．(2016·高考全國卷Ⅲ)某同學(xué)用新鮮的泡菜溶液為實驗材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。回答下列問題： (1)分離純化乳酸菌時，首先需要用________對泡菜濾液進行梯度稀釋，進行梯度稀釋的理由是_________________________________。 (2)推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有________________和________________。分離純化時應(yīng)挑選出________________的菌落作為候選菌。 (3)乳酸菌在－20 ℃長期保存時，菌液中常需要加入一定量

31、的__________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。 解析：(1)分離純化乳酸菌時，由于泡菜濾液中菌的濃度高，因此需要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋，其目的是將聚集在一起的乳酸菌分散成單個細胞，以便在培養(yǎng)基表面形成單菌落。(2)乳酸菌代謝過程中可產(chǎn)生乳酸，若在培養(yǎng)基中加入碳酸鈣，則碳酸鈣既可以中和乳酸，又可以在乳酸菌菌落的周圍出現(xiàn)明顯透明圈，據(jù)此可以用于乳酸菌的鑒別。(3)乳酸菌在－20 ℃長期保存時，為了避免水結(jié)冰產(chǎn)生冰晶損傷細胞，在菌液中常需要加入一定量的甘油。 答案：(1)無菌水　泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落 (2)鑒別乳酸菌　中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)　具

32、有透明圈 (3)甘油 3．(2015·高考全國卷Ⅰ)已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問題： (1)顯微觀察時，微生物A菌體中的油脂通?？捎胈_______染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用________(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。 (2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以________為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 (3)若要測定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用________直接計數(shù)；若要測定其活菌數(shù)量，可選用______

33、__法進行計數(shù)。 (4)為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測得相同時間內(nèi)，在35 ℃、40 ℃、45 ℃溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg，則上述三個溫度中，________℃條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞________℃設(shè)計后續(xù)實驗。 解析：(1)脂肪可用蘇丹Ⅲ染液(或蘇丹Ⅳ染液)進行染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，不能用水蒸氣蒸餾法提取，應(yīng)用萃取法加以提取。(2)能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B可存在于含有油料作物種子的腐爛物的土壤中，為了選擇培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基上應(yīng)以油脂作為唯一碳源。(3)測定培養(yǎng)液中的微生物的菌體數(shù)，可在顯

34、微鏡下用血細胞計數(shù)板直接計數(shù)；而要測定活菌數(shù)，則可利用稀釋涂布平板法進行計數(shù)。(4)酶量需要最多的溫度下，其酶活力最小，即酶活力最小的溫度應(yīng)為45 ℃。三個溫度下酶活力最大的溫度是40 ℃，但40 ℃不一定是該酶的最適溫度，故應(yīng)圍繞40 ℃設(shè)計后續(xù)實驗。 答案：(1)蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)　萃取法 (2)油脂 (3)血細胞計數(shù)板　稀釋涂布平板 (4)45　40 4．(2014·高考新課標(biāo)全國卷Ⅰ)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}： (1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將________分解成________。

35、 (2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的________。 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見表)： 酵母膏 無機鹽 淀粉 纖維素粉 瓊脂 CR溶液 水 培養(yǎng)基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 培養(yǎng)基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表示有，“－”表示無。 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是

36、 ______________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 解析：(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認為它至少包括三種組分：C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，葡萄糖苷酶將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)

37、合物，但并不與水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。用含有剛果紅的纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，由于纖維素被分解，紅色復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。(3)培養(yǎng)基甲未使用瓊脂，為液體培養(yǎng)基，不能用于分離單菌落。含有纖維素和剛果紅(CR)的培養(yǎng)基可分離和鑒別纖維素分解菌。 答案：(1)纖維二糖　葡萄糖 (2)紅　透明圈 (3)不能　液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落　不能　培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR—纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌 5．(2014·高考新課標(biāo)全國卷Ⅱ)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量

38、，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}： (1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________； 然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和

39、37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為________________________________________________________________________。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過________滅菌，在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是________________________________________________________________________。 (3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 (4)該小組將得到

40、的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高________的利用率。 解析：(1)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間，可依據(jù)是否產(chǎn)生菌落確定培養(yǎng)基的滅菌效果是否理想。由樣品中菌株數(shù)計算公式：(C÷V)×M知：1 mL水樣中菌株數(shù)為(38÷0.1)×100＝3.8×104，故每升水樣中的活菌數(shù)為3.8×107。(2)利用接種環(huán)接種時，接種環(huán)需灼燒滅菌。利用平板劃線法分離細菌時，在第二次及以后劃線時，總是從上一次劃線

41、的末端開始，可以將聚集的菌體逐步稀釋以便得到單個菌落。(3)稀釋涂布平板法是用涂布器將菌液均勻涂布在培養(yǎng)基表面，故培養(yǎng)后產(chǎn)生的菌落應(yīng)隨機分布在培養(yǎng)基表面，即B表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。(4)液體培養(yǎng)基通過振蕩可提高溶氧量，同時使菌體與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，從而提高細菌的生長速度。 答案：(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格　3.8×107 (2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落 (3)B (4)溶解氧　營養(yǎng)物質(zhì) 6．(2013·高考新課標(biāo)全國卷Ⅱ)臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的

42、實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性。 回答下列問題： (1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用________法或________法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。 (2)取該單菌落適當(dāng)稀釋，用________法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長，布滿平板。 (3)為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素A________；含B的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對抗生素B_____

43、___；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________； 含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的________。 (4)根據(jù)上述實驗結(jié)果，為達到抗菌目的，最好應(yīng)選用抗生素________。 解析：(1)將細菌接種到固體培養(yǎng)基上的方法

44、有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)由(1)獲取的致病菌單菌落，經(jīng)過適當(dāng)稀釋，用涂布法接種至固體培養(yǎng)基表面進一步培養(yǎng)。(3)在檢測致病菌對抗生素的敏感性實驗中，若含A種抗生素的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明周圍的致病菌死亡，該致病菌對A種抗生素敏感；若含B種抗生素的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明致病菌對B種抗生素不敏感；若含C種抗生素的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明該致病菌對C的敏感性比對A的弱；若含D種抗生素的濾紙片周圍透明圈也比含A的小，說明A、B、C、D四種抗生素的殺菌效果最顯著的為A。透明圈中出現(xiàn)的菌落為耐藥菌。(4)根據(jù)(3)中分析，為達到抗菌目的最好選用抗生素A。 答案：(1)劃

45、線　稀釋涂布(或涂布) (2)涂布 (3)敏感　不敏感　該致病菌對C的敏感性比對A的弱　耐藥菌 (4)A 練各地市模擬——知命題熱點 7．(2017·山東濰坊模擬)地球上植物產(chǎn)生的纖維素中有40%～60%被土壤中的某些微生物利用，從土壤中分離并研究這些微生物有利于人們更有效地利用植物秸稈中的纖維素。請回答： (1)分離纖維素分解菌，宜從________________的土壤中取樣。纖維素分解菌之所以能夠利用纖維素，是因為其細胞內(nèi)含有_____________________________。 (2)培養(yǎng)基除含有碳源、氮源、水和多種無機鹽外，還應(yīng)含有____________。其

46、中，碳源主要為_______________________________________。 對配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，目的是_______________________。 (3)纖維素分解菌純化培養(yǎng)中常用的接種方法有________________。在添加剛果紅的培養(yǎng)基上，可通過是否產(chǎn)生________來篩選纖維素分解菌。 (4)從纖維素分解菌中提取纖維素酶，可采用________法，如果采用________法對該細菌進行固定，也可不經(jīng)過酶的提取和分離等操作即可實現(xiàn)纖維素發(fā)酵。 解析：(1)腐殖質(zhì)較多的土壤中富含纖維素，篩選纖維素分解菌應(yīng)該從這樣的環(huán)境中進行取樣。纖維素分解

47、菌細胞內(nèi)含有纖維素酶，能夠?qū)⒗w維素分解為葡萄糖而加以利用。(2)微生物的生長需要碳源、氮源、水和無機鹽等，有的還需要某些特殊的營養(yǎng)物質(zhì)(生長因子)。篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基中的碳源主要為纖維素。對培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌的目的是殺死細菌的芽孢。(3)纖維素分解菌純化培養(yǎng)中常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。纖維素與剛果紅染液反應(yīng)呈紅色，纖維素分解菌能夠分解培養(yǎng)基中的纖維素，從而使添加剛果紅染液的培養(yǎng)基出現(xiàn)透明圈，可以通過透明圈的產(chǎn)生與否來篩選纖維素分解菌。(4)纖維素酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，從纖維素分解菌中提取纖維素酶，可采用電泳法(或凝膠色譜法)。采用包埋法對該微生物細胞進行固定，可不經(jīng)過酶

48、的提取和分離等操作實現(xiàn)纖維素發(fā)酵。 答案：(1)富含纖維素　纖維素酶 (2)某些特殊的營養(yǎng)物質(zhì)(生長因子)　纖維素　殺死細菌的芽孢 (3)平板劃線法和稀釋涂布平板法　透明圈 (4)電泳(或凝膠色譜)　包埋 8．(2017·四川成都測試)高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實用性。研究者從熱泉嗜熱菌樣品中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如下圖所示： (1)進行①過程的目的是________，②過程所使用的接種方法是________法。 (2)從用途上來說，Ⅰ號培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，配制時僅以________作為唯一碳源；從物理狀態(tài)上來說，Ⅱ號培養(yǎng)基屬于固

49、體培養(yǎng)基，配制時應(yīng)加入________作為凝固劑。 (3)Ⅰ、Ⅱ號培養(yǎng)基配制和滅菌時，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是________。一般對配制的培養(yǎng)基采用________法滅菌。 (4)培養(yǎng)一段時間后，應(yīng)從Ⅰ號培養(yǎng)基上挑出________的菌落，接種到Ⅱ號培養(yǎng)基上。 解析：(1)分析題圖可知，①過程是梯度稀釋，目的是對樣品進行稀釋；②過程是用稀釋涂布平板法進行接種。(2)本題實驗的目的是篩選高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，從用途上來說，Ⅰ號培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，本培養(yǎng)基以淀粉為唯一碳源；從物理狀態(tài)上來說，Ⅱ號培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，配制時應(yīng)加入瓊脂作為凝固劑。(3)培養(yǎng)基配制和滅菌時應(yīng)先調(diào)節(jié)pH

50、，然后再進行滅菌，如果先滅菌再調(diào)節(jié)pH，在調(diào)節(jié)pH時會污染培養(yǎng)基；一般對配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌法滅菌。(4)能分解淀粉的嗜熱菌在Ⅰ號培養(yǎng)基上生長時可釋放淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，透明圈越大淀粉酶的活性越強，所以要從Ⅰ號培養(yǎng)基上挑出透明圈大的菌落，接種到Ⅱ號培養(yǎng)基上。 答案：(1)稀釋　稀釋涂布平板 (2)選擇　淀粉　瓊脂 (3)先調(diào)節(jié)pH，后滅菌　高壓蒸汽滅菌 (4)透明圈大 授課提示：對應(yīng)學(xué)生用書第381頁 1．據(jù)報道，從部分企業(yè)生產(chǎn)的速凍食品中檢出葡萄球菌超標(biāo)，“細菌門”事件引起公眾的普遍關(guān)注。葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基

51、上形成的菌落周圍會出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)。請回答下列問題。 (1)某興趣小組欲檢測某果汁類食品中是否含有葡萄球菌，請幫他們完善下列實驗步驟。 ①配制培養(yǎng)基：稱取適量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等，加入蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解后調(diào)節(jié)pH，分裝到錐形瓶后進行________，在無菌狀態(tài)下加入卵黃液(100 mL 10%滅菌NaCl溶液中加一個雞蛋黃，振蕩均勻)搖勻后立即倒平板。 ②接種：取待檢果汁2.5 mL加入22.5 mL滅菌生理鹽水中，制成接種樣液。 實驗組：將接種樣液用________法接種在含卵黃的固體培養(yǎng)基上。 對照組：將________接種在含卵黃的固體培養(yǎng)基上或不

52、接種作為空白對照。 將上述接種后的培養(yǎng)皿同時放在36 ℃的恒溫箱中培養(yǎng)48 h。 ③觀察：觀察培養(yǎng)基表面________________________________。 (2)培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨為葡萄球菌生長和繁殖提供________。葡萄球菌能耐受高濃度的NaCl溶液，所以在配制培養(yǎng)基時加入高濃度的NaCl溶液可以將它分離出來，此培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。 (3)若要統(tǒng)計某土壤樣品中該活菌數(shù)目，宜采用________法。 解析：(1)由于葡萄球菌能分解卵黃中的卵磷脂，在含卵黃的固體培養(yǎng)基上形成的菌落周圍會出現(xiàn)特有的乳白色的乳濁環(huán)，所以該實驗的觀察指標(biāo)為培養(yǎng)基表面是否

53、出現(xiàn)周圍有乳濁環(huán)的菌落。(2)選擇培養(yǎng)基可以使所需要的細菌生長，抑制其他細菌生長。(3)統(tǒng)計某土壤樣品中活菌數(shù)目可采用稀釋涂布平板法。 答案：(1)①滅菌?、谄桨鍎澗€　無菌生理鹽水?、凼欠癯霈F(xiàn)周圍有乳濁環(huán)的菌落　(2)碳源和氮源　選擇　(3)稀釋涂布平板 2．某興趣小組的同學(xué)為調(diào)查一牛奶制品是否過期，進行了如下實驗：制備培養(yǎng)基→滅菌→接種及培養(yǎng)→菌落觀察計數(shù)。請回答： (1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細菌提供了________________和________________。 (2)配制培養(yǎng)基時，原料稱量溶解之后，要進行________，培養(yǎng)基中為防止雜菌污染，要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)

54、皿等進行________，而且須將接種后的培養(yǎng)皿呈________狀態(tài)。 (3)本實驗樣品接種時最好采用________法。 (4)將接種了牛奶的平板置于________中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 ℃。要使該實驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種________作為對照進行實驗。 (5)培養(yǎng)一段時間后，如果統(tǒng)計到多種菌落，則說明 ________________________________________________________________________ ____________________________________________________

55、____________________。 解析：(1)不同的培養(yǎng)基都含有水、無機鹽、碳源、氮源，所以培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了氮源、碳源。(2)配制培養(yǎng)基時，原料稱量溶解之后，首先要調(diào)節(jié)pH。為防止雜菌污染，要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行高壓蒸汽滅菌，接種后，必須將培養(yǎng)皿進行倒置。(3)因為此樣品用固體培養(yǎng)基接種且需要對菌落計數(shù)，所以接種最好采用稀釋涂布平板法。(4)應(yīng)將接種了牛奶的平板置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 ℃。要使該實驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種無菌水作為對照進行實驗。(5)如果培養(yǎng)基中統(tǒng)計到多種菌落，說明牛奶已經(jīng)過期。 答案：(1)氮源

56、　碳源　(2)調(diào)節(jié)pH　高壓蒸汽滅菌　倒置　(3)稀釋涂布平板　(4)恒溫培養(yǎng)箱　無菌水　(5)樣品中有多種細菌，已經(jīng)過期變質(zhì) 3．燒傷病人容易感染綠膿桿菌，引起化膿性感染，比阿培南、美羅培南、頭孢菌素和碳青霉烯類抗生素都是非常經(jīng)典的抗綠膿桿菌的藥物。臨床使用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，從病人身上獲取少量樣本，按照一定的實驗步驟操作，以確定該病人體內(nèi)的綠膿桿菌對不同抗生素的敏感性。 (1)獲取綠膿桿菌單菌落：配制適于綠膿桿菌生長的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分一般含有________、________、水和無機鹽，調(diào)節(jié)pH至7，滅菌處理，待培養(yǎng)基冷卻至50 ℃時，在_______

57、_________附近倒平板。經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得單菌落。 (2)檢測綠膿桿菌對不同抗生素的敏感性：取該單菌落適當(dāng)稀釋，用________法接種于固體培養(yǎng)基表面，使其均勻生長，布滿平板。將分別含等劑量的比阿培南、美羅培南、頭孢菌素和碳青霉烯類抗生素的同大小的濾紙片均勻置于該平板的不同位置，適宜條件下培養(yǎng)一段時間，結(jié)果是含不同抗生素的濾紙片周圍均出現(xiàn)透明圈，這說明綠膿桿菌對上述抗生素________；含頭孢菌素的濾紙片周圍的透明圈比含美羅培南的小，這說明____________________________；含比阿培南、碳青霉烯類的濾紙片周圍的透明圈也比含美羅培南的小，且比阿培南透明

58、圈中出現(xiàn)了一個菌落，請推測此菌落產(chǎn)生的可能原因：一是________________，二是________________。 (3)根據(jù)上述實驗結(jié)果，為達到抗綠膿桿菌的目的，對于該患者來說最好應(yīng)選用抗生素____________。 解析：(1)綠膿桿菌為異養(yǎng)型微生物，培養(yǎng)基中需要加入碳源、氮源、水和無機鹽等成分。接種時為防止污染應(yīng)在酒精燈火焰附近的無菌區(qū)接種。(2)含等劑量、不同種抗生素處理的濾紙片周圍均出現(xiàn)透明圈，說明綠膿桿菌對不同種抗生素均敏感。含頭孢菌素的濾紙片周圍的透明圈比含美羅培南的小，說明綠膿桿菌對頭孢菌素的敏感性比對美羅培南的弱。比阿培南的透明圈中出現(xiàn)一個菌落的可能原因是被其

59、他雜菌污染或綠膿桿菌產(chǎn)生了耐藥性突變。(3)綠膿桿菌對美羅培南的敏感性最強，患者服用后抑制綠膿桿菌的效果最好。 答案：(1)碳源　氮源　酒精燈火焰　(2)涂布　敏感　綠膿桿菌對頭孢菌素的敏感性比對美羅培南的弱　雜菌污染　抗比阿培南的綠膿桿菌(或綠膿桿菌產(chǎn)生耐藥性突變)形成的菌落　(3)美羅培南 4．(2017·江西贛中南五校聯(lián)考)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方，請根據(jù)表格和所學(xué)知識回答下列相關(guān)問題。 成分 蛋白胨 乳糖 蔗糖 K2HPO4 指示劑 瓊脂 含量(g) 10.0 5.0 5.0 2.0 0.2 12.0 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾

60、水定容到1 000 mL (1)從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于________________________________________________________________________。 (2)若根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于________(填“選擇”或“鑒別”)培養(yǎng)基。若要用上述培養(yǎng)基來篩選出土壤中的尿素分解菌，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分必需怎樣更改？____________，并用____________作為指示劑。 (3)在微生物培養(yǎng)的過程中，為防止雜菌污染，需要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行________；操作者的雙手需要進行清洗和________。 (4)圖1和圖2是培養(yǎng)

61、某細菌的結(jié)果圖，其對應(yīng)的接種方法分別是：________________和________________，這兩種方法接種后培養(yǎng)基上都可以得到由單個細胞繁殖所形成的________。圖1所用的接種方法可用來對活菌進行計數(shù)。此外，測定微生物數(shù)目的另一種方法是________。 (5)以下過程中所利用的主要微生物的細胞結(jié)構(gòu)與大腸桿菌較相似的有________。 A．制作果酒　　　　　 B．由果酒制作果醋 C．制作泡菜 D．制作腐乳 解析：(1)大腸桿菌只能從環(huán)境中攝取有機物，不能自己合成有機物，屬于分解者。(2)該培養(yǎng)基中含有指示劑，屬于鑒別培養(yǎng)基。尿素分解菌可以分解尿素，而其他微

62、生物不能，因此可將培養(yǎng)基中的蛋白胨改為尿素用于篩選土壤中的尿素分解菌，并用酚紅作為指示劑，尿素分解菌分解尿素產(chǎn)生了NH3可使酚紅變紅。(3)培養(yǎng)微生物時，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿需要滅菌，操作者雙手需要進行消毒。(4)圖1采用的是稀釋涂布平板法，圖2采用的是平板劃線法。單個微生物細胞繁殖所形成的細胞群叫菌落。(5)A、B、C、D中所用到的微生物主要是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大腸桿菌和乳酸菌都是原核細胞，結(jié)構(gòu)相似。 答案：(1)分解者　(2)鑒別　將蛋白胨改成尿素　酚紅　(3)滅菌　消毒　(4)稀釋涂布平板法　平板劃線法　菌落　顯微鏡直接計數(shù)法　(5)BC 5．酒精濃度過高會抑制酵母菌的

63、生長繁殖，影響酒精產(chǎn)量。為此，研究人員將酒精耐受基因轉(zhuǎn)入野生型酵母菌中，經(jīng)篩選得到了耐高濃度酒精的酵母菌。過程如圖甲所示，請據(jù)圖回答下列問題： (1)通過篩選得到耐高濃度酒精酵母菌的技術(shù)是________。②、③過程需要重復(fù)幾次，目的是________________________。某同學(xué)嘗試過程③的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學(xué)的接種方法是________。 (2)為證明分離純化得到的酵母菌能提高酒精產(chǎn)量，可將等量的________________________和耐高濃度酒精的酵母菌分別接種于含等量葡萄糖的A、B兩組發(fā)酵裝置中，在________℃條件下_

64、_______(填“密閉”或“充氣”)培養(yǎng)。一段時間后取樣，用________檢測，若實驗結(jié)果為________________________________，則說明耐高濃度酒精的酵母菌能提高酒精產(chǎn)量。 解析：(1)本題通過篩選得到耐高濃度酒精酵母菌的技術(shù)是基因工程(轉(zhuǎn)基因技術(shù))。②、③過程需要重復(fù)幾次，目的是進一步分離純化獲得耐酒精能力強的酵母菌。某同學(xué)嘗試過程③的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖乙所示。該同學(xué)的接種方法是稀釋涂布平板法。 (2)為證明分離純化得到的酵母菌能提高酒精產(chǎn)量，可將等量的野生型酵母菌和耐高濃度酒精的酵母菌分別接種于含等量葡萄糖的A、B兩組發(fā)酵裝置中，在

65、18～25 ℃條件下密閉培養(yǎng)。一段時間后取樣，用重鉻酸鉀檢測酒精，若實驗結(jié)果為B組的灰綠色比A組深，則說明耐高濃度酒精的酵母菌能提高酒精產(chǎn)量。 答案：(1)基因工程(轉(zhuǎn)基因技術(shù))　進一步分離純化獲得耐酒精能力強的酵母菌　稀釋涂布平板法　(2)野生型酵母菌　18～25　密閉　重鉻酸鉀　B組的灰綠色比A組深 6．纖維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素?；卮鹣铝袉栴}： (1)在篩選纖維素分解菌的過程中，通常用________染色法，這種方法能夠通過顏色反應(yīng)直接對纖維素分解菌進行篩選。甲同學(xué)在實驗時得到了如圖所示的結(jié)果，則纖維素分解菌位于(　　) A．③ B．①② C．②③ D．

66、①②③ (2)乙同學(xué)打算從牛胃中分離纖維素分解菌并計數(shù)，與分離醋酸菌相比，進行培養(yǎng)時除了營養(yǎng)不同，最主要的實驗條件差別是________。該同學(xué)采用活菌計數(shù)法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目________。 (3)丙同學(xué)在提取和分離纖維素酶的過程中，為了抵制外界酸、堿對酶活性的影響，采取的措施是向提取液和分離液中添加________。若探究纖維素酶活性的最適溫度，如何設(shè)置對照？________________________________________________________________________。 解析：(1)剛果紅與纖維素形成的紅色復(fù)合物在纖維素被分解后將不再形成，則在培養(yǎng)基上出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。(2)牛胃是一個無氧的環(huán)境，所以其中的纖維素分解菌與需氧的醋酸菌培養(yǎng)條件有所不同。當(dāng)兩個或多個細菌連在一起時平板上只觀察到一個菌落，因此活菌計數(shù)法統(tǒng)計的菌落數(shù)比實際的偏小。(3)探究最適溫度可設(shè)置一系列的溫度梯度相互對照，其他無關(guān)變量保持相同且適宜。 答案：(1)剛果紅　A　(2)保證無氧環(huán)境　小(低)　(3)緩沖溶液　不同的溫度梯度之間相互