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1、抗體偶聯(lián)藥物目錄定義定義原理原理對對AgAg、AbAb、連接子和藥物分子的要求、連接子和藥物分子的要求抗體的突變抗體的突變幾種幾種ADCADC定點偶聯(lián)方法的比較定點偶聯(lián)方法的比較連接方式連接方式ADCADC偶聯(lián)比的測定方法偶聯(lián)比的測定方法上市的藥品上市的藥品前景前景挑戰(zhàn)挑戰(zhàn)一、什么是ADC二、原理藥物分子藥物藥物分子分子高毒性靶點分子量溶解度穩(wěn)定性三、對抗體、藥物、連接子、靶標和抗原的要求三、對抗體、藥物、連接子、靶標和抗原的要求藥物分子藥物藥物分子分子高毒性靶點分子量溶解度穩(wěn)定性因為因為IgGIgG有限的腫瘤穿透能力、有限的腫瘤穿透能力、低抗原表達性、內(nèi)化效率不足低抗原表達性、內(nèi)化效率不足和
2、連接子代謝，均可能使細胞和連接子代謝，均可能使細胞內(nèi)的毒素濃度降低。通常為內(nèi)的毒素濃度降低。通常為IC50IC50：藥物分子藥物藥物分子分子高毒性靶點分子量溶解度穩(wěn)定性必須位于細胞內(nèi)必須位于細胞內(nèi),若若ADCADC無法轉(zhuǎn)無法轉(zhuǎn)運至細胞內(nèi)將嚴重影響藥物的運至細胞內(nèi)將嚴重影響藥物的有效性和毒性。在細胞外還可有效性和毒性。在細胞外還可能影響，藥物解離后可能對旁能影響，藥物解離后可能對旁邊的正常細胞有害。邊的正常細胞有害。藥物分子藥物藥物分子分子高毒性靶點分子量溶解度穩(wěn)定性藥物的分子量較小，從而減少發(fā)生免疫原性的藥物的分子量較小，從而減少發(fā)生免疫原性的風(fēng)險；抗體的分子量也要很小，風(fēng)險；抗體的分子量也要
3、很小，IgGIgG抗體的分抗體的分子量約為子量約為150kD150kD，毛細管內(nèi)皮層和細胞外間隙，毛細管內(nèi)皮層和細胞外間隙難以透過如此巨大的抗體或偶聯(lián)分子，抗體的難以透過如此巨大的抗體或偶聯(lián)分子，抗體的分子量太小，會影響其在體內(nèi)的半衰期。分子量太小，會影響其在體內(nèi)的半衰期。藥物分子藥物藥物分子分子高毒性靶點分子量溶解度穩(wěn)定性應(yīng)在水性緩沖溶液中具有適應(yīng)在水性緩沖溶液中具有適當?shù)娜芙舛龋员阌谂悸?lián)抗當?shù)娜芙舛?，以便于偶?lián)抗體體藥物分子藥物藥物分子分子高毒性靶點分子量溶解度穩(wěn)定性負載應(yīng)在血漿中具有充負載應(yīng)在血漿中具有充分的穩(wěn)定性。分的穩(wěn)定性。美登素類化合物1 作用機制：通過抑制微管組裝來抑制細胞的分
4、裂2 DM1臨床研究發(fā)現(xiàn)：穩(wěn)定、非裂解的硫醚鍵連接子（MCC)具有高效的療效毒素主要在細毒素主要在細胞增殖過程中胞增殖過程中發(fā)揮作用，對發(fā)揮作用，對其非分裂和靜其非分裂和靜息的細胞沒有息的細胞沒有作用作用與分子的疏水性有與分子的疏水性有關(guān)（連接子也是疏關(guān)（連接子也是疏水性的：在血液或水性的：在血液或代謝器官（肝臟、代謝器官（肝臟、腎臟）中意外釋放腎臟）中意外釋放游離型毒素可穿透游離型毒素可穿透細胞膜，并可能引細胞膜，并可能引起嚴重的副作用起嚴重的副作用耐藥腫瘤細胞可耐藥腫瘤細胞可能會限制能會限制ADCADC的的活性（由藥物轉(zhuǎn)活性（由藥物轉(zhuǎn)運蛋白表達或活運蛋白表達或活性增加，加快疏性增加，加快疏
5、水性化合物外排水性化合物外排造成造成作用微管的ADC藥物的缺陷目前開發(fā)帶有負電荷目前開發(fā)帶有負電荷-磺酸基或極性短磺酸基或極性短PEGPEG的的高度水溶性親水性連接子，以增加溶解性高度水溶性親水性連接子，以增加溶解性1 14 4 -Description of the sub contentsription of the sub contents1.1.在血漿中穩(wěn)定，避免細胞毒素提前釋在血漿中穩(wěn)定，避免細胞毒素提前釋放損傷正常的組織或細胞放損傷正常的組織或細胞ption of the sub contents2.2.當當ADCsADCs被內(nèi)吞到靶細胞后，能夠快被內(nèi)吞到靶細胞后，能夠快速釋放藥物
6、（非必須）速釋放藥物（非必須）-Description of the sub contents -Description of the sub contents3.3.抗體的連接位點和連接位點的數(shù)量抗體的連接位點和連接位點的數(shù)量要明確且合適要明確且合適 -Description of the sub contents -Description of the sub contents2 23 3 4.4.連接子的分子量和極性連接子的分子量和極性e escription of the sub contents -Description of the sub contents連接子5 5、親和素和生
7、物素能否作為連接臂？、親和素和生物素能否作為連接臂？一定的內(nèi)吞一定的內(nèi)吞速率速率抗原大量特異性的表抗原大量特異性的表達在靶細胞表面在正常達在靶細胞表面在正常組織或細胞表面不表達組織或細胞表面不表達或少表達或少表達抗原應(yīng)盡量不分泌，因為抗原應(yīng)盡量不分泌，因為分泌型抗原可與血液循環(huán)中分泌型抗原可與血液循環(huán)中抗體結(jié)合，從而導(dǎo)致與腫瘤抗體結(jié)合，從而導(dǎo)致與腫瘤細胞結(jié)合的抗體減少細胞結(jié)合的抗體減少有合適的內(nèi)吞轉(zhuǎn)運有合適的內(nèi)吞轉(zhuǎn)運途徑途徑要求要求理想化的抗原（四）理想化的抗體靶向功能，能夠有效地將靶向功能，能夠有效地將細細胞毒分子輸送到靶細胞胞毒分子輸送到靶細胞；具有較低的免疫原性。具有較低的免疫原性。具有
8、合適的連接位點，偶具有合適的連接位點，偶聯(lián)毒素后，不影響聯(lián)毒素后，不影響ADCADC的穩(wěn)的穩(wěn)定性、親和力、內(nèi)吞及藥定性、親和力、內(nèi)吞及藥效效 與靶細胞表面的抗原結(jié)合后，能夠誘導(dǎo)細胞進行內(nèi)吞作用，進入胞內(nèi)，最終進入溶酶體并導(dǎo)致細胞毒分子在胞內(nèi)的有效釋放；（內(nèi)化-流式細胞術(shù)檢測；細胞內(nèi)化后定位檢測-共聚焦顯微鏡）保持裸抗體全部或部分功能，如細胞介導(dǎo)的抗體依賴性細胞毒作用（ADCC)、補體依賴性細胞毒作用(CDC)，即裸抗體也是有效的藥物。四、抗體的突變?nèi)秉c：偶聯(lián)的藥物分子數(shù)目不定、位置不定和缺點：偶聯(lián)的藥物分子數(shù)目不定、位置不定和各種產(chǎn)各種產(chǎn)物在體內(nèi)的藥物代謝動力學(xué)、藥效、安全性物在體內(nèi)的藥物代謝
9、動力學(xué)、藥效、安全性等問題。等問題。方法：抗體進行誘導(dǎo)突變，現(xiàn)有報道在抗體的特定部位方法：抗體進行誘導(dǎo)突變，現(xiàn)有報道在抗體的特定部位設(shè)計丙氨酸定點突變成半胱氨酸、引入非天然氨基酸、設(shè)計丙氨酸定點突變成半胱氨酸、引入非天然氨基酸、酶法和二硫鍵改造法等，可以獲得固定偶聯(lián)比的酶法和二硫鍵改造法等，可以獲得固定偶聯(lián)比的ADCADC。五、幾種ADC定點偶聯(lián)的方法比較連接方式機制機制缺點缺點改進改進應(yīng)用應(yīng)用SGN-75(SGN-75(抗抗CD70CD70，Val-Cit-MMAFVal-Cit-MMAF）肽鏈接肽鏈接血液的血液的pHpH高于溶酶體內(nèi)的高于溶酶體內(nèi)的pHpH，溶，溶酶體內(nèi)的蛋白水解酶在血液中
10、的酶體內(nèi)的蛋白水解酶在血液中的活性很低，活性很低，ADCADC在胞內(nèi)被蛋白水解在胞內(nèi)被蛋白水解酶水解，釋放藥物酶水解，釋放藥物藥物直接連接到藥物直接連接到肽連接子上，會肽連接子上，會導(dǎo)致蛋白水解釋導(dǎo)致蛋白水解釋放出細胞毒素藥放出細胞毒素藥物的氨基酸加合物的氨基酸加合物，會降低細胞物，會降低細胞毒活性毒活性加入間隔基，常用是加入間隔基，常用是雙功能性對氨基芐醇雙功能性對氨基芐醇基團，他通過氨基與基團，他通過氨基與肽連接，形成酰胺鍵肽連接，形成酰胺鍵而含胺細胞毒性藥物而含胺細胞毒性藥物側(cè)通過氨基甲酸酯官側(cè)通過氨基甲酸酯官能團與連接子（能團與連接子（PABC)PABC)的芐基羥基相連的芐基羥基相連。
11、七、ADC藥物偶聯(lián)比的測定方法1 1、紫外可見分光光度法、紫外可見分光光度法抗體為蛋白質(zhì),其含有苯環(huán)的氨基酸在 280 nm有其特征性的吸收峰；若藥物有紫外吸收其在特定的波長產(chǎn)生消光系數(shù)，產(chǎn)生特征性的吸收峰?？梢杂秒p波長發(fā)測定藥物的偶聯(lián)比。2.液質(zhì)聯(lián)用測定ADC藥物的偶聯(lián)比 利用Ab、連接臂和藥物極性的不同，選用合適的流動相，使其彼此分開，然后分別流入質(zhì)譜儀，各樣品被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖，讀出其相對分子質(zhì)量，進而測定其偶聯(lián)比。八、上市ADC藥品九、前景與挑戰(zhàn)用于精確治療疾病，減少藥物在體內(nèi)的毒副作用用于腫瘤的治療，特別是后期，減少對人體的傷害挑戰(zhàn)ADCsADCs產(chǎn)業(yè)化制備工藝復(fù)雜，包括重組抗體制備、化學(xué)產(chǎn)業(yè)化制備工藝復(fù)雜，包括重組抗體制備、化學(xué)藥物與抗體的偶聯(lián)反應(yīng)、藥物與抗體的偶聯(lián)反應(yīng)、ADCsADCs的制劑與質(zhì)控等環(huán)節(jié)，任的制劑與質(zhì)控等環(huán)節(jié)，任一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都會影響其安全性和有效性。一環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都會影響其安全性和有效性。ADCsADCs中連接臂、抗中連接臂、抗體和藥物三者的連接體和藥物三者的連接效率和穩(wěn)定性效率和穩(wěn)定性抗體與藥物抗體與藥物的偶聯(lián)比不確的偶聯(lián)比不確定，影響藥物定，影響藥物的療效的療效開發(fā)開發(fā)不同作用機不同作用機制的新型細胞毒素制的新型細胞毒素ADCsADCs藥物特殊藥物特殊靶點的靶點的尋找尋找挑戰(zhàn)挑戰(zhàn)
抗體偶聯(lián)藥物PPT1250
