尿樣中氧氟沙星的含量測定

《尿樣中氧氟沙星的含量測定》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《尿樣中氧氟沙星的含量測定（32頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

1、尿樣中氧氟沙星的含量測定,組員：胡帆、周凡漪,,實驗目的： 1.分析臨床上廣泛用于治療泌尿系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)感染的藥物氧氟沙星。 2.比較LC-UV與LC-熒光分析氧氟沙星的區(qū)別。,,背景資料： 氧氟沙星是第三代喹諾酮類新型廣譜抗菌藥,并具分布廣,吸收好,半衰期長等特點,臨床廣泛應用具有廣譜抗菌作用。,,尿樣采集： 受試者空腹飲水200ml排尿, 留取1h后尿樣作空白,一次口服OFLX片600 mg, 收集1，2，3，4，5小時后的尿樣，做好標記。,LC-UV法分析尿樣中氧氟沙星的含量,一、實驗條件： 1.1 實驗儀器 Agilent高效液相色譜儀，G1314B-VWD紫外檢測器，色譜柱，量瓶

2、 1.2 實驗試劑 氧氟沙星片劑，甲醇(色譜純)，尿樣，空白尿樣，HAc溶液,,1.3色譜條件 色譜柱:C18 5m (250 mm 416 mm) 流動相: 甲醇/0.05 %HAC=80：20 流速:1ml/min 進樣量：20l 柱溫：室溫 檢測波長：在250400nm處掃描，選取有最大吸收度處作為檢測波長。實際過程中選用294nm作為檢測波長。,二、實驗方法,2.1 尿液的預處理 取空白尿樣和尿樣，13000r/min離心10min，取上清液經(jīng)0.45m的水相濾膜過濾，保留濾液。,,2.2 氧氟沙星標準液的配制 精密稱取氧氟沙星片劑200 mg ,置50ml容量瓶中,以流動相稀釋至

3、刻度,配成4.0 mg/ml的儲備液，用流動相稀釋400倍，吸取20l作為進樣品。,,2.3 標準曲線的制作 測定時，取標準液0.5，1，1.5，2，2.5ml,用流動相稀釋于10ml量瓶，吸取20l作為進樣品，記錄色譜圖，以氧氟沙星標準濃度對峰面積進行回歸，得到回歸方程。,,2.4 空白尿樣的配制 取空白尿液濾液1ml,用流動相稀釋20倍，吸取20l作為進樣品。 2.5 尿樣的配制 取尿液濾液1ml,用流動相稀釋20倍，吸取20l作為進樣品。,,2.6 進樣 先進1針標準品觀察流動相配置是否合適,合適后,進1針空白尿樣觀察有無雜質(zhì)在測定波長處影響左氧氟沙星的吸收,然后進樣標準品與待測樣品

4、,標準品進樣5針來檢驗儀器精密度。,,2.7回收率實驗 取濃度為0.5，1，1.5 g/ml的氧氟沙星尿樣，稱取氧氟沙星標準品，配置為相同濃度，通過峰面積比值，測定回收率。,,2.8精密度實驗 取濃度為0.52.5g/ml的氧氟沙星標準品，1d內(nèi)重復測定5次,測得日內(nèi)RSD，隔日測定5 次, 測得日間RSD。,紫外檢測測定尿液中左氧氟沙星的含量,紫外檢測測定尿液中左氧氟沙星的含量，實驗操作方法除檢測器設定與熒光檢測器不同外（檢測波長：294nm），其余設置和操作均與熒光檢測時相同。,三、實驗結果,熒光法測定尿樣中左氧氧氟沙星濃度標準曲線圖,紫外法測定尿樣中左氧氟沙星濃度標準曲線圖,精密度,日

5、內(nèi)、 日間RSD 測量 熒光法 日內(nèi)RSD=2.6% 日間RSD=3.3% 紫外法 日內(nèi)RSD=0.8% 日間RSD=2.9%,回收率實驗,回收率 熒光 98.7%、101.4%、101.2%； 紫外 99.6%、98.4%、99.1%。,熒光法測定尿樣中排出左氧氟沙星量（g）-時間曲線,紫外檢測測定尿樣中排出左氧氟沙星量（g）-時間曲線,熒光法測定尿樣中排出左氧氟沙星的累計量（g）-時間曲線,紫外檢測測定尿樣中排出左氧氟沙星的累計量（g）-時間曲線,討論,1、采用LC-UV法與LC-熒光法分別測定尿樣中氧氟沙星的含量，并且比較兩種方法測量結果的不同，因此要求測量過程具有對照性：待

6、測樣品，標準品，空白樣品的濃度兩者均相同，流動相也相同，都采用外標法，但因為分析方法的不同，檢測波長不同。,,2、實驗中所采用的尿液因為新鮮尿液，如果無法做到這點，因在尿液中加入二甲苯等防腐劑，避免尿液因細菌繁殖造成混濁，影響試驗效果。而且尿樣中的藥物會分解，影響實驗結果，因而最好是現(xiàn)取，實驗過程中不使用時放入冰箱保存,,3、由于沒有標準品對照，在測定時以左氧氟沙星片作為標準品使用。而事前沒有對其中左氧氟沙星的實際含量進行過標定，也不能排除片劑中的其他成分（如輔料中的抗氧化劑等）對實驗結果的影響。,,4、實驗本來應該統(tǒng)計每次的尿液量，計算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量，然后制的排出藥物量-時間曲線，因為本次實驗中沒有精密的容器量尿液體積，只能大概估計尿液量，測算出尿液中藥物的量。,,5、實驗中考慮到出峰時間和分離度以及實際操作的便利程度，最終選擇的流動相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是還是有脫尾現(xiàn)象，在熒光檢測中特別明顯。 6、從實驗數(shù)據(jù)，我們可以認為熒光檢測器作為檢測裝置，靈敏度、專屬性好（沒有雜質(zhì)峰），較紫外檢測器優(yōu)。,標準品中左氧氟沙星出峰圖（紫外檢測器檢測）,,尿樣中左氧氟沙星出峰圖（紫外檢測器檢測）,,標準品中左氧氟沙星出峰圖（熒光檢測法）,,尿樣中左氧氟沙星出峰圖（熒光檢測器）,,,,謝謝,