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1、人教版選修人教版選修1專題專題2 微生物的培養(yǎng)與應用微生物的培養(yǎng)與應用課題課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)微生物包括哪五類：微生物包括哪五類：病毒病毒細菌細菌放線菌放線菌真菌真菌原生動物原生動物 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界1、培養(yǎng)基可以分為哪兩類？2、培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質，此外 還要滿足哪些要求？3、獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是什么？4、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面 5、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟 7、如何倒平板？（1）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為固體固體
2、培養(yǎng)基培養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。于菌種分離、鑒定菌落等。（2）按功能來分，可分為）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒鑒別培養(yǎng)基別培養(yǎng)基。（3）按成分來分，可分為）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合合成培養(yǎng)基成培養(yǎng)基。1、培養(yǎng)基分類：、培養(yǎng)基分類：一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基2、選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基:分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有
3、機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基:分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基:分離導入了目的基因的受體細胞分離導入了目的基因的受體細胞不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質,例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。3、培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質、培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質（1）培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質，此外還要滿足哪些要求？（2）獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是什么？（3）避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面（4）什
4、么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？消毒與滅菌消毒與滅菌消毒：指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌：指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有微生物，包括芽孢和孢子。滅菌與消毒技術是微生物有關工作中最普滅菌與消毒技術是微生物有關工作中最普通也是最重要的技術。通也是最重要的技術。二、無菌技術二、無菌技術消毒的方法：消毒的方法：1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100煮沸煮沸5-6min2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 下煮下煮30min或或 80 下煮下煮15min3、化學藥劑消毒法、化學藥劑消毒法:用用75%酒精、新潔爾酒精、新潔爾滅等進
5、行皮膚消毒滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4、紫外線或化學藥物消毒、紫外線或化學藥物消毒滅菌的方法：滅菌的方法：1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170 下加熱下加熱1-2h。3、高壓蒸汽滅菌：、高壓蒸汽滅菌：100kPa、121 下維持下維持15-30min.6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟 7、如何倒平板？三、實驗操作三、實驗操作1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1 1、培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到、培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時，左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)
6、基的溫度？溫度？答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。時，就可以進行倒平板了。2 2、為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？、為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。生物污染培養(yǎng)基。問題討論：問題討論：3 3、平板冷凝后，為什么要將平板倒置？、平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4 4、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用濺在皿蓋與皿底
7、之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。2 2、純化大腸桿菌、純化大腸
8、桿菌接種方法有：接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌鐘將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個細胞可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,這就這就是菌落是菌落.1 1、為什么在操作的第一步以及每次劃線之、為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為
9、什么？需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環(huán)，能及時以便得到菌落。劃線結束后灼
10、燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。感染操作者。問題討論：問題討論：2 2、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3 3、在作第二次以及其后的劃線操作時，、在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開條起始處要少，每次從上一次劃
11、線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。的菌落。涂布平板的所有操作都應在火焰附近涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步應如何進行無步應如何進行無菌操作？菌操作？應從操作的各個細節(jié)保證應從操作的各個細節(jié)保證“無菌無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。在酒精燈火焰周圍等等。問題討論：問題討論：菌種的保存菌種的保存 1 1、臨時保藏：、臨時保藏：接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后養(yǎng)基，菌落長成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。2 2、長期保存：、長期保存：甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法
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