高中生物《血紅蛋白的提取和分離》課件7（19張PPT）（人教版選修1）

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歡迎進入生物課堂 課題3血紅蛋白的提取與分離 I 教學目標教學重點教學難點 理解色譜法 電泳法等分離大分子的基本原理了解緩沖液的組成及其作用血紅蛋白的分離 樣品處理凝膠色譜法的原理電泳法分離大分子的原理 課題3血紅蛋白的提取與分離 I 一 基礎知識 蛋白質提取和分離原理 蛋白質提取與分離的依據 蛋白質的物化理性質 形狀 大小 電荷性質和多少 溶解度 吸附性質 親和力等千差萬別 課題3血紅蛋白的提取與分離 I 1 凝膠色譜法 1 原理 2 材料 大分子通過多孔凝膠顆粒的間隙 路程短 流動快 小分子穿過多孔凝膠顆粒的內部 路程長 流動慢 多孔性的多糖類化合物 如葡聚糖 瓊脂糖 課題3血紅蛋白的提取與分離 I 1 凝膠色譜法 3 分離過程 洗脫 從色譜柱上端不斷注入緩沖液 促使蛋白質分子的差速流動 課題3血紅蛋白的提取與分離 I 由弱酸和相應的強堿弱酸鹽組成 如H2CO3 NaHCO3 HC NaC NaH2PO4 Na2HPO4等 1 凝膠色譜法 4 緩沖溶液 洗脫劑組成 配制 作用 調節(jié)酸和鹽的用量 可配制不同pH的緩沖液 抵制外界酸堿對溶液pH的干擾而保持pH穩(wěn)定 課題3血紅蛋白的提取與分離 I 2 凝膠電泳法 1 原理 不同蛋白質的帶電性質 電量 形狀和大小不同 在電場中受到的作用力大小 方向 阻力不同 導致不同蛋白質在電場中的運動方向和運動速度不同 影響蛋白質分子運動速度的因素 課題3血紅蛋白的提取與分離 I 在一定pH下 使蛋白質基團帶上正電或負電 加入帶負電荷多的SDS 形成 蛋白質 SDS復合物 使蛋白質遷移速率僅取決于分子大小 2 凝膠電泳法 2 分離方法 3 分離過程 瓊脂糖凝膠電泳 聚丙烯酰胺凝膠電泳等 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 二 實驗操作 實驗步驟 血液組成成分 閱讀思考 血液由 和 兩部分組成 血細胞中 細胞數量最多 細胞的含量最高的化合物是 該化合物是由 和 構成的 其中每個亞基中都含有一個能與O2和CO2結合的 基團 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 1 洗滌紅細胞 閱讀思考 洗滌的目的是什么 洗滌過程 血液100mL 重復洗滌3次 直至上清液沒有黃色 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 2 釋放血紅蛋白 閱讀思考 釋放血紅蛋白過程中 在洗滌好的紅細胞加入了哪些物質 為了加速釋放過程 采取了什么措施 目的分析 蒸餾水的作用是 加入甲苯的作用是 充分攪拌的目的是 使紅細胞大量吸水脹裂 溶解紅細胞的細胞膜 加速紅細胞的破裂 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 3 分離血紅蛋白 分離過程 紅細胞混合液 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 4 透析血紅蛋白 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 粗分離 凝膠色譜操作 1 凝膠色譜柱的制作 2 凝膠色譜柱的裝填 教材圖5 19 3 樣品的加入和洗脫 材料 交聯葡聚糖凝膠G 75 20mmol L磷酸緩沖液裝填 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 2 凝膠色譜柱的裝填 立刻用磷酸緩沖液洗滌平衡12h 洗滌平衡 一次性緩慢倒入 輕輕敲打 裝填懸浮液 凝膠顆粒 洗脫液 沸水浴 凝膠顆粒 蒸餾水 充分溶脹 根據色譜柱體積計算凝膠用量 色譜柱垂直固定在支架上 配制懸浮液 計算稱量凝膠 固定色譜柱 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 3 樣品的加入和洗脫 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 注意事項 1 紅細胞的洗滌 洗滌次數不能過少 低速 短時離心 2 凝膠的預處理 沸水浴法時間短 還能除去微生物和氣泡3 色譜柱的裝填 裝填盡量緊密 降低顆粒間隙 無氣泡 洗脫液不能斷流 4 色譜柱成功標志 紅色區(qū)帶均勻一致地移動 課題3血紅蛋白的提取與分離 II 知識總結 血紅蛋白的提取和分離 課題3血紅蛋白的提取與分離 I 影響蛋白質分子運動速度的因素 同學們 來學校和回家的路上要注意安全 同學們 來學校和回家的路上要注意安全