高中生物選修一微生物的實驗室培養(yǎng) 人教

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1、會計學1高中生物選修一高中生物選修一 微生物的實驗室培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng) 人人教教微生物包括哪五類：微生物包括哪五類：病毒病毒細菌細菌放線菌放線菌真菌真菌原生動物原生動物 原核生物原核生物界界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界第1頁/共25頁1、培養(yǎng)基可以分為哪兩類？2、培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外 還要滿足哪些要求？3、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？ 4、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面 5、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟 7、如何倒平板？第2頁/共25頁（1）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為固固體培

2、養(yǎng)基體培養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。用于菌種分離、鑒定菌落等。（2）按功能來分，可分為）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基。（3）按成分來分，可分為）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基。1、培養(yǎng)基分類：、培養(yǎng)基分類：一、培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基第3頁/共25頁加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌

3、分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導入了目的基因的受體細胞分離導入了目的基因的受體細胞第4頁/共25頁不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、 無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 3、培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)、培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)（1）培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì)，此外還要滿足哪些要求？第5頁/共25頁（2）獲得純凈培

4、養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？ （3）避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面 （4）什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？第6頁/共25頁消毒與滅菌消毒與滅菌消毒：指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌：指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。通也是最重要的技術(shù)。二、無菌技術(shù)二、無菌技術(shù)第7頁/共25頁消毒的方法：消毒的方法：1、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100煮沸煮沸5-6min2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 下煮下煮30min或

5、或 80 下煮下煮15min3、化學藥劑消毒法、化學藥劑消毒法:用用75%酒精、新潔爾酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒滅等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4、紫外線或化學藥物消毒、紫外線或化學藥物消毒第8頁/共25頁滅菌的方法：滅菌的方法：1、灼燒滅菌、灼燒滅菌2、干熱滅菌：、干熱滅菌：160-170 下加熱下加熱1-2h。3、高壓蒸汽滅菌：、高壓蒸汽滅菌：100kPa、121 下維持下維持15-30min.第9頁/共25頁6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟 7、如何倒平板？第10頁/共25頁三、實驗操作三、實驗操作1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基第11頁/共

6、25頁1 1、培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到、培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？的溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。時，就可以進行倒平板了。2 2、為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？、為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。生物污染培養(yǎng)基。問題討論：問題討論：第12頁/共25頁3 3、平板冷凝

7、后，為什么要將平板倒置？、平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4 4、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中

8、的微生物可能在皿蓋與皿底答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。平板培養(yǎng)微生物。第13頁/共25頁2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌接種方法有：接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法和稀釋涂布平板法第14頁/共25頁 平板劃線法平板劃線法: :通過接種環(huán)在瓊脂固體培通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作, ,將聚集的菌鐘將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后, ,可以分離到由一個細可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼

9、可見的子細胞群體胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體, ,這這就是菌落就是菌落. .第15頁/共25頁第16頁/共25頁第17頁/共25頁 1 1、為什么在操作的第一步以及每次劃線、為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種

10、，使下一次劃線時，接，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。問題討論：問題討論：第18頁/共25頁 2 2、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)

11、溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3 3、在作第二次以及其后的劃線操作時，、在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。的菌落。第19頁/共25頁第20頁/共25頁第21頁/共25頁 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火

12、焰附涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第菌操作要求，想一想，第2 2步應(yīng)如何進行步應(yīng)如何進行無菌操作？無菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證“無菌無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。要在酒精燈火焰周圍等等。問題討論：問題討論：第22頁/共25頁菌種的保存菌種的保存 1 1、臨時保藏：、臨時保藏：接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后養(yǎng)基，菌落長成后置于置于44冰箱保存冰箱保存。 2 2、長期保存：、長期保存：甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法第23頁/共25頁第24頁/共25頁