《甘肅省武威市高中生物 第3章 植物的組織培養(yǎng)技術(shù) 3.1 菊花的組織培養(yǎng)課件2 新人教版選修1 .ppt》由會(huì)員分享,可在線閱讀,更多相關(guān)《甘肅省武威市高中生物 第3章 植物的組織培養(yǎng)技術(shù) 3.1 菊花的組織培養(yǎng)課件2 新人教版選修1 .ppt(27頁珍藏版)》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
1、課題1 菊花的組織培養(yǎng),學(xué)習(xí)目標(biāo) 熟悉植物組織培養(yǎng)的基本過程。 理解細(xì)胞分化、脫分化及再分化概念。 課題重點(diǎn)與難點(diǎn) 課題重點(diǎn):植物組織培養(yǎng)的基本過程。 課題難點(diǎn):植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術(shù)。細(xì)胞分化,脫分化,再分化。,細(xì)胞分化:,個(gè)體發(fā)育中,細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和 生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。,特定時(shí)空下基因的選擇性表達(dá)。,形成各種組織器官。,③結(jié)果:,②原因:,①定義:,?什么是細(xì)胞分化?細(xì)胞分化的原因和結(jié)果?,一、基礎(chǔ)知識(shí),(一)植物的組織培養(yǎng)的基本過程,2.脫分化、再分化?愈傷組織(形成的?特點(diǎn)?),②愈傷組織是通過細(xì)胞分裂形成的,其細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則,高度液泡化呈無定形狀態(tài)的薄
2、壁細(xì)胞。,①脫分化:由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程。,③再分化:脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),又可以重新分化成根或芽等器官,這個(gè)過程叫再分化。,2.植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ):,細(xì)胞全能性:具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞,都具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力,即每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性。,細(xì)胞全能性表達(dá)條件:,2.一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件,1.外植體:從活植物體上切下進(jìn)行培養(yǎng)的那部分組織或器官,二、植物組織培養(yǎng)的基本過程,,離體器官、組織或細(xì)胞,,,,脫分化,,愈傷組織,,,再分化,叢芽、根,,植物體,,三、影響植物組織培養(yǎng)的因素?,不同植物的組織培養(yǎng)難度不同 同一
3、種植物的不同組織培養(yǎng)難度不同,大量元素:N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有機(jī)物:甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等 植物激素:生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等,1、外植體的選取,2、培養(yǎng)基的配制(MS培養(yǎng)基),菊花組織培養(yǎng)應(yīng)注意的問題?,討論:你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎?同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比,MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同?,答:微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機(jī)鹽; 蔗糖提供碳源,同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓; 甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞對特殊營養(yǎng)的需求。 微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主。與微生物的培
4、養(yǎng)不同,MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)。,,3、不同植物激素濃度,使用順序和使用量,4、消毒 在培養(yǎng)的整個(gè)過程中,都需要是一個(gè)無菌環(huán)境原因:,5、pH、溫度、光照 菊花: pH=5.8 溫度控制在18—22℃ 每日光照12h,,活動(dòng): 用自己的話把菊花組織培養(yǎng)的操作流程給描述出來?(提示:怎樣配制MS培養(yǎng)基?外植體消毒應(yīng)如何進(jìn)行?接種、培養(yǎng)、移栽時(shí)應(yīng)注意什么問題? ),制備MS固體培養(yǎng)基,外植體消毒,接種,培 養(yǎng),栽 培,,,,,四、實(shí)驗(yàn)操作,移 栽,,,沖洗—酒精—無菌水沖洗—氯化汞—無菌水沖洗至少三次之上,二、實(shí)驗(yàn)操作,(一)制備MS固體培養(yǎng)基,MS培養(yǎng)基包括20多種營養(yǎng)成分,實(shí)驗(yàn)室一般
5、使用4。C保存配制好的培養(yǎng)基母液來制備,1、配置各種母液,①無機(jī)物中大量元素濃縮10倍,微量元素濃縮100倍,常溫保存,②激素類、維生素類以及用量較小的有機(jī)物一般可按1mg/ml的質(zhì)量濃度單獨(dú)配制成母液,③用母液配制培養(yǎng)基時(shí),需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù),計(jì)算用量,2、配置培養(yǎng)基,①定容,② 調(diào)PH,③培養(yǎng)基的分裝,3、滅菌,分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,1、選材:菊花莖段,取生長旺盛的嫩枝,(二)外植體消毒,2、消毒,①流水沖洗,菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉,用軟刷輕輕刷洗,刷洗后在流水下沖洗20min左右,② 酒精處理—無菌水沖洗,用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分,放
6、入體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中搖動(dòng)2-3次,持續(xù)6-7s,立即將外植體取出,在無菌水中清洗,③氯化汞—無菌水沖洗至少三次之上,取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分,放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中1-2min,取出后在無菌水中至少清洗3次,漂凈消毒液,(三)接種,1、接種室消毒,2、無菌操作要求,操作要在酒精燈火焰旁完成,每次使用器械后,都需要用火焰灼燒滅菌,接種后立即蓋好瓶蓋。,3、材料的切取和接種,污染的主要來源是空氣中的細(xì)菌和孢子,接種室消毒是至關(guān)重要的。用70%的酒精噴霧使空氣消毒, 酒精或新潔爾滅擦洗工作臺(tái)并用紫外線照射20分鐘,4、接種注意事項(xiàng),①每接種一塊外植體前,鑷子需放入體
7、積分?jǐn)?shù)為75%的酒精溶液中消毒一次,然后在酒精燈火焰上燒一遍,冷卻后再接種,②外植體在培養(yǎng)基中要分布均勻,放置外植體數(shù)量根據(jù)錐形瓶的大小確定,一般胡蘿卜3-4塊,菊的莖或葉6-8塊,也不要太少,以充分利用培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分和光照條件,③插入時(shí)應(yīng)注意方向,不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養(yǎng)基利于吸收水分和養(yǎng)分,(四)培養(yǎng),無菌箱中培養(yǎng),定期消毒,保持適宜的溫度,光照,(五)移栽,(六)栽培,幼苗移栽后,每天觀察并記錄幼苗的生長情況,適時(shí)澆水、施肥,直至開花,移栽生根的菊花試管苗之前,應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜,讓試管苗在培養(yǎng)間生長幾日,1、打開封口膜,2、清洗轉(zhuǎn)移,用流水清洗根部的培養(yǎng)基,將幼苗移植到
8、消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間,珍珠巖:固體基質(zhì)型,含水量高、蓄水性強(qiáng)、透性好,適合栽培,三、課題延伸,1、一般來說,容易進(jìn)行無性繁殖的植物,也容易進(jìn)行組織培養(yǎng),2、實(shí)例:蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季,思 考,?,在整個(gè)操作過程中,是如何來實(shí)現(xiàn)無菌環(huán)境的?,1、培養(yǎng)基的滅菌(高壓蒸汽滅菌) 2、外植體的消毒(酒精、氯化汞) 3、接種的無菌操作(酒精、酒精燈——灼燒) 4、無菌箱中的培養(yǎng); 5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。,結(jié)果分析與評價(jià),(一)對接種操作中污染情況的分析 (二)是否完成了對植物組織的脫分化和再 分化 (三)是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對照與記錄 (四)生根苗的移栽是否合格,總
9、結(jié)植物組織培養(yǎng)過程:,離體組織或細(xì)胞,植物體,細(xì)胞分裂素≈生長素,愈傷組織,芽,根,細(xì)胞分裂素>生長素,細(xì)胞分裂素<生長素,,植物細(xì)胞培養(yǎng),,不需要光,,需要光,基礎(chǔ)知識(shí),(一)植物組織培養(yǎng)的基本過程,植物的組織培養(yǎng)技術(shù),不同的植物組織 同一植物的不同材料 營養(yǎng)、環(huán)境條件 植物激素,(二)影響植物組織培養(yǎng)的因素,1.制備MS固體培養(yǎng)基 1.1、配制母液 1.2、配制培養(yǎng)基 1.3、滅菌 2.外植體消毒 3.接種 4.培養(yǎng) 5.移栽 6.栽培,實(shí)驗(yàn)操作,本課題內(nèi)容小結(jié),,,,,菊花組織培養(yǎng),基礎(chǔ)知識(shí),實(shí)驗(yàn)操作,植物體的組織培養(yǎng),影響組織培養(yǎng)的因素,,細(xì)胞分化 細(xì)胞全能性 組織培養(yǎng)過程,營養(yǎng) 激素 環(huán)境條件,MS固體培養(yǎng)基制備 外植體消毒 接種 培養(yǎng) 移栽 栽培,思考:你打算做幾組重復(fù)?你打算設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)嗎?,答:每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng),用以說明培養(yǎng)基制作合格,沒有被雜菌污染。,