《動物細(xì)胞培養(yǎng)》課件

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1、動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞核移植、動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞融合、單克隆抗體單克隆抗體復(fù)習(xí)提問：復(fù)習(xí)提問：v植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)、植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。的基礎(chǔ)。v動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？動物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？閱讀了解：閱讀了解：動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機體內(nèi)取出相關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成的組織，將它分散成單個細(xì)胞單個細(xì)胞，然后，放，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓

2、這些細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增生長和增殖殖。2 2、過程：、過程：動物動物胚胎或幼齡胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們細(xì)動物的組織、器官，它們細(xì)胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。易培養(yǎng)。1 1、概念：、概念：一、動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物細(xì)胞培養(yǎng)（1 1）取材）取材v在進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶分散在進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為為7.27.4，此環(huán)境下，此環(huán)境下胃蛋白酶（胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶）沒有活

3、性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。的活性較高。（2 2）分散成單個細(xì)胞）分散成單個細(xì)胞（3 3）制成懸液，貼壁生長）制成懸液，貼壁生長（1）細(xì)胞貼壁）細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。稱為細(xì)胞貼壁。要求：要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。附。（2）接觸抑制）接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，稱為細(xì)胞的接觸抑制。胞就會停止分裂增殖，稱為細(xì)胞的接觸抑制。3 3、特點：、特點：動物細(xì)胞動物細(xì)胞過程：過程：什

4、么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？什么是原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？細(xì)胞懸細(xì)胞懸浮液浮液1010代代細(xì)胞細(xì)胞5050代代細(xì)胞細(xì)胞無限無限傳代傳代原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞系多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長和分裂。生長和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變遺傳物質(zhì)改變無菌、無毒的環(huán)境無菌、無毒的環(huán)境培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理措施：培養(yǎng)液中加抗生素，定期更換培養(yǎng)液措施：培養(yǎng)液中加抗生素，定期更換培養(yǎng)液營養(yǎng)營養(yǎng)糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、促糖、氨基酸、無機鹽

5、、微量元素、促生長因子生長因子（維（維生素、激素等）和生素、激素等）和動物血清動物血清溫度和溫度和PH PH 36.536.50.5 7.2-7.40.5 7.2-7.4氣體環(huán)境氣體環(huán)境 O O2 2 COCO2 2 9595空氣空氣 5 5的的COCO2 24 4、動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：、動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：p原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第第1 1代代細(xì)胞與細(xì)胞與傳傳1010代以代以內(nèi)內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。p傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)

6、胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。細(xì)胞株細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至：原代細(xì)胞一般傳至1010代左右細(xì)胞生長代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到40504050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至：細(xì)胞株傳代至5050代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代使其在培養(yǎng)條件下可以無限制

7、傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞為細(xì)胞系。細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點，失去接觸抑制，容改變，具有癌細(xì)胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。易傳代培養(yǎng)。動物動物胚胎胚胎或或幼齡幼齡動物的動物的組織、器官組織、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎單個細(xì)胞單個細(xì)胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液制成制成細(xì)胞懸細(xì)胞懸浮液浮液細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞系無限傳代無限傳代去掉組織去掉組織間蛋白間蛋白動物細(xì)胞培養(yǎng)不能動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體最終培養(yǎng)成生物體實質(zhì)是細(xì)胞增殖實質(zhì)是細(xì)胞增殖細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體植物體培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)

8、結(jié)果獲得細(xì)胞獲得細(xì)胞或或細(xì)胞產(chǎn)物細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無快速繁殖、培育無病毒植株等病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動物葡萄糖、動物血清血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖原理原理動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目比較項目植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較共點：離休、無菌、營養(yǎng)物質(zhì)、外界條件共點：離休、無菌、營養(yǎng)物質(zhì)、外界條件（1）大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、）大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）干擾素、單克隆抗體）（2）作為基

9、因工程中的受體細(xì)胞）作為基因工程中的受體細(xì)胞（3）培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物）培養(yǎng)的動物細(xì)胞可以用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性（4）為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理）為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)論依據(jù)5 5、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用：、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用：思考：思考：2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？1、動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組織培養(yǎng)基有何獨特之處？、動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組織培養(yǎng)基有何獨特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分

10、散成單個細(xì)胞？、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個細(xì)胞？4、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。獨特之主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。獨特之處有：處有：1、液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基 2、成分中有動物血清等、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強因為這些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多

11、，不能發(fā)育成新不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體的動物個體將動物的一個細(xì)胞的將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的細(xì)胞核的卵母細(xì)胞卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個中，使其重組并發(fā)育成一個新的新的胚胎胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體個體。用核移植的方法得到的動物稱為用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物克隆動物受體細(xì)胞：受體細(xì)胞：MM期的卵母細(xì)胞期的卵母細(xì)胞二、動物體細(xì)胞核移植和克隆動物二、動物體細(xì)胞核移植和克隆動物1 1、概念：、概念：2 2、類型：、類型：胚胎細(xì)胞核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度

12、高）體細(xì)胞核移植（難度高）黑面綿羊去黑面綿羊去核卵母細(xì)胞核卵母細(xì)胞白面綿羊乳白面綿羊乳腺細(xì)胞核腺細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植重組細(xì)胞重組細(xì)胞電脈沖刺激電脈沖刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一頭綿羊的子宮另一頭綿羊的子宮妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利3 3、體細(xì)胞核、體細(xì)胞核移植過程移植過程克隆羊培育過程克隆羊培育過程（M卵母細(xì)胞）卵母細(xì)胞）減數(shù)第二次分裂中期減數(shù)第二次分裂中期去核的卵母細(xì)胞去核的卵母細(xì)胞供體細(xì)胞注入供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞去核卵母細(xì)胞受體細(xì)胞激活，受體細(xì)胞激活，完成減數(shù)分裂、完成減數(shù)分裂、發(fā)育發(fā)育胚胎移植胚胎移植代孕母牛代孕母?？寺∨？寺∨? 4、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景（1 1）克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白）克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白（2 2）改良動物品種）改良動物品種 （3 3）治療人類疾病，作為供體）治療人類疾病，作為供體（4 4）保護(hù)瀕危動物）保護(hù)瀕危動物5 5、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：(1)(1)成功率低成功率低(2)(2)許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷(3)(3)安全性存在爭議安全性存在爭議