《動物細(xì)胞培養(yǎng)》PPT課件

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1、皮膚燒傷，如果創(chuàng)面很小（不大于硬幣）只要保持清潔，甚至深度燒傷，也可能自愈。如果下層真皮受損面積較大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自燒傷病人自身未燒傷的部位（自體植皮），也可取自其他活人或尸體（異體植皮）等。自體植皮是永久性的，取自其他人或動物的植皮是暫時性的，是在創(chuàng)面愈合過程中為保護(hù)創(chuàng)面而采取的措施，1014天后就要被身體排斥。,如果一個大面積燒傷的病人來說，自體皮膚有限，其他渠道的皮膚來源不足。如何才能獲得大量的自體健康皮膚？,動物細(xì)胞工程,,,,離體植物器官、組織或細(xì)胞,植物細(xì)胞工程常用的技術(shù):,植物組織培養(yǎng)、植物細(xì)胞培養(yǎng) 、植物體細(xì)胞雜交,溫故而知新,細(xì)

2、胞次生 代謝產(chǎn)物,植物體細(xì)胞雜交,植物細(xì)胞A,植物細(xì)胞B,,,去細(xì)胞壁,原生質(zhì)體融合,,雜種細(xì)胞,,植物細(xì)胞融合,這個過程中涉及的原理是？,細(xì)胞膜的流動性 植物細(xì)胞的全能性,動物細(xì)胞工程,常用技術(shù) 動物細(xì)胞培養(yǎng) 動物組織培養(yǎng) 細(xì)胞核移植 體細(xì)胞克隆 動物細(xì)胞融合 單克隆抗體,動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。,一、動物細(xì)胞與組織培養(yǎng) 1、概念：,是指在體外模擬動物體內(nèi)環(huán)境，將動物的細(xì)胞或組織在無菌、溫度適宜和營養(yǎng)充足的條件下培養(yǎng)，使其繼續(xù)生長、增殖并維持原有的結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。目的是獲得細(xì)胞或細(xì)胞代謝產(chǎn)物。,2、選料：,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，因?yàn)檫@些細(xì)胞生命

3、力旺盛，分裂能力強(qiáng)。,動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,,細(xì)胞懸浮液,,10代細(xì)胞,,無限傳代,單個細(xì)胞,,加培養(yǎng)液,剪碎,胰蛋白酶,胰蛋白酶或膠原蛋白酶,4、有關(guān)概念,,原代培養(yǎng)：是指從供體獲取組織或細(xì)胞后的初次培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離稀釋后轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。,細(xì)胞株：原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右，細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。,細(xì)胞株和細(xì)

4、胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。,貼壁生長：動物細(xì)胞在液體培養(yǎng)基中生長一段時間之后，大部分細(xì)胞會貼附在培養(yǎng)瓶的表面生長。 接觸抑制:細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中貼壁生長，隨著細(xì)胞越來越多，當(dāng)貼壁生長的細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，就停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫做接觸抑制。,動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,,細(xì)胞懸浮液,胰蛋白酶或膠原蛋白酶,,10代細(xì)胞,原代培養(yǎng),,無限傳代,單個細(xì)胞,,加培養(yǎng)液,遺傳物質(zhì)未改變,遺傳物質(zhì)改變,剪碎,胰蛋白酶,5、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件：,1、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液） 2、營養(yǎng) （葡

5、萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動物血清等。） 3、溫度和PH 溫度37左右 PH 7.2-7.4 4、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）,保證細(xì)胞順利的生長增殖,問題：,1.為何要定期用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來？ 2.比較動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分. 3.動物細(xì)胞培養(yǎng)是否能像植物細(xì)胞一樣 最終培養(yǎng)成新個體？,,獲得細(xì)胞,細(xì)胞的全能性,細(xì)胞株、細(xì)胞系,植物體,培養(yǎng)結(jié)果,或細(xì)胞分泌蛋白,快速繁殖、培育無病毒植株等,培養(yǎng)目的,葡萄糖、動物血清,蔗糖、植物激素,培養(yǎng)基特有成分,液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基性質(zhì),細(xì)胞增殖,原理,動物細(xì)胞培養(yǎng),植物組織培養(yǎng)

6、,比較項(xiàng)目,2、植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較,6、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用,1、獲得細(xì)胞產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)生物 制品病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等,2、器官移植的培養(yǎng),3、獲得細(xì)胞用于檢測有毒物質(zhì),1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞（） A細(xì)胞系 B細(xì)胞株 C原代細(xì)胞 D傳代細(xì)胞,2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 ----- （ ） A.動物細(xì)胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動物細(xì)胞培養(yǎng),A,D,3、為了使用于培養(yǎng)的動物組織細(xì)胞分散開以便配制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液，選取來的動物組織應(yīng)選用下列哪種物質(zhì)處理（ ） A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.鹽酸 D.胰脂肪酶,教學(xué)反

7、饋,B,4、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 （ ）A.容易產(chǎn)生各種變異 B具有更強(qiáng)的全能性C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強(qiáng),D,5、在動物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中，正確的是（ ） A動物細(xì)胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白 B動物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細(xì)胞分散 C細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中 D培養(yǎng)至50代后繼續(xù)傳代的細(xì)胞是細(xì)胞株 6、在動物細(xì)胞培養(yǎng)中有部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱之為（ ） A原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng) C細(xì)胞株 D細(xì)胞系,B,D,7、下列與動物細(xì)胞培養(yǎng)

8、有關(guān)的表述中，不正確的是（ ） A培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清 B原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右便會出現(xiàn)生長停滯 C動物細(xì)胞培養(yǎng)一般能夠傳到4050代，但其遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變 D動物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)和獲得大量自身健康細(xì)胞,C,8、下圖是動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據(jù)此圖回答,(1)容器A中放置的是動物器官或組織。它一般取自___________。 (2)容器A中的動物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是__________，然后用 酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來。這樣做的目的是_______________. (3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有

9、_______ ___等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，一般傳到第 代，有許多細(xì)胞衰老死亡，到這時的培養(yǎng)稱為___________. (4)為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用_____ 處理，然后配置成___________，再分裝。 (5)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡。原因是_________________________。,幼齡動物的器官或組織、動物胚胎,剪碎,胰蛋白,使每個細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸,葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清,10,原代培養(yǎng),胰蛋白酶,細(xì)胞懸浮液,細(xì)胞沒有發(fā)生癌變,二 動物細(xì)胞核移植和動物體細(xì)胞克隆,1 概念,將某種動物細(xì)胞的細(xì)胞核移入同種

10、或者異種動物的去除細(xì)胞核的成熟卵細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)。,動物體細(xì)胞克隆,是將供體細(xì)胞的細(xì)胞核與受體去核卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行人工組合，借助卵細(xì)胞的發(fā)育能力，經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)育成胚胎進(jìn)而形成個體的技術(shù)。其中的關(guān)鍵技術(shù)是細(xì)胞核移植技術(shù)。 用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物,動物細(xì)胞核移植,多利羊的產(chǎn)生過程：,,另一頭綿羊的子宮,2 過程,供體動物的組織,,細(xì)胞培育,供體細(xì)胞核,卵細(xì)胞,,去核,去核卵細(xì)胞,,注入,重組細(xì)胞,,分裂,重組胚胎,,胚胎移植,代孕母牛,,新個體,,,用卵細(xì)胞的原因？,細(xì)胞已經(jīng)發(fā)育成熟;細(xì)胞核較易取出；有重組和發(fā)育所需的因子便于發(fā)育成胚胎,受體卵母細(xì)胞為什么要先去核？,為了使克隆動物的遺傳

11、物質(zhì)(核內(nèi))全部來自供體動物的細(xì)胞；保證獲得其遺傳特性。,克隆是100%的復(fù)制嗎？,不是，克隆動物的核內(nèi)DNA跟供體動物的體細(xì)胞一樣，但其細(xì)胞質(zhì)的DNA則來源于受體卵母細(xì)胞。此外，動物的行為，習(xí)性受還環(huán)境的影響，可能與供體動物不同。,二 動物細(xì)胞核移植和克隆動物,1、 應(yīng)用前景,保護(hù)瀕危物種增加動物 的存活數(shù)量,用于組織器官的移植，皮膚移植,2 存在的問題,成功率不高,克隆動物存在健康、生理缺陷、遺傳缺陷等,三 動物細(xì)胞融合,1 概念,指在一定條件下2個或多個動物細(xì)胞融合形成一個細(xì)胞的過程,融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信息的細(xì)胞為雜交細(xì)胞。,2 過程,不同的兩個細(xì)胞,,滅活病毒,或

12、PEG,雜交細(xì)胞,3 意義,克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性,誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法,動物細(xì)胞融合的用途：,制備單克隆抗體,：仙臺病毒,,,紫外線,喪失感染活性（不感染細(xì)胞）,保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）,,物理法 化學(xué)法（PEG） 生物法,,,四 單克隆抗體,抗體：,由效應(yīng)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的，主要成分是球蛋白，一種效應(yīng)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體,單克隆抗體概念的理解：,單克隆抗體：由這些細(xì)胞群產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單 一、特異性強(qiáng)的抗體,單克隆:由單個效應(yīng)B細(xì)胞通過無性繁殖獲得細(xì)胞群,原始的方法：,獲得抗體，特異性差，純度低。,想獲得單一抗體：,必須用單個B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，通過克隆形成細(xì)胞群。,問

13、題：,怎樣才能獲得單克隆抗體？,我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？ 有什么方法能使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細(xì)胞無限增殖能力同時具備呢？,體外培養(yǎng)的條件下，一個B淋巴細(xì)胞是不可能無限增值的，如何使單個淋巴細(xì)胞增殖呢？,設(shè)計(jì)方案： 一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖,,雜種細(xì)胞,目的:制備單克隆抗體. 原理：,B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖，雜交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生抗體又能無限增殖。,單克隆抗體制備過程,,誘導(dǎo)細(xì)胞融合、篩選,足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群,,,單克隆抗體,誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？,？,？,抗原,

14、效應(yīng) B細(xì)胞,篩選,篩選,雜交瘤細(xì)胞,（1）為什么用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合？ 融合形成雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)？,思考：,（2）單克隆抗體制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技 術(shù)手段？,（3）制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選？,細(xì)胞膜的流動性； 雜交瘤細(xì)胞既能大量繁殖，又可以產(chǎn)生單一抗體,動物細(xì)胞融合、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞； 第二次篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞,（4）為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？,這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體,單克隆抗體的應(yīng)用,與常規(guī)抗體相比，單克隆

15、抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。,1、作為診斷試劑,2、用于治療疾病和運(yùn)載藥物 作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤,植物、動物細(xì)胞融合的比較,,,,,下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案,,制備單克隆抗體,B淋巴細(xì)胞,抗體,細(xì)胞融合,滅活病毒,雙親細(xì)胞,分泌抗體,無限增殖,1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是 --------------------（ ） A細(xì)胞系 B細(xì)胞株 C原代細(xì)胞 D傳代細(xì)胞,2、動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是 ------（） A.動物細(xì)胞融合 B.單克隆抗體 C.胚胎移植 D.動物

16、細(xì)胞培養(yǎng),A,D,3、動物細(xì)胞融合的目的中最重要的是（ ） A.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和 B. 制備單克隆抗體 C.培育新品種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞 4、動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（ ） 誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同 D. 都能形成雜種細(xì)胞,B,D,5、 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是（ ） A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合 B.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 C.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 D.由小鼠一個B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成,D,6、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞 （ ） A.容易產(chǎn)生各種變異 B具有更強(qiáng)的全能性 C.取材十分方便 D分裂增殖的能力強(qiáng),D,7、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細(xì)胞融合的是（ ） A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞 B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞 D.沒經(jīng)過免疫的淋巴細(xì)胞,A,再見,