《發(fā)酵車間消毒培訓(xùn)》PPT課件

上傳人:san****019 文檔編號:16045302 上傳時間:2020-09-16 格式:PPT 頁數(shù):24 大?。?12.51KB
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1、發(fā)酵車間消毒培訓(xùn),焦江濤,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,一、消毒與滅菌,消毒與滅菌在發(fā)酵工業(yè)中均廣泛應(yīng)用。 1、消毒:。是指用物理或化學(xué)的方法殺死物體上的病原微生物,一般只能殺死營養(yǎng)細(xì)胞而不能殺死細(xì)菌芽孢。 2、滅菌:是指用物理或化學(xué)的方法殺滅或除掉傳播媒介上的所有微生物(包括芽孢),使之達(dá)到無菌程度。在生產(chǎn)上習(xí)慣叫做消毒但它與消毒是的嚴(yán)格意義上的區(qū)別。,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,二、滅菌方法 滅菌的方法主要有:干熱滅菌法、濕熱滅菌法、化學(xué)藥品滅菌法、過濾除菌法、過濾除菌法。根據(jù)滅菌的對象和要求選用不同的方法。 1 干熱滅菌法 干熱滅菌法是指在干燥高溫條件下,將微生物殺死。干熱對微生物有氧化、蛋白質(zhì)

2、變性和電解質(zhì)濃縮引起中毒的作用,其中氧化作用是主要的。干熱滅菌必須高溫,工業(yè)生產(chǎn)中采用的條件是攝氏160,1h。主要使用于需要保持干燥的器械、容器的滅菌。生產(chǎn)實例:在接種操作和鏡檢涂片時用的灼燒滅菌法就是最簡單的干熱滅菌法,在投罐前的空消(125、30min)也屬于干熱滅菌,,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,所以在空消之前必須先把PH、溶氧電極拔掉,否則會大大削減其使用壽命。 濕熱滅菌法 濕熱滅菌是借助蒸汽釋放的熱能和水的參與,能使微生物細(xì)胞中蛋白質(zhì)、酶、核酸分子內(nèi)部的化學(xué)鍵(特別是氫鍵)受破壞,特別是蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆的凝固性變性,使微生物死亡。蒸汽在冷凝時釋放出大量潛熱,具有強(qiáng)大的穿透力,尤其適用

3、于大量培養(yǎng)基及發(fā)酵設(shè)備的滅菌。 溫?zé)釡缇c干熱滅菌相比具有以下特點: (1)濕熱滅菌時,菌體蛋白質(zhì)吸收熱量容易變性凝固; (2)濕熱的穿透力比干熱大(如表1所示) (3)蒸汽冷凝時放出大量潛熱,溫度上升快; (4)蒸汽制取簡便、成本低、數(shù)量大,適于工業(yè)生產(chǎn)。,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,,,,高溫滅菌也會給培養(yǎng)基帶來一些不利影響,所以在生產(chǎn)中就要求我們在實消時一定要嚴(yán)格按工藝要求來控制實消的溫度和時間。超溫超時對培養(yǎng)基的破壞主要有兩種情況:一造成培養(yǎng)基成分相互作用;二造成熱穩(wěn)定性差的原材料嚴(yán)重破壞。前者在降低培養(yǎng)基質(zhì)量的同時還會引起培養(yǎng)基褐變、沉淀,褐變反應(yīng)包括類黑色素褐變 (主要是氨基化合物與羰

4、基化合物在加熱條件下生成棕紅色的色素),焦糖化褐變(糖在沒有含氨基化合物存在下,加熱到其熔點逐步形成焦糖),糖類破壞后易和有機(jī)氮源結(jié)合,產(chǎn)生氨基糖,,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,對微生物產(chǎn)生一定的毒性,嚴(yán)重時將抑制微生物的生長發(fā)育破壞整個發(fā)酵所以在一、二步種子罐時,一旦發(fā)現(xiàn)料液發(fā)黑會發(fā)現(xiàn)其菌量很少,產(chǎn)糖或產(chǎn)酸會大受抑制甚至造成代謝停滯,嚴(yán)重時不得不倒罐。沉淀主要是在加熱情況下,培養(yǎng)基中的鈣鐵離子等成分易與磷酸鹽碳酸鹽發(fā)生反應(yīng)生成無機(jī)物沉淀和無機(jī)物如多肽類沉淀。后者會使玉米漿和酵母膏中的微量元素、蛋白質(zhì)及糖類遭到破壞,通常解決方案 如下:分開滅菌。對培養(yǎng)基中糖類等不耐高溫的成份與培養(yǎng)基其它成分分開滅菌

5、,冷卻后再混合比如我們的二步糖采取流加而不是放在一起實消;將培養(yǎng)基中的鈣鐵等離子成分與磷酸鹽分別滅菌可以避免發(fā)生沉淀反應(yīng)低溫滅菌,低溫滅菌幾乎對培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分沒有破壞。如我們一步的糖。培養(yǎng)基在達(dá)到完全滅菌時,滅菌溫度和滅菌時間對維生素C培養(yǎng)基養(yǎng)分破壞的比較:,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,3 化學(xué)藥品滅菌法 一些化學(xué)藥品易與微生物細(xì)胞中的某種成分產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng),如使蛋白質(zhì)變性、酶類失活,破壞細(xì)胞膜透性而殺死微生物。根據(jù)滅菌對象不同有浸泡、添加、擦拭、噴灑、氣態(tài)熏蒸等。如我們車間環(huán)境消毒用的濃度為1%--0.25%的高錳酸鉀溶液或0.25%的漂白粉,發(fā)酵罐發(fā)酵至終點前加入0.

6、25%的新潔爾滅和染菌后加入0.15%--0.17%的甲醛熏蒸、加入5%的氫氧化鈉浸泡,進(jìn)入無菌室操作前人雙手用75 %的酒精消毒。 三 投罐前的幾點注意事項 發(fā)酵是否成功,很大程度上決定于準(zhǔn)備工作,以下幾點須注意: 1、清洗發(fā)酵罐,特別要注意死角的洗刷和與外界接觸的零部位的清洗,清除罐底上批料的堆積物。 2、檢查取樣閥的密閉性有無關(guān)不嚴(yán)或滑絲現(xiàn)象,罐體、法蘭、軸封、移種閥、移糖閥、視鏡等有無滲漏、穿孔、堵塞、死角等情況,并用肥皂水或洗衣粉水嚴(yán)格試漏。隔膜閥更是要定期拆檢。,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,3、有機(jī)械攪拌裝置的發(fā)酵罐一定要擦干軸封支承內(nèi)的積水,氣升式發(fā)酵罐的罐頂部和視鏡處要經(jīng)常保持干燥清

7、潔。 4、檢查沖視鏡管是否暢通,沖視鏡閥是否內(nèi)漏,發(fā)現(xiàn)問題要徹底處理。 5、檢查罐上的儀表指針的靈敏度,是否歸零顯示有無偏差。 6、檢查與罐上相連接的螺絲是否有脫絲現(xiàn)象,破舊的及時換新 四消毒過程中的注意事項 1、首先要結(jié)合配料工共同確認(rèn)本批罐所用的原料為合格品,發(fā)現(xiàn)有結(jié)塊、變質(zhì)的原料拒絕使用。,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,2、在用泵向罐中打配制好的培養(yǎng)基時要注意保持稍開些進(jìn)氣,讓料翻騰,以防(前期)培養(yǎng)基濃度過大沉淀粘附在罐底。 3、打完料后首先調(diào)至適宜的PH,再確認(rèn)一下所有的培養(yǎng)基都已加入后封住罐口,開始從進(jìn)氣口、放料口、取樣口等分路進(jìn)入蒸汽。各路保持均衡進(jìn)汽,防止短路 和堵塞,排氣要暢通,排

8、汽量不宜過大,以節(jié)約蒸汽。 4、在實消過程中要保持壓力的穩(wěn)定,不宜突然卸壓升壓以防造成大量泡沫冒頂或逃料。 5、在實消控制時原則上以溫度為準(zhǔn),壓力為輔。但是在保壓時可能出現(xiàn)壓力表與溫度計不對應(yīng)的情況, 在不能確定到底是溫度計還是壓力表失靈時,當(dāng)壓力表顯示壓力大于等于0.1Mpa,而溫度,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,不到121時,以溫度計為準(zhǔn);反之,則以壓力表為準(zhǔn) ,總之要確保壓力與溫度都達(dá)到滅菌要求。 6、如遇蒸汽壓力突然升高,罐溫超過規(guī)定,可適當(dāng)縮短滅菌時間;如遇蒸汽壓力突然下跌,一時上不來,溫度下降到規(guī)定范圍以下,可適當(dāng)延長滅菌時間,以確保滅菌徹底。嚴(yán)防高溫高壓悶罐,否則容易造成培養(yǎng)基成分破壞和

9、PH值升高。 7、在實消結(jié)束降溫時在確定空氣過濾器的壓力大于罐壓時,可以先打開空氣進(jìn)氣閥,再開冷卻水閥以防外界空氣倒吸進(jìn)去。 8、在降溫過程中嚴(yán)防大開排氣閥使罐壓幾乎跌零,特別是種子罐裝料系數(shù)較大,這樣做會使料液翻騰劇烈產(chǎn)生大量的泡沫,易出現(xiàn)冒頂或逃料。 9、在消移種管道時要確保整個管道打氣暢通,嚴(yán)防堵塞,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,或排氣不暢。在消好后,通入無菌空氣(即給管道降溫又能使管道內(nèi)保持正壓)。 10、移種結(jié)束后要把發(fā)酵罐調(diào)至正常培養(yǎng)狀態(tài)并交給看罐工,打掃完現(xiàn)場衛(wèi)生后方可離開。 五、染菌原因分析 發(fā)酵工業(yè)自從采用純種培養(yǎng)以后,產(chǎn)率有了很大提高,然而防止染菌的要求也更高了。染菌是發(fā)酵工業(yè)的

10、致命傷,輕者影響產(chǎn)率、提取收率、產(chǎn)品質(zhì)量和三肇廢治理,嚴(yán)重者造成倒罐,浪費大量原材料,造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失,而且擾亂生產(chǎn)秩序,破壞生產(chǎn)計劃。 在發(fā)酵染菌之后,必須分析染菌原因,總結(jié)發(fā)酵染菌的經(jīng)驗教訓(xùn),把發(fā)酵染菌消滅在發(fā)生之前,防患于未然,是積極制服發(fā)酵染菌的最重要措施。 (一)不同染菌時間對發(fā)酵的影響 1、種子培養(yǎng)期染菌,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,種子培養(yǎng)主要是生長繁殖菌體,菌體濃度低,培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富,比較容易染菌,帶進(jìn)發(fā)酵罐中危害極大,應(yīng)嚴(yán)格控制種子污染。當(dāng)發(fā)現(xiàn)種子染菌均應(yīng)滅菌后倒入地溝,并對種子罐、管道進(jìn)行檢查和徹底滅菌。 2、發(fā)酵前期染菌 發(fā)酵前期主要是菌體生長繁殖,代謝產(chǎn)物較少,這個時期容易

11、染菌,一旦污染雜菌會迅速繁殖,與生產(chǎn)菌爭奪營養(yǎng)成分和氧分,嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的生長繁殖和產(chǎn)物的生成,要特別防止發(fā)酵前期染菌。緊急處理措施:如果污染危害較大的雜菌不能繼續(xù)運轉(zhuǎn),必須重新滅菌。重滅前可適當(dāng)放出部分發(fā)酵液,并補(bǔ)入適量的培養(yǎng)基特別是氮源使消后的培養(yǎng)基符合發(fā)酵要求,低滅后調(diào)節(jié)好PH后重新移種或倒種。,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,如果污染的雜菌無大的影響,可以繼續(xù)運轉(zhuǎn),但要密切注意發(fā)酵過程的代謝情況和雜菌的變化,必要時可適當(dāng)降低罐溫、空氣流量、和控制補(bǔ)料量進(jìn)行發(fā)酵。 3、發(fā)酵中期染菌 發(fā)酵中期染菌將嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的代謝,影響產(chǎn)物的生成。有些雜菌繁殖后產(chǎn)生酸性或堿性物質(zhì),使PH值異常變化加堿突增或驟減

12、,糖、氮消耗迅速,菌體自溶,發(fā)酵液發(fā)粘或渾濁,產(chǎn)生大量泡沫,代謝產(chǎn)物的積累迅速減少或停止或下降,有的發(fā)酵液發(fā)臭。發(fā)酵中期染菌,由于營養(yǎng)成分大量消耗,一般挽救處理困難,危害性很大常用的方法有:降低罐溫,控制殘?zhí)橇?,降低空氣流量或冷置待放。對于這種罐批在核算提取成本和一定濾速(一般不低于5ml/5min)時放罐,否則難以過濾,增大提取工作量甚至無法過濾而放棄。如果中期染的某些,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,雜菌不太嚴(yán)重情況,可以采取補(bǔ)加抑菌劑的辦法控制雜菌的生長繁殖,如二步發(fā)酵染酵母菌可加4--5.6kg的硫酸銅抑止酵母生長,革蘭氏陽性菌對青霉素和磺胺類抗生素敏感而陰性菌則不敏感,革蘭氏陰性菌對鏈霉素、氯

13、霉素和四環(huán)素等敏感而陽性菌則不敏感。霉菌發(fā)酵中染細(xì)菌可加入適量的青霉素來殺滅細(xì)菌。 4、發(fā)酵后期染菌 發(fā)酵后期產(chǎn)物積累較多,糖等營養(yǎng)物質(zhì)接近耗盡,如果染菌不太多,可繼續(xù)進(jìn)行發(fā)酵;如污染嚴(yán)重,破壞性較大,可以采取提前放罐。,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,(二)不同染菌規(guī)模的原因分析 1、當(dāng)發(fā)酵出現(xiàn)連續(xù)染菌或大面積染菌,一般是公用系統(tǒng)有問題,特別是空氣系統(tǒng)??偪者^濾器失效可效率下降,新裝的空過要避免因為介質(zhì)移位或翻動而造成空氣走短路。 接種和中間補(bǔ)糖設(shè)備系統(tǒng)有滲漏和死角,也會造成大面積染菌因此要按時檢查維修相關(guān)設(shè)備。 2、部分發(fā)酵罐染菌,發(fā)生在前期可能是滅菌不徹底或種子罐帶菌所致,同時也與公用接種設(shè)備系

14、統(tǒng)有關(guān);染菌發(fā)生在中后期,一般與補(bǔ)料、加堿有關(guān)。 3、個別罐連續(xù)染菌時要檢查該罐設(shè)備的各個部件,查找有無滲漏和死角,如降溫盤管穿孔是造成染菌的多見原因之一。個別罐批偶爾染菌,原因比較復(fù)雜,要針對具體情況,視染菌時間和染菌類型,從操作到設(shè)備作具體分析。,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,(三)從染菌類別上分析原因 1、染革蘭氏陽性桿菌、酵母菌等其它雜菌多是由空氣系統(tǒng)中帶入而造成污染也有可能是種子帶菌 2、染革蘭氏陰性桿菌、特別是球菌大多數(shù)因設(shè)備滲漏所致,帶菌的冷卻水或污水,從冷卻盤管、連接法蘭、襯里焊縫中滲漏進(jìn)入發(fā)酵罐培養(yǎng)基中。 3、染耐熱的芽孢桿菌,可能是培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底但并不是絕對的,空氣帶菌也常

15、引起染芽孢桿菌; 4、染霉菌,一般是無菌室滅菌不徹底或操作問題 六、染菌的途徑和防治 (一)種子帶菌及其防治 種子帶菌的原因: 1、培養(yǎng)基及用具滅菌不徹底 菌種培養(yǎng)基及用具滅菌均在滅菌鍋中進(jìn)行,造成滅菌不徹底主要是滅菌時鍋內(nèi)空氣排放不完全,造成假壓,使滅菌時溫度還達(dá)不到要求。,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,2、菌種在移種過程中受污染 菌種的移接工作是在無菌室中,按無菌操作進(jìn)行的。當(dāng)菌種移接操作不當(dāng)或管理不嚴(yán),就可能引起污染。 3、菌種在培養(yǎng)過程或保藏過程中受污染 菌種在培養(yǎng)過程和保藏過程中,由于外界空氣進(jìn)入,也使雜菌進(jìn)入而受污染。為了防止污染,試管的棉花塞應(yīng)有一定的緊密度,不宜太松,且有一定的長度,培

16、養(yǎng)和保藏溫度不宜變化太大。在放入搖床后要經(jīng)常去檢查種母搖瓶的狀況。 (二)無菌空氣帶菌及防止 空氣凈化系統(tǒng)失效或空氣精過、預(yù)過減效是發(fā)酵染菌的主要原因之一。具體防止措施:定期更新主空氣系統(tǒng)的過濾介質(zhì),加強(qiáng)平時系統(tǒng)的排污除水,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,特別是在多雨或潮濕的天氣。確保進(jìn)入車間之前的空氣升溫至35--45,使相對 濕度下降,定時拆檢空氣精過、預(yù)過。 (三)培養(yǎng)基和設(shè)備滅菌不徹底帶菌及防止 培養(yǎng)基和設(shè)備滅菌不徹底的原因,主要與以下幾個方面有關(guān) 1、原料形狀 一般稀薄的培養(yǎng)基容易滅菌徹底,而含有固體顆粒或粘稠狀物料時容易由于滅菌不徹底而造成染菌。這就要求在投料時確保攪拌混合均勻。 2、實消時

17、未充分扣除罐內(nèi)空氣 實消時罐內(nèi)空氣未完全排除造成假壓,使罐頂空間局部溫度達(dá)不到滅菌要求,導(dǎo)致滅菌不徹底而污染。因此在實消升溫時,應(yīng)打開排氣閥門及有關(guān),車間培訓(xùn)課件 焦江濤,連接管的邊閥、罐頂部的接管邊閥,使蒸汽通過達(dá)到徹底滅菌。 3、設(shè)備管道存在死角染菌及防止 由于操作、設(shè)備結(jié)構(gòu)、安裝或人為造成的屏障等原因,引起蒸汽不能到達(dá)預(yù)定部位,這就是死角。所以發(fā)酵罐要合理簡化安裝管、閥。凡不合理的管、閥、開孔都要堅決去掉,遺留的孔眼要焊平,消除隱患。管道之間盡可能用焊接來代替法蘭,不能用直角彎頭,要保持管道暢通、光滑、密封。主要閥門及其墊應(yīng)經(jīng)常檢查更換。 4、設(shè)備滲漏引起染菌及防止 發(fā)酵設(shè)備、管道、閥門

18、的長期使用,由于腐蝕、摩擦、振動或憋壓等原因,往往會造成滲漏。例如:,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,設(shè)備的表面或焊縫處有砂眼,由于腐蝕逐漸加深,最終導(dǎo)致穿孔;冷卻管受攪拌器作用,長期磨損,焊縫處受冷熱和振動產(chǎn)生裂縫而滲漏。防止措施:要選用優(yōu)質(zhì)材料并經(jīng)常檢查,小滲漏不易發(fā)現(xiàn)時可壓入堿性水,在可疑的地方用浸濕的酚酞指示劑的白布擦,如有滲漏時白布顯紅色。 5、操作問題 在發(fā)酵過程中如操作不當(dāng)也引起染菌,如移種時或發(fā)酵培養(yǎng)時罐內(nèi)壓力跌零,使外界空氣進(jìn)入而染菌;泡沫冒頂而造成染菌;壓縮空氣壓力突然下降使發(fā)酵液倒流入空氣過濾器而造成染菌等等;防止措施:加強(qiáng)對一線操作人員的無菌操作培訓(xùn)和始終貫徹?zé)o菌操作制度及責(zé)任心

19、教育,加強(qiáng)管理措施。,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,(四)、環(huán)境衛(wèi)生 發(fā)酵車間和菌種室的內(nèi)外環(huán)境,必須保持干凈整潔,定期清掃和消毒,車間周圍不得堆放廢棄物,不允許有活菌排放,有異味或易飛揚的物料的貯存,應(yīng)遠(yuǎn)離發(fā)酵車間和菌種室。 七、染菌的檢查 (一)感官檢查 1、大部分染菌的發(fā)酵液可以從發(fā)酵的異常情況來檢出,如色澤、異味、變稠或變稀、加堿速率、菌絲變形產(chǎn)酸不正常或不產(chǎn)酸或倒酸而糖卻消耗很快。 2、借助顯微鏡,常用梅蘭染色、結(jié)晶紫染色和革蘭氏染色來判斷。 (二)、無菌平皿劃線檢查 平板檢查法既可檢查出雜菌污染,又可以檢查出有無噬菌體污染。檢查雜菌時,先將滅菌后的培養(yǎng)基倒入已經(jīng)滅,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,菌的培養(yǎng)皿內(nèi),冷卻后置于37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時,進(jìn)行鏡檢?;蛘邔⒋龣z樣品置于37培養(yǎng)6小時,使細(xì)菌生長,增加數(shù)量,然后再劃線接種培養(yǎng)。這樣可以提高平板法的靈敏度。 (三)肉湯培養(yǎng)檢查法 主要用于空氣系統(tǒng)和培養(yǎng)基染菌的檢查。具體的做法是將培養(yǎng)液裝在吸所瓶中,滅菌30分鐘后,置于37培養(yǎng)24小時,如無混濁即可用于上述兩項的檢查。將無菌空氣或滅菌后的培養(yǎng)基引入后保溫培養(yǎng),觀察有無混濁現(xiàn)象發(fā)生,如呈現(xiàn)渾濁說明染菌 八、染菌的后續(xù)處理 染菌查找到原因后,對罐徹底清洗干凈,加入甲醛,車間培訓(xùn)課件 焦江濤,空消,

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