不同海拔高原地區(qū)嚴(yán)重燙傷延遲復(fù)蘇大鼠肺組織細(xì)胞凋亡及基因調(diào)控100字

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1、不同海拔高原地區(qū)嚴(yán)重燙傷延遲復(fù)蘇大鼠肺組織細(xì)胞凋亡及基因調(diào)控100字 　　 目的：探討不同海拔的高原地區(qū)嚴(yán)重燙傷延遲復(fù)蘇后肺組織細(xì)胞凋亡及其基因調(diào)控機(jī)制. 方法 : 雄性Wistar大鼠240只,分別在1517 m和3848 m海拔高度隨機(jī)分為延遲復(fù)蘇組(DFR, n=50), 即時復(fù)蘇組(IFR, n= 60) 和對照組(n=10), 建立總體表面積30%的Ⅲ度燙傷模型,分別于傷后1, 6, 12, 24, 72和168 h取材.采用組織病 理學(xué) 、組織芯片技術(shù)、原位末端標(biāo)記（TUNEL）法、免疫組織化學(xué)染色與圖象 分析 技術(shù),觀察肺組織病理學(xué)改變與細(xì)胞凋亡及B

2、cl2和HIF1α的表達(dá). 結(jié)果: 隨海拔的增加,肺泡壁明顯增厚,毛細(xì)血管內(nèi)皮腫脹,肺泡腔中出現(xiàn)水腫液且有炎性細(xì)胞浸潤,DFR組較IFR組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P 燒傷；復(fù)蘇術(shù)；肺泡/細(xì)胞學(xué)；上皮細(xì)胞；TUNEL；HIF1α；組織芯片；免疫組化；高原 0引言 近年的 研究 表明,多種臟器在發(fā)生缺血再灌注損傷時會出現(xiàn)細(xì)胞凋亡［1-2］,但對于高海拔地區(qū)嚴(yán)重燙傷延遲復(fù)蘇后大鼠肺組織的細(xì)胞凋亡及其基因調(diào)控機(jī)制,尚無 文獻(xiàn) 報道.本實(shí)驗(yàn)通過建立高海拔地區(qū)大鼠嚴(yán)重燙傷延遲復(fù)蘇模型, 應(yīng)用 組織芯片技術(shù)［3-4］、原位末端標(biāo)記技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色和圖象分析技術(shù), 研究高海

3、拔地區(qū)嚴(yán)重燙傷延遲復(fù)蘇大鼠肺組織細(xì)胞凋亡及其可能的調(diào)控機(jī)制. 畢業(yè) 1材料和方法 畢業(yè) 1.1材料健康雄性Wistar大鼠240只(蘭州軍區(qū)蘭州總 醫(yī)院 動物實(shí)驗(yàn)科提供), 體質(zhì)量(25030) g, 致傷前1 wk, 置室溫19～25℃. 實(shí)驗(yàn)前24 h用電推推去背部被毛,單籠飼養(yǎng).實(shí)驗(yàn)前12 h禁食、水. 10 mg/L戊巴比妥鈉(40 mg/kg) 腹腔注射麻醉,分別在中度高原(1517 m)和高原(3848 m)地區(qū)建立大鼠背部30%Ⅲ度燙傷模型(病理證實(shí)),致傷條件為90℃, 20 s. 每一海拔梯度隨機(jī)分3組:即時復(fù)蘇組(IFR, n=60), 即

4、刻腹腔注射等滲鹽水4 mL/kg; 延遲復(fù)蘇組(DFR, n=50), 6 h后腹腔注射等滲鹽水4 mL/kg; 正常對照組(n=10), 模擬燙傷, 不補(bǔ)液. 原位末端標(biāo)記試劑盒: TUNEL (3% H2O2, 檸檬酸緩沖液, TBS, 封閉液生物素化抗體和地高辛抗體, DAB顯色劑等)由武漢博士德生物工程有限公司提供. HIF1α:兔多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司), 工作濃度1∶100; Bcl2：鼠單克隆抗體(北京中杉生物工程有限公司)工作濃度1:100; SP試劑盒(北京中杉生物工程有限公司, 武漢博士德生物工程有限公司); 彩色病理圖文分析系統(tǒng)(同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)千屏影像工

5、程公司); 組織芯片制作儀(朝陽恒泰 科技 發(fā)展 有限責(zé)任公司). 1.2方法 1.2.1取材傷后1, 6, 12, 24, 72, 168 h, 每組取10只動物, 將大鼠處死, 迅速開胸, 于肺尖部切取0.5 cm0.5 cm0.5 cm大小組織, 10%甲醛固定, 置4℃冰箱. 對照組同上述方法. 畢業(yè) 1.2.2組織芯片的制備應(yīng)用組織芯片制作技術(shù)制備42（67）點(diǎn)列陣的組織芯片, 即由實(shí)驗(yàn)組各時相點(diǎn)肺組織標(biāo)本與相應(yīng)海拔梯度對照組肺組織標(biāo)本組成. 具體操作如下:①所有標(biāo)本經(jīng)中性福爾馬林固定, 56～58℃ 熔點(diǎn)石蠟包埋, 3～4 μm切片

6、, 經(jīng)蘇木素伊紅染色, 復(fù)核病理診斷,并在切片上標(biāo)記出典型的病變區(qū)域; ②用組織芯片制作儀的針孔芯針在無組織的空白蠟塊上鉆孔(直徑1.8 mm); ③借助玻片上的標(biāo)記找準(zhǔn)蠟塊上的相應(yīng)部位, 用組織芯針采集組織芯; ④將組織芯轉(zhuǎn)移到空白蠟塊中相應(yīng)的孔中, 如此反復(fù)將數(shù)百個組織芯整齊有序安插在空白的蠟塊中, 就制成了組織芯片蠟塊; ⑤空位Marker選用兩個正常的肝臟組織,位于芯片的一角. 1.2.3病理學(xué)觀察將不同海拔高度實(shí)驗(yàn)組、對照組肺組織標(biāo)本石蠟包埋、切片、HE染色，顯微鏡下觀察照像. 1.2.4免疫組織化學(xué)分析采用SP法免疫組織化學(xué)染色, 按試劑盒操作說明進(jìn)行, DAB顯色, 蘇木素復(fù)染. 對照組用PBS液代一抗. 免疫組化定量分析: 每張切片隨機(jī)選5個高倍視野, 測每個視野陽性信號平均灰度值. 反應(yīng)免疫組化染色越深, 灰度越小, 即陽性表達(dá)越高. 統(tǒng)計學(xué)分析: 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件,計量資料用xs表示;組間比較采用方差分析及LSDt檢驗(yàn);雙變量相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析,α=0.05.