32號資料+臨床實驗報告

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1、臨床試驗報告 目 錄 1. 摘要 1 2. 倫理學(xué)和有關(guān)指導(dǎo)原則 1 3. 縮寫說明 2 4. 引言 2 5. 試驗?zāi)康?3 6. 試驗管理 3 7. 試驗總體設(shè)計及方案 4 8. 試驗設(shè)計及參比藥選擇的依據(jù) 4 9. 受試者選擇 5 10.試驗藥物 9 11.給藥劑量及給藥途徑 9 12.生物樣本采集 9 13.生物樣品分析方法的建立與確證 9 14.數(shù)據(jù)質(zhì)量保證 23 15.研究結(jié)果數(shù)據(jù) 23 16.生物等效性評價 35 17.臨床不良事件觀察及分析 35 18.主要參考文獻(xiàn) 35 19.附件目錄 36 AAAA分散片人體生物等效性試驗研

2、究報告 1.摘要 本試驗采用HPLC-MS法測定20名健康男性志愿受試者分別口服BBB制藥有限公司提供的AAAA分散片100mg（受試制劑，規(guī)格：100mg/片）或CCC有限責(zé)任公司生產(chǎn)的AAAA分散片100mg（參比制劑，規(guī)格：100mg /片）后不同時刻血漿中AAAA的濃度，繪制了血藥濃度-時間曲線。由血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，獲得受試制劑和參比制劑的主要藥代動力學(xué)參數(shù)，采用方差分析和雙單側(cè)檢驗法進(jìn)行生物等效性判定。 用HPLC-MS法測定血漿中AAAA的濃度，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾樣品測定。AAAA標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為20.0~7000.0 ng/mL，定量下限為20.0 ng/mL，回收

3、率為86.0% ~87.4 %；批內(nèi)和批間精密度與準(zhǔn)確度均符合有關(guān)規(guī)定[1]，符合生物樣品分析要求。 受試制劑AAAA的t1/2：3.5 0.9h，Cmax：3949.1 839.4 ng/mL，Tmax：3.3 0.7 h，AUC0-t：25303.37327.7 ngh/mL；參比制劑AAAA的t1/2：3.6 0.9 h，Cmax：3959.0 936.8ng/mL，Tmax：3.3 0.9 h，AUC0-t：25148.27264.4 ngh/mL。 以AUC0-t計算，與參比制劑相比受試制劑AAAA的平均相對生物利用度為102.0 % 16.8 %。 主要藥代動力學(xué)參數(shù)經(jīng)對

4、數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，并進(jìn)一步采用雙單側(cè)t檢驗和[1-2α]置信區(qū)間法進(jìn)行生物等效性評價，其中Tmax采用非參數(shù)檢驗法。結(jié)果表明，BBB制藥有限公司研制的AAAA（受試制劑）的AUC0-t、AUC0-∞和Cmax均拒絕生物不等效假設(shè)。受試制劑中，AAAAAUC0-t的90 %置信區(qū)間為參比制劑的94.2~ 107.5 %，AUC0-∞的90 %置信區(qū)間為參比制劑的93.9~ 107.6 %，Cmax的90 %置信區(qū)間為參比制劑的95.1 ~ 105.4 %，受試制劑和參比制劑間的Tmax差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 根據(jù)以上結(jié)果，判定BBB制藥有限公司提供的AAAA分散片100mg（受試制劑，規(guī)格：1

5、00mg片）與CCC有限責(zé)任公司生產(chǎn)的AAAA分散片100mg（參比制劑，規(guī)格：100mg片）具有生物等效性。 2. 倫理學(xué)和有關(guān)指導(dǎo)原則 赫爾辛基宣言（當(dāng)前版本） 國際協(xié)調(diào)會（ICH）的GCP原則 中華人民共和國國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）頒布的GCP原則 中華人民共和國藥品管理法 本試驗嚴(yán)格遵守赫爾辛基宣言的有關(guān)倫理準(zhǔn)則，試驗方案經(jīng)獨立倫理委員會（IEC）審核批準(zhǔn)。實驗開始之前，研究人員向受試者說明試驗藥物的性質(zhì)，試驗的目的、方法、試驗的風(fēng)險和自愿參加的原則，并獲得受試者的書面知情同意書。 3. 縮寫說明 ANOVA 方差分析 Cmax

6、 達(dá)峰濃度（最大血藥濃度） Tmax 達(dá)峰時間（達(dá)到最大血藥濃度所需的時間） t1/2 消除半衰期 AUC 血藥濃度-時間曲線下面積 AUC0-t 零時間到最終采血點的血藥濃度-時間曲線下面積 AUC0-∞ 零時間到無限大時間的血藥濃度-時間曲線下面積 F 相對生物利用度 DAS 2.0 數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件 SPSS16.0 數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件 rpm 轉(zhuǎn)/分 QC 質(zhì)控樣品 SD 標(biāo)準(zhǔn)差 RE 相對偏差 RSD 相對標(biāo)準(zhǔn)差 Mean 平均值 4.引言 AAAA

7、，其化學(xué)名稱N-(4-硝基-2-苯氧基)甲基磺酰胺 分子式：C13H12N2O5S 分子量：308.31 結(jié)構(gòu)式： AAAA(nimesulide，NI) 是一種非甾體抗炎藥，可選擇性抑制環(huán)氧合酶-2，具有很強的抗炎、解熱和鎮(zhèn)痛作用，并有抑制人中性粒細(xì)胞的突發(fā)性呼吸，消除炎癥時體內(nèi)過多的自由基等多種作用。臨床上用于呼吸道炎癥、風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、手術(shù)后疼痛和水腫等的治療。本品口服吸收迅速完全，健康志愿者口服AAAA片100mg后，平均血峰濃度2.86～4.58mg/L，達(dá)峰時間1.22～3.83h之間，食物對其吸收速度均無明顯影響，相對生物利用度為54%～96%；

8、口服吸收后，廣泛與血漿蛋白結(jié)合，游離型藥物僅占0.7%～4.0%，主要分布在細(xì)胞外液，表觀分布容積為0.19～0.39L/kg。 由BBB制藥有限公司生產(chǎn)的AAAA分散片（受試制劑），已經(jīng)由國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)進(jìn)行臨床研究。該藥與CCC有限責(zé)任公司生產(chǎn)的AAAA分散片（參比制劑）具有相同的給藥途徑和活性成分，按《藥品注冊管理辦法》可進(jìn)行人體相對生物利用度和生物等效性試驗。 5. 試驗?zāi)康? 本試驗采用隨機交叉方法對20例健康成年男性志愿者，以市售AAAA分散片（CCC有限責(zé)任公司）為參比制劑，研究單劑量口服AAAA分散片（BBB制藥有限公司，受試制劑）相對生物利用度并對生物等效性進(jìn)行

9、評價（批件號：2009L00656）。 6. 試驗管理 主要研究者接到遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥理基地臨床試驗任務(wù)后，依據(jù)申辦者提供的資料及查閱參考文獻(xiàn)后，召開臨床試驗方案討論會，與申辦方共同撰寫臨床試驗方案、病例報告表及知情同意書，經(jīng)質(zhì)量保證部門審查合格后提交倫理委員會審核，并在臨床試驗機構(gòu)備案。經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)后，由主要研究者主持召開臨床試驗啟動會，對參加本次試驗的所有人員實施GCP培訓(xùn)，制訂試驗過程中的監(jiān)查、實驗室質(zhì)量控制、統(tǒng)計/數(shù)據(jù)管理、嚴(yán)重不良事件的報告等相關(guān)的各種標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，對研究中可能發(fā)生的問題制訂其處理措施。 臨床試驗機構(gòu)根據(jù)試驗藥物的特性和要求，組織招募健康志愿者并

10、進(jìn)行體檢，經(jīng)體檢合格后進(jìn)行本研究。試驗期間，有專門醫(yī)師負(fù)責(zé)進(jìn)行并記錄試驗前后受試者的體溫、脈搏、呼吸和血壓，對可能出現(xiàn)的危急情況備有急救措施，并負(fù)責(zé)危急情況時的急救。 研究用藥由該藥理基地專人負(fù)責(zé)接收并對其進(jìn)行編碼和保管。研究用藥的領(lǐng)取根據(jù)參加試驗的受試者人數(shù)，由研究者在試驗當(dāng)天領(lǐng)取試驗藥物，保管人員詳細(xì)記錄并由研究者簽名和注明日期。因試驗人數(shù)的變動，研究者再領(lǐng)取或退還藥物，應(yīng)做詳細(xì)的記錄。 7. 試驗總體設(shè)計及方案 本試驗采用隨機分組、雙周期雙交叉試驗的設(shè)計方法。將招募的符合入選標(biāo)準(zhǔn)的20名健康男性志愿受試者隨機分配至2組，每組10人，按表1以相同劑量（100mg）進(jìn)行給藥，每位受試者

11、均分別交叉口服受試制劑和參比制劑，進(jìn)行交叉對照和自身對照。交叉服藥前有一周清洗期。 表1 給藥方案表 分組 周期 A B 周期1 T R 周期2 R T T：受試制劑 R：參比制劑 8. 試驗設(shè)計及參比藥選擇的依據(jù) 參比制劑的選擇符合《藥品注冊管理辦法》附件二，并按照臨床研究批件的要求選擇。CCC有限責(zé)任公司生產(chǎn)的AAAA分散片，其與受試制劑具有相同的給藥途徑和活性成分，且在市場中已成主導(dǎo)產(chǎn)品，符合國家有關(guān)規(guī)定和要求[1]，故采用其作參比制劑。 9. 受試者選擇 9.1 入選標(biāo)準(zhǔn) 1. 健康志愿者，男性，年齡18~40歲，且同一批受試者的年齡不宜相差

12、10歲。 2. 體重指數(shù)（BMI）在19~24〔BMI=體重kg/(身高m)2〕之間。 3. 無心、肝、肺、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史。 4. 經(jīng)體格檢查血壓、心電圖、呼吸狀況及肝、腎功能、血象均無異常者（或經(jīng)臨床醫(yī)師判斷無臨床意義者）。 5. 試驗前2周內(nèi)未服過任何其他藥物。 6. 3個月內(nèi)無獻(xiàn)血史。 7. 試驗前30天內(nèi)未服過任何試驗藥物。 8. 自愿簽署知情同意書。 不符合上述條件之一者，不得作為受試者入選。 9.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 1. 篩選時體格檢查，實驗室檢查或心電圖檢查異常。 2. 有肝病史或血清轉(zhuǎn)氨酶超過正常范圍者。 3.

13、在過去的一年中，有酗酒史、嗜煙或藥物濫用史者。 4. 入選前3個月內(nèi)，參加過另一藥物試驗者。 5. 試驗前2周內(nèi)服用過影響試驗的其他藥物。 6. 任何對AAAA藥物過敏者。 9.3 剔除標(biāo)準(zhǔn) 1. 一次藥未用者； 2. 無任何記錄者； 3. 采血時間錯誤； 4. 用藥劑量與方法錯誤； 5. 采血后處理、保藏、運輸方法失誤； 6. 使用了影響研究結(jié)果的其它藥物。 9.4 終止試驗標(biāo)準(zhǔn) 1. 在擬用的治療劑量下，出現(xiàn)了嚴(yán)重不良反應(yīng)（危及生命，或影響正常的一般性工作和生活），應(yīng)終止全部試驗； 2. 在擬用的治療劑量下，多數(shù)受試者出現(xiàn)中度不良反應(yīng)，應(yīng)終止全部試驗。 9.

14、5 替換原則 退出、脫落或被剔除的受試者可進(jìn)行替換。 當(dāng)受試者退出、脫落或被剔除時，替換的受試者應(yīng)采用與退出、脫落或被剔除、的受試者相同的試驗過程。替換的受試者編號加“100”，以便與其他受試者區(qū)別。 9.6 入選及體檢情況 入選的20名健康男性志愿受試者在被告知所有與藥物有關(guān)的可能不良反應(yīng)后，簽署知情同意書。受試者全面體格檢查均正常（其中包括腎功能、肝功能、血常規(guī)及尿常規(guī)等體格檢查指標(biāo)）。詳見表2-1 ~ 2-3。 表2-1 受試者自然狀況與試驗分組安排一覽表 受試者 編碼 受試者 代碼 年齡 （y） 體重 （kg） 身高 （cm） 體重指數(shù) （BMI）

15、 試驗周期 1 2 1 YUQI 20 73 176 23.6 T R 2 ZSMI 28 65 166 23.6 R T 3 CZHU 19 60 175 19.6 T R 4 SXYO 23 70 173 23.4 R T 5 HUJU 25 63 162 24.0 T R 6 MQFU 28 60 168 21.3 R T 7 BUTA 20 69 187 19.7 T R 8 CWLO 24 60 172 20.3 R T 9 CGYA 26 5

16、6 165 20.6 T R 10 NTHU 19 67 176 21.6 R T 11 GZJI 20 60 176 19.4 T R 12 LXJI 19 55 168 19.5 R T 13 YUYA 19 65 174 21.5 T R 14 LXBI 20 60 170 20.8 R T 15 JDSH 27 55 165 20.2 T R 16 LXTI 19 65 180 20.1 R T 17 DOKA 21 60 165 22.0 T R

17、18 LVNI 20 75 178 23.7 R T 19 ZHCH 22 65 175 21.2 T R 20 WKYU 24 60 172 20.3 R T 均值 22 63 172 21.3 SD 3.2 5.6 6.1 1.6 T：受試制劑 R：參比制劑 表2-2 受試者實驗體格檢測結(jié)果 篩選號 受試者 編碼. 體溫 ℃ WBC 109/L RBC 1012/L HGB g/L PLT 109/L ALT g/L AST g/L C

18、r μmol/L BUN μmol/L 心電圖 尿常規(guī) 備注 12 1 36.2 6.1 4.59 141 198 19 16 88 4.95 正常 正常 入選 1 2 36.1 6.3 5.33 166 216 10 30 69 6 正常 正常 入選 2 3 36.3 6.6 4.86 140 166 13 25 67 3.97 正常 正常 入選 5 4 36.5 7.5 5.53 162 246 40 21 72 4.33 正常 正常 入選 10 5 36.3

19、 4.2 5.1 159 194 23 29 68 5.6 正常 正常 入選 3 6 36.2 6.7 4.93 151 249 11 19 67 3.96 正常 正常 入選 6 7 36.4 5.2 4.8 151 247 11 29 53 4.27 正常 正常 入選 13 8 36.2 6.5 4.81 156 196 26 24 66 4.33 正常 正常 入選 7 9 36.4 6.1 5.31 168 198 9 17 64 4.43 正常 正常 入選

20、 8 10 36.3 6.0 4.83 138 271 7 17 65 4.02 正常 正常 入選 14 11 36.5 4.4 5.48 170 177 23 18 84 5.32 正常 正常 入選 15 12 36.0 4.9 5.35 155 171 19 10 70 6.85 正常 正常 入選 16 13 36.0 6.7 4.86 148 169 20 10 82 5.08 正常 正常 入選 17 14 36.2 7.1 5.17 147 280 19 18

21、 65 5.26 正常 正常 入選 4 15 36.3 8.9 5.14 216 157 9 17 65 3.93 正常 正常 入選 18 16 36.3 7.2 4.77 147 176 18 16 66 3.07 正常 正常 入選 19 17 36.1 6.5 5.19 172 122 22 15 73 4.71 正常 正常 入選 11 18 36.0 7.9 4.93 149 249 40 29 68 3.35 正常 正常 入選 20 19 36.2 7.0

22、 5.08 158 220 40 22 76 4.51 正常 正常 入選 9 20 36.1 4.4 5.15 157 196 34 21 55 5.17 正常 正常 入選 21 36.2 5.7 4.68 144 150 57↑ 32 86 3 正常 正常 未入選 表2-3 受試者體格檢測結(jié)果(出組) 受試者 編碼. 體溫 ℃ WBC 109/L RBC 1012/L HGB g/L PLT 109/L ALT g/L AST g/L Cr μmol/L B

23、UN μmol/L 心電圖 尿常規(guī) 1 36.7 6.1 4.5 140 200 16 13 78 3.96 正常 正常 2 36.5 5.9 4.92 155 193 61 34 78 4.74 正常 正常 3 36.5 4.2 4.73 138 138 16 17 71 4.35 正常 正常 4 36.1 8.8 5.31 157 223 33 33 68 3.17 正常 正常 5 36.2 4.4 5.08 158 228 50 35 80 4.37 正常 正常

24、 6 36.2 7.9 4.55 141 246 9 20 61 3.7 正常 正常 7 36.1 7.5 5.0 157 261 20 24 63 3.99 正常 正常 8 36.1 5.6 4.88 159 190 17 10 88 4.94 正常 正常 9 36.7 6.6 5.11 161 181 18 12 63 4.47 正常 正常 10 36.5 4.8 4.48 130 212 16 12 77 4.91 正常 正常 11 36.2 4.0 5.16

25、163 173 13 34 77 6.16 正常 正常 12 36.1 7.4 5.06 146 145 9 13 87 5.62 正常 正常 13 36.2 8.0 4.71 146 169 19 12 68 4.01 正常 正常 14 36.2 6.1 5.05 146 288 16 12 73 4.35 正常 正常 15 36.2 8.1 5.07 155 212 17 18 70 4.29 正常 正常 16 36.1 7.3 4.68 144 187 15 14

26、 76 3.44 正常 正常 17 36.1 5.1 4.88 163 137 21 11 72 4.43 正常 正常 18 36.1 6.8 4.76 143 199 39 24 86 4.56 正常 正常 19 36.1 7.9 4.75 148 241 37 18 71 4.7 正常 正常 20 36.1 5.0 5.1 155 186 32 17 71 4.38 正常 正常 10. 試驗藥物 受試制劑（T）：AAAA分散片，規(guī)格：100mg /片，批號：XXXXX，由BBB制藥有

27、限公司生產(chǎn)提供； 參比制劑（R）：AAAA分散片，規(guī)格：100mg /片，批號：XXXXX，由CCC有限責(zé)任公司生產(chǎn)，BBB制藥有限公司提供。 11. 給藥劑量及給藥途徑 根據(jù)《中國藥典臨床用藥須知》2005年版（化學(xué)藥和生物制品卷）及有關(guān)生物等效性研究的文獻(xiàn)資料[2 ~5]，確定給藥劑量為單次口服100mg。 服藥前禁食過夜10h以上，試驗日晨空腹口服受試制劑1片（100mg /片）或參比制劑1片（用250 mL溫開水送服），并做記錄。 12. 生物樣本采集 將符合入選標(biāo)準(zhǔn)的20名健康男性志愿受試者隨機分成兩組，每組10人。 服藥前禁食10h以上，試驗日晨空腹口服受試制劑1片

28、或參比制劑1片，用250 mL溫開水送服并做記錄。服藥后2h可飲水，4h進(jìn)統(tǒng)一清淡飲食。分別于給藥前及給藥后的0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，6.0，8.0，12.0，18.0，24.0 h取靜脈血，每一階段總計取13個點（每點取血5 mL）。置肝素抗凝試管中，所有受試者的血樣收集后應(yīng)，3000 rpm離心10 min，分離血漿，分離出的血漿樣本置于已標(biāo)記好的試管中在- 20 ℃以下的冰箱中儲存待測。 13. 生物樣品分析方法的建立與確證 13.1儀器、試藥與試劑 13.1.1儀器 LC系統(tǒng) LC-10ATvp輸液泵 日本島津公司 MS系統(tǒng) 2010E

29、V型單重四極桿質(zhì)譜儀（ESI源） 日本島津公司 數(shù)據(jù)采集 LC-MS Solution 3.0 日本島津公司 分析天平 AB135-S分析天平 METTLER TOLEDO公司 振蕩器 XW-80A旋渦混合器 上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠 蒸發(fā)儀 WM-2H型無油壓縮機 天津市醫(yī)療儀器二廠 數(shù)據(jù)處理 統(tǒng)計軟件DAS2.0 中國藥理學(xué)會 離心機 SC-2546低速離心機 科大創(chuàng)新股份有限公司 HC-2516高速離心機 科大創(chuàng)新股份有限公司 超聲儀 KQ5200B型超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司 13.1.2試藥與試劑

30、AAAA對照品 （批號：XXXXX） 中國藥品生物制品檢定所 內(nèi)標(biāo)對照品 （含量：99.8% 批號：XXXXX） 中國藥品生物制品檢定所 甲醇（色譜純） 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 乙酸乙酯（分析純） 天津市大茂化學(xué)試劑廠 二氯甲烷（分析純） 天津市大茂化學(xué)試劑廠 重蒸水 實驗室自制 空白血漿 沈陽軍區(qū)總醫(yī)院 13.2溶液的配制 13.2.1AAAA儲備液及標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制 稱取AAAA對照品約5mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成濃度約0.1 mg/mL的AAAA儲備液Ⅰ。以甲醇-水（50: 50,v/v）稀釋

31、儲備液Ⅰ，配制AAAA標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，如表3所示。 表3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 稀釋過程 AAAA（μg/mL） Sd7 儲備液Ⅰ, 3.5 mL→10 mL 35.0 QC3 儲備液Ⅰ, 3.0 mL→10 mL 30.0 Sd6 儲備液Ⅰ, 1.5 mL→10 mL 15.0 Sd5 儲備液Ⅰ, 0.5 mL→10 mL 5.0 QC2 儲備液Ⅰ,1.25 mL→50 mL 2.5 Sd4 QC2, 6 mL→10 mL 1.5 Sd3 QC2, 2mL→10 mL 0.5 QC1 QC2, 1mL→10 mL 0.2

32、5 Sd2 QC2, 0.8mL→10 mL 0.2 Sd1 QC2, 0.4mL→10 mL 0.1 13.2.2內(nèi)標(biāo)溶液的配制 取內(nèi)標(biāo)對照品約10 mg，精密稱定，置250 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度約為40.0μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。 各儲備液、標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及內(nèi)標(biāo)溶液均以相應(yīng)體積、經(jīng)過校正的量瓶配制，并于4 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩? 13.3 色譜/質(zhì)譜條件 13.3.1 色譜條件 色譜柱：ODS C18柱（150 4.6 mm , 5 m） 大連中匯達(dá)科學(xué)儀器有限公司 預(yù)柱： ODS C18保護(hù)柱（10 4.6 mm） 大連中

33、匯達(dá)科學(xué)儀器有限公司 流動相：甲醇-水（84:16，v/v） 流速： 0.8 mL/min 進(jìn)樣量：5 mL 柱溫： 30℃ 13.3.2 質(zhì)譜條件 ESI源 CDL溫度： 200℃ 加熱塊溫度： 200℃ 霧化氣N2流速：1.5mL/min 反吹氣N2流速：0.2mL/min 檢測電壓：1.5kv 檢測方式：負(fù)離子 掃描方式：選擇離子監(jiān)測 m/z 307.00（AAAA）， m/z295.90（內(nèi)標(biāo)） 13.4血漿樣品預(yù)處理方法 取血漿樣品100 μL，加入甲醇20 μL，內(nèi)標(biāo)溶液50 μL，渦旋，加二氯甲烷-乙酸乙酯（4:1，v/v）2 m

34、L，渦旋混合3 min，離心5 min（4000 rpm），分取有機相，于空氣流下吹干，殘渣用流動相定容至2mL，超聲5 min，渦旋 3min，轉(zhuǎn)移至EP管中，離心3 min（12000 rpm），取5L進(jìn)行分析。 13.5分析方法確證 13.5.1專屬性試驗 AAAA和內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)物）離子化后，主要生成[M-H]+準(zhǔn)分子離子峰，分別為m/z307.00和m/z 295.90，將兩者作為定量分析時的監(jiān)測離子。全掃描圖如圖1所示。 圖1 AAAA（A）和內(nèi)標(biāo)（B）的全掃描質(zhì)譜圖 精密量取6名受試者的空白血漿100 L，除不加內(nèi)標(biāo)溶液外，其余按“血漿樣品預(yù)處理”項下操作，得色譜圖2.1；

35、將一定濃度的AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液加入空白血漿中，依同法操作，得色譜圖2.2。AAAA的保留時間為3.1 min，內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)的保留時間為2.0 min；取受試者5服用受試制劑2.5 h后的血漿樣品100 μL，依同法操作，得色譜圖2.3。 上述色譜圖結(jié)果表明，AAAA的保留時間為3.1 min左右，內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)的保留時間為2.0 min左右，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾AAAA和內(nèi)標(biāo)物內(nèi)標(biāo)的測定（Ⅰ為AAAA，Ⅱ為內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)）。 圖2.1 空白血漿樣品色譜圖圖 圖2.2 空白血漿樣品加對照品色譜圖 圖2.3 受試者5口服受試制劑2.5h的血漿樣品色譜圖 13.5.2標(biāo)準(zhǔn)曲

36、線與線性范圍 取空白血漿100 μL，分別加入AAAA系列標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，配制成相當(dāng)于血漿中AAAA濃度為20.0，40.0, 100.0，300.0，1000.0，3000.0和7000.0 ng/mL的血漿樣品，按“血漿樣品預(yù)處理方法”項下同法試驗，每一濃度進(jìn)行雙樣本分析，制備AAAA的標(biāo)準(zhǔn)曲線。以待測物濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)X，待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值（AS/Ai）為縱坐標(biāo)Y，用加權(quán)最小二乘法[3]（權(quán)重系數(shù)：1/X2）進(jìn)行線性回歸運算，求得的線性回歸方程即為標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，用SPSS16.0軟件計算三條標(biāo)準(zhǔn)曲線的差異。結(jié)果表明，AAAA在20.0 ~ 7000.0 ng/mL

37、l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。三天方法學(xué)確證的標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見表4，方法學(xué)確證的典型曲線見圖3。 表4 標(biāo)準(zhǔn)曲線（方法確證） 測 日 線性 血漿樣品濃度（ng/mL） 20.0 40.0 100.0 300.0 1000.0 3000.0 7000.0 第一天 Y =6.865 10-4 X -8.12010-4 R = 0.9967 19.5 42.4 95.3 318.1 1117.8 2962.5 6363.0 20.2 39.5 97.4 312.5 1095.6 2818.2 6260.4 第二天 Y = 6.845 10-4

38、X+1.17010-4 R = 0.9945 22.0 37.8 93.9 311.2 1124.5 2845.8 6206.2 19.6 36.4 96.4 307.9 1115.8 3376.2 6258.9 第三天 Y = 6.938 10-4 X +1.71310-3 R = 0.9944 20.4 42.3 99.2 318.6 1147.5 2804.9 6115.0 19.3 37.9 99.8 323.9 1134.0 2766.9 6056.0 Mean 20.2 39.4 97.0 315.4 1

39、122.5 2929.1 6209.9 SD 1.0 2.5 2.3 5.8 17.6 228.9 110.5 日內(nèi)RSD（%） 5.5 5.7 1.4 1.1 1.0 7.7 0.9 日間RSD（%） 3.8 7.3 3.3 2.6 2.2 8.0 2.6 RE（%） 10.0 -9.0 -6.1 8.0 14.7 12.5 -13.5 Y =6.865 10-4 X -8.12010-4 R = 0.9967 圖3 HPLC-MS法測定血漿中AAAA的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線（方法學(xué)確

40、證第一天） 13.5.3 定量下限 取空白血漿100 μL，加入AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液（100.0 ng/mL）20 μL，配制成血漿中AAAA濃度為20.0 ng/mL的血漿樣品（5樣本），按“血漿樣品預(yù)處理方法”項下同法試驗，并根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計算每一樣本測得濃度。結(jié)果表明，本試驗所建立的HPLC-MS法測定血漿中AAAA的定量下限可達(dá)20.0 ng/mL。詳見表5。 表5 AAAA的定量下限 血漿樣品濃度（ng/mL） RE % RSD % LLOQ1 17.9 -10.4 8.2 LLOQ2 20.7 3.6 LLOQ3 19.3 -3.4 L

41、LOQ4 21.9 9.4 LLOQ5 21.6 8.2 13.5.4方法準(zhǔn)確度與精密度 取空白血漿100 μL，分別加入不同濃度的AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，配制成相當(dāng)于血漿中AAAA濃度為50.0、500.0和6000.0 ng/mL的血漿樣品（每濃度5樣本），按“血漿樣品預(yù)處理方法”項下同法試驗，并根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計算血漿樣品的濃度，用SPSS16.0軟件，求得方法的準(zhǔn)確度與精密度。結(jié)果表明，本試驗所建立的HPLC-MS法測定的日內(nèi)和日間精密度的RSD%達(dá)到試驗要求[1]。詳見表6。 表6 AAAA準(zhǔn)確度與精密度 run 血漿樣品濃度（ng/mL） 50.0 5

42、00.0 6000.0 1 53.4 468.3 6293.6 48.0 501.8 5928.2 53.8 483.7 5759.6 46.5 507.4 6221.1 54.7 511.4 6545.8 2 52.7 504.1 6262.0 43.9 508.7 6322.8 53.1 523.2 6644.9 47.8 491.2 5844.0 48.5 490.3 5828.3 3 53.0 465.3 6238.4 46.1 460.1 5505.9 47.1 521.3 6189.9 53.4

43、 526.0 5761.7 46.6 511.3 6192.7 樣品數(shù) 15 15 15 Mean 49.9 498.3 6102.6 SD 3.6 21.2 317.5 RE（%） -12.3 -8.0 10.7 日內(nèi)RSD（%） 7.5 4.5 5.4 日間RSD（%） 5.3 2.1 4.0 13.5.5 重復(fù)進(jìn)樣考察 本試驗考察了在相同試驗條件下重復(fù)進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和精密度。按“方法準(zhǔn)確度與精密度”項下的方法配制低、中、高三濃度的QC樣品（各1個樣本），每個樣品重復(fù)進(jìn)樣5次，計算血漿樣品的濃度，求得重復(fù)進(jìn)樣的準(zhǔn)確

44、度和精密度。結(jié)果表明，本試驗所建立的HPLC-MS法重復(fù)進(jìn)樣的準(zhǔn)確度和精密度達(dá)到試驗要求。詳見表7。 表7 重復(fù)進(jìn)樣考察結(jié)果 血漿樣品濃度（ng/mL） 50.0 500.0 6000.0 48.1 489.4 5451.4 47.8 488.1 5463.1 49.7 494.1 5453.0 47.3 493.1 5473.2 47.4 487.0 5485.2 樣品數(shù) 5 5 5 Mean 48.1 490.3 5465.2 SD 1.0 3.1 14.2

45、 RE（%） -5.4 -2.6 -9.1 RSD（%） 2.0 0.6 0.3 13.5.6 殘留考察 取空白血漿100 L，除不加內(nèi)標(biāo)溶液外，其余按“血漿樣品預(yù)處理”項下操作，制得空白血漿樣品（6樣本分析）；另取空白血漿100 μL，加入AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液（35000.0 ng/mL）20 μL，配制成血漿中AAAA濃度為7000.0 ng/mL的血漿樣品（4樣本分析），按“血漿樣品預(yù)處理方法”項下操作，于方法學(xué)確證第一天將含藥血漿樣品（濃度7000.0 ng/mL，6樣本，其中兩樣本為標(biāo)準(zhǔn)曲線Sd7）和空白血漿樣品（6樣本）交替進(jìn)樣。結(jié)果表明，本試驗所建立的HP

46、LC-MS法AAAA和內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)）均無殘留。 13.5.7 提取回收率 取空白血漿100 L，按“血漿樣品預(yù)處理”項下的方法配制低、中、高三個濃度（AAAA濃度分別為50.0，500.0，6000.0 ng/mL）的樣品，每一濃度進(jìn)行5樣本分析；同時另取空白血漿100 L，除不加AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液外，按“血漿樣品處理”項下操作，向獲得的有機相中加入相應(yīng)濃度的AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液20 L和內(nèi)標(biāo)溶液50 L，渦旋混合，空氣流下吹干，以2mL流動相溶解后進(jìn)樣分析，獲得相應(yīng)峰面積（5次測定的平均值）。以每一濃度兩種處理方法的峰面積比值計算提取回收率。結(jié)果表明，AAAA血漿樣品的提取回收率符合有

47、關(guān)規(guī)定[1]，內(nèi)標(biāo)回收率穩(wěn)定。詳見表8。 表8 血漿樣品中AAAA和內(nèi)標(biāo)物（內(nèi)標(biāo)）的提取回收率 回收率（%） AAAA的血漿濃度(ng/mL) 內(nèi)標(biāo)血漿濃度（ng/mL） 50.0 500.0 6000.0 40000.0 82.2 89.4 82.1 75.0 80.2 86.5 84.1 87.9 89.6 96.9 96.1 81.1 89.2 83.1 83.7 89.8 88.7 81.2 84.4 88.0 樣品數(shù) 5 5 5 5 Mean（%） 86.0 87.4 86

48、.1 84.4 SD（%） 4.4 6.2 5.7 6.2 RSD（%） 5.2 7.0 6.6 7.3 13.5.8基質(zhì)效應(yīng) 本試驗考察了在相同試驗條件下的基質(zhì)效應(yīng)。取空白血漿100 L，除不加AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液外，按“血漿樣品處理”項下操作，向獲得的有機相中加入低、中、高三種濃度的AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液20 L和內(nèi)標(biāo)溶液50 L，渦旋混合，空氣流下吹干，以2mL流動相溶解后進(jìn)樣分析，獲得相應(yīng)峰面積，每一濃度進(jìn)行5樣本分析；同時另取相應(yīng)濃度的AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液20 L和內(nèi)標(biāo)溶液50 L，渦旋混合，空氣流下吹干，以2mL流動相溶解后進(jìn)樣分析，獲得相應(yīng)峰面積（5次

49、測定的平均值）。以每一濃度兩種處理方法的峰面積比值計算基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果表明，AAAA（低、中、高濃度）和內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)基質(zhì)效應(yīng)考察結(jié)果均在85%-115%之間，AAAA和內(nèi)標(biāo)內(nèi)標(biāo)在上述試驗條件下均無基質(zhì)效應(yīng)。詳見表9。 表9 基質(zhì)效應(yīng)考察結(jié)果 基質(zhì)效應(yīng)（%） AAAA的血漿濃度(ng/mL) 內(nèi)標(biāo)血漿濃度（ng/mL） 50.0 500.0 6000.0 40000.0 104.1 108.9 102.4 106.3 135.7 103.0 92.9 111.6 118.5 105.8 102.2 82.7 107.

50、9 140.2 95.2 111.5 114.7 103.6 97.0 113.4 樣品數(shù) 5 5 5 5 Mean（%） 114.7 112.3 97.9 105.1 SD（%） 12.9 15.8 4.2 12.8 RSD（%） 11.3 14.1 4.3 12.2 13.5.9 穩(wěn)定性試驗 本試驗考察了血漿樣品預(yù)處理前室溫放置24h的穩(wěn)定性、樣品處理后在自動進(jìn)樣器中（4℃）放置6h的穩(wěn)定性、血漿樣品經(jīng)歷三次冷凍-解凍循環(huán)的穩(wěn)定性、血漿樣品于冰箱-20℃保存45天的長期穩(wěn)定性及儲備液的穩(wěn)定性，以試驗樣品的測得值與理論值比

51、較所得結(jié)果考察樣品的穩(wěn)定性。 取空白血漿100 μL，分別加入不同濃度的AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，配制成血漿中AAAA濃度為50.0 ,500.0和6000.0 ng/mL的血漿樣品（每濃度5樣本），在室溫下放置24h后，按“血漿樣品處理方法”項下同法試驗。結(jié)果表明，AAAA血漿樣品室溫放置24h穩(wěn)定。詳見表10-1。 取空白血漿100 μL，分別加入不同濃度的AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，配制成相當(dāng)于血漿中AAAA濃度為50.0 , 500.0和6000.0 ng/mL的血漿樣品（每濃度5樣本），按“血漿樣品預(yù)處理方法”項下同法試驗，在自動進(jìn)樣器中（4℃）放置6h后測定。結(jié)果表明，AAA

52、A血漿樣品預(yù)處理后在進(jìn)樣器中（4℃）放置6h穩(wěn)定。詳見表10-2。 表10-1AAAA血漿樣品室溫放置24h穩(wěn)定性考察結(jié)果 AAAA的血漿濃度(ng/mL) 50.0 500.0 6000.0 45.2 488.6 6263.7 51.5 480.0 6195.2 43.6 468.9 5883.3 47.8 466.0 5880.3 44.3 499.3 5845.3 樣品數(shù) 5 5 5 Mean 46.5 480.6 6013.6 RE（%） -12.8 -6.8 4.4 RSD（%） 6.

53、9 2.9 3.3 表10-2 AAAA血漿樣品預(yù)處理后在自動進(jìn)樣器中（4℃）放置6h的穩(wěn)定性 　 AAAA的血漿濃度(ng/mL) 50.0 500.0 6000.0 53.0 454.1 5428.7 46.5 494.9 5473.0 50.3 461.6 5922.7 55.7 461.9 6257.5 　 54.6 455.7 6266.5 樣品數(shù) 5 5 5 Mean 52.0 465.6 5869.7 RE（%） 11.5 -9.2 -9.5 RSD（%） 7.1 3.6 6.

54、9 取空白血漿100 μL，分別加入不同濃度的AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，配制成相當(dāng)于血漿中AAAA濃度為50.0 , 500.0和6000 .0ng/mL的血漿樣品（每濃度5樣本），在- 20 ℃下冷凍24h，然后在室溫自然解凍。完全解凍后，放回-20 ℃下冷凍不少于12h。第二次在室溫自然解凍，再放回-20 ℃下冷凍不少于12h，第三次在室溫自然解凍后，按“血漿樣品處理方法”項下同法試驗。結(jié)果表明，AAAA血漿樣品經(jīng)過三次冷凍-解凍循環(huán)后穩(wěn)定。詳見表10-3。 表10-3 AAAA血漿樣品經(jīng)過三次冷凍-解凍循環(huán)后的穩(wěn)定性 AAAA的血漿濃度(ng/mL) 50.0 5

55、00.0 6000.0 43.4 453.7 6281.2 44.8 470.2 5484.1 43.6 468.0 5501.8 43.9 475.1 5742.3 48.0 468.7 6364.1 樣品數(shù) 5 5 5 Mean 44.8 467.1 5874.7 RE（%） -13.2 -9.3 -8.6 RSD（%） 4.2 1.7 7.2 取空白血漿100 μL，分別加入不同濃度的AAAA標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL，配制成血漿中AAAA濃度為50.0 , 500.0和6000.0 ng/mL的血漿樣品（

56、每濃度5樣本），于冰箱-20℃保存，45天后按“血漿樣品處理方法”項下同法試驗。結(jié)果表明，于冰箱-20℃保存的AAAA血漿樣品在45天內(nèi)穩(wěn)定。詳見表10-4。 表10-4 AAAA血漿樣品-20℃保存長期穩(wěn)定性考察結(jié)果 AAAA的血漿濃度(ng/mL) 50.0 500.0 6000.0 45.5 514.6 5938.1 56.9 520.5 5746.5 48.6 505.2 5694.6 49.3 523.7 5744.8 56.9 483.9 6159.5 樣品數(shù) 5 5 5 Mean 51.4 509.6

57、 5856.7 RE（%） 13.8 4.7 -5.1 RSD（%） 10.1 3.1 3.3 分別于方法學(xué)驗證前十天和方法學(xué)第一天考察AAAA與內(nèi)標(biāo)溶液4 ℃保存的穩(wěn)定性。于方法學(xué)驗證前十天稱取AAAA對照品約5mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成濃度約0.1 mg/mL的AAAA儲備液Ⅰ；精密量取0.5mL儲備液Ⅰ，置50 mL量瓶中，以甲醇-水（50:50,v/v）稀釋至刻度，搖勻，制得濃度約為1.0μg/mL的AAAA儲備液Ⅱ；以甲醇-水（50:50,v/v）稀釋儲備液Ⅱ，配制供儲備液穩(wěn)定性分析的AAAA標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及樣品1，配制

58、過程如下所示： 表10-5 AAAA標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制（供儲備液穩(wěn)定性分析） 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 稀釋過程 AAAA（ng/mL） Sd5 儲備液Ⅱ， 0.5mL→10mL 50.0 Sd4 儲備液Ⅱ, 0.4mL→10 mL 40.0 Sd3（樣品1） 儲備液Ⅱ， 0.3mL→10 mL 30.0 Sd2 儲備液Ⅱ, 0.2mL→10 mL 20.0 Sd1 儲備液Ⅱ， 0.1mL→10 mL 10.0 將上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別進(jìn)樣，制備供儲備液穩(wěn)定性分析的AAAA標(biāo)準(zhǔn)曲線(1)，方程如下： Y=

59、2.972103X+4.383103 (1) 測定樣品1的峰面積，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(1)計算樣品1的濃度，結(jié)果見表10-7； 稱取內(nèi)標(biāo)對照品約5 mg，精密稱定, 置250 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度約20.0μg/mL的內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)）儲備液Ⅰ；以甲醇-水（50:50,v/v）稀釋儲備液Ⅰ，配制供儲備液穩(wěn)定性分析的內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)）標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及樣品2，配制過程如下所示： 表10-6 內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)）標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制（供儲備液穩(wěn)定性分析） 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 稀釋過程 內(nèi)標(biāo)（ng/mL） Sd5

60、 儲備液Ⅰ， 1.0mL→10mL 2000.0 Sd4 儲備液Ⅰ, 0.8 mL→10 mL 1600.0 Sd3 儲備液Ⅰ， 0.6mL→10 mL 1200.0 樣品2 儲備液Ⅰ， 0.5mL→10 mL 1000.0 Sd2 儲備液Ⅰ, 0.4mL→10 mL 800.0 Sd1 儲備液Ⅰ， 0.2mL→10 mL 400.0 將上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別進(jìn)樣，制備供儲備液穩(wěn)定性分析的內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)）標(biāo)準(zhǔn)曲線 Y=3.051105X+2.240102

61、 (2) 測定樣品2的峰面積，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(2)計算樣品2的濃度，結(jié)果見表10-7； 樣品1，樣品2 于4℃冰箱保存，備用。 于方法學(xué)第一天分別稱取AAAA對照品和內(nèi)標(biāo)對照品，同法配制供儲備液穩(wěn)定性分析的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，分別制備供儲備液穩(wěn)定性分析的AAAA和內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)）標(biāo)準(zhǔn)曲線3,4 Y=2.960103X-4.158103 (3) Y=3.133105X+5.126103

62、 (4) 取十天前配制的樣品1和樣品2，分別進(jìn)樣，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(3), (4)計算各自的濃度；將兩次測得的樣品1和樣品2的濃度分別進(jìn)行獨立樣本t檢驗，結(jié)果表明，AAAA與內(nèi)標(biāo)溶液兩次測得濃度間的差異無統(tǒng)計意義（Sig.> 0.05），AAAA和內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)）溶液在4 ℃保存十天穩(wěn)定。詳見表10-7，10-8。 表10-7 AAAA儲備液穩(wěn)定性考察結(jié)果 AAAA濃度（ng/mL） 樣品1（0天） 樣品1（10天） Mean Sd RSD Sig. (2-tailed)

63、 表10-8 AAAA標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制（供儲備液穩(wěn)定性分析） 內(nèi)標(biāo)（內(nèi)標(biāo)）濃度（μg/mL） 樣品2（0天） 樣品2（10天） Mean Sd RSD Sig. (2-tailed) 13.6 小結(jié) 本試驗建立了HPLC-MS法，測定20名男性健康受試者口服AAAA受試制劑和參比制劑后不同時刻血漿中AAAA的濃度，并進(jìn)行了方法確證。實驗結(jié)果表明，本方法具有準(zhǔn)確性好、靈敏度高等特點，符合有關(guān)要求[1]，可以用于AAAA人體相對生物利用度和生物等效性研究。 14．?dāng)?shù)據(jù)質(zhì)

64、量保證 試驗過程中監(jiān)察員按規(guī)定進(jìn)行監(jiān)察，并及時報告。數(shù)據(jù)錄入時，均由2人以上復(fù)核，采用DAS2.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，以保證數(shù)據(jù)的一致性及準(zhǔn)確性，以下給出的數(shù)據(jù)表均按入選號排序。 15．研究結(jié)果數(shù)據(jù) 15.1受試者血漿樣品的測定和質(zhì)量控制 受試者血漿樣品由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥物臨床試驗機構(gòu)在冷凍條件下提供。樣品測定按“血漿樣品處理”項下操作，每一分析批建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時分析低、中、高多樣本的質(zhì)控樣品，并穿插于受試者血漿樣品測定中。根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線求算受試者血漿樣品濃度和質(zhì)控樣品濃度，質(zhì)控樣品測定結(jié)果的相對偏差在15%之內(nèi)，低濃度點偏差小于20%，最多允許1/3不在同一

65、濃度的質(zhì)控樣品結(jié)果超限，則當(dāng)日數(shù)據(jù)方可接受。 共測試5個分析批樣品，每一分析批標(biāo)準(zhǔn)曲線及質(zhì)控樣品結(jié)果分別見表11和表12。 表11 測定受試者血漿樣品中AAAA濃度時各分析批的標(biāo)準(zhǔn)曲線 分析日期 血藥濃度：20.0，40.0，100.0，300.0，1000.0， 3000.0，7000.0ng/mL 受試者 斜率10-4 截距10-3 相關(guān)系數(shù)（R） 表12 測定受試者血漿樣品AAAA濃度時各分析批的質(zhì)控樣品測試結(jié)果 分析日期 AAAA血藥濃度（ng/m

66、L） 50.0 500.0 6000.0 測得濃度 RE% 測得濃度 RE% 測得濃度 RE% 15.2 色譜圖 詳見附件方法學(xué)確證與100 %受試者樣品測試圖譜。 15.3 AAAA血藥濃度-時間曲線 20名健康受試者口服AAAA分散片受試制劑和AAAA分散片參比制劑后AAAA的血藥濃度-時間曲線圖及均數(shù)對比圖，見圖4~ 7。 圖4 20名受試者口服受試制劑或參比制劑后AAAA的血藥濃度-時間曲線圖 圖5 20名受試者口服AAAA分散片（受試制劑）后AAAA的血藥濃度-時間曲線圖 圖6 20名受試者口服AAAA分散片（參比制劑）后AAAA的血藥