綜合實驗化能異養(yǎng)微生物的分離與純化(實驗要求)

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1、 化能異養(yǎng)微生物的分離與純化(綜合) 安排說明：本實驗要求以實驗小組為單位完成。第8周起，各小組應該下載相關資料，做好預習（器材申報與領用）。 集中實驗時間：11周~13周。 11周：提交實驗材料要求清單一式兩份，一份上交，并根據(jù)清單領取器材。 12周：開展實驗，實驗完成后整理實驗結果，撰寫實驗報告。 13周：完成整個實驗器材歸還。 本次實驗考評占實驗總成績的20%！ 考評內容包括實驗紀律、操作技術、實驗報告。實驗結果組內共用，實驗報告自己寫。 注意：期末實驗課成績=實驗考試（卷面成績、操作各占50%）50%+實驗報告20%+綜合、設計實驗成績20%+平時成績10%）

2、 第一部分：實驗原理及目的要求 [目的要求] 1．掌握細菌、放線菌、酵母菌和霉菌稀釋分離、劃線分離等技術。 2．學習從樣品中分離、純化出所需菌株。 3．學習并掌握平板傾注法和斜面接種技術，了解培養(yǎng)細菌、放線菌、酵母菌及霉菌四大類微生物的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)時間。 4．學習平板菌落計數(shù)法。 [基本原理] 土壤是微生物生活的大本營，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機質豐富的土壤中放線菌數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量

3、多些。本次實驗從土壤中分離細菌、放線菌和霉菌；白面曲(發(fā)面用的引子)或酒曲或果園土中分離酵母菌。 1） 為了分離和確保獲得某種微生物的單菌落，首先要考慮制備不同稀釋度的菌懸液。各類菌的稀釋度因菌源、采集樣品時的季節(jié)、氣溫等條件而異。 2） 其次，應考慮各類微生物的不同特性，避免樣品中各類微生物的相互干擾，通常需要使用不同的培養(yǎng)基，進行富集和選擇培養(yǎng)。如細菌或放線菌在中性或微堿性環(huán)境較多．但細菌比放線菌生長快，分離放線菌時，一般在制備土壤稀釋液時添加10%酚或在分離培養(yǎng)基中加相應的抗生素以抑制細菌和霉菌(如加鏈霉素25-50μg /mL以抑制細菌；添加制霉菌素50μg／mL或多菌靈30μg／

4、mL以抑制霉菌)；酵母菌和霉菌都喜酸性環(huán)境，一般酵母菌只能以糖為碳源，不能直接利用淀粉，酵母菌在pH 5時生長極快。細菌生長適宜的酸堿度為pH7，所以分離酵母菌時只要選擇好適宜的培養(yǎng)基和pH，可降低細菌增殖率，霉菌生長慢，也不干擾酵母菌分離。若分離霉菌，需降低細菌增殖率，一般培養(yǎng)基臨用前須添加滅過菌的乳酸或鏈霉素。為了防止菌絲蔓延干擾菌落計數(shù)，分離霉菌時常在培養(yǎng)基中加入化學抑制劑。 3） 要想獲得某種微生物的純培養(yǎng)，還需提供有利于該微生物生長繁殖的最適培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。四大類微生物的分離培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間見表1。 表1 四大類微生物的分離條件 樣品來源 分離

5、對象 稀釋度 培養(yǎng)基名稱 培養(yǎng)溫度（℃） 培養(yǎng)時間/d 土樣 細菌 10-5，10-6，10-7 牛肉膏蛋白胨 30~36 1~2 土樣 放線菌 10-3，10-4，10-5 高氏1號 28 5~7 土樣 霉菌 10-2，10-3，10-4 馬丁氏培養(yǎng)基 28~30 3~5 面曲或土樣 酵母菌 10-4，10-5，10-5 豆芽汁培養(yǎng)基 28~30 2~3 細菌分離平板 細菌單菌落 牛肉膏蛋白胨 30~37 1~2 注：本實驗的目標在于兩項核心實驗操作技能（按美國微生物學會核心課程實驗操作技能第3條）： 1）無菌操作技術

6、——包括滅菌技術及保持相關器具的無菌狀態(tài)；無菌操作技術；獲得微生物樣本； 2）梯度稀釋技術估算微生物的數(shù)目——正確選擇和使用移液管和移液裝置；正確涂布樣本以準確計數(shù)；估計所需要稀釋的倍數(shù)；根據(jù)平板計數(shù)值推測出起始樣本的CFU或PFU。 第二部分：綜合性實驗——化能異養(yǎng)微生物的分離純化（自主實驗設計與要求） 一、分離四大類微生物（細菌、放線菌、酵母、霉菌），要求每類型微生物各分離到2株菌，純化后以斜面（8支）的形式交驗；計算所采集土壤中的細菌含量（CFU，要求交驗計數(shù)所用的12塊平板）。 二、技術達標 1.培養(yǎng)基的配制：根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需要特點，配制相應的培養(yǎng)基，并進行培養(yǎng)基的

7、驗證。 2.掌握梯度稀釋法、劃線法基本技術，其中劃線法要求每人獨立完成一份。 3.對所分離的菌株其菌落特征的表述（列表）。 4.小組的管理與合作。 三、實驗結果與匯報 1.綜合報告：全組撰寫一份綜合報告。含預方案（主要是器材計劃、時間安排），執(zhí)行記錄，結論以及綜合分析?？砂葱枰孕性O計表格，規(guī)范執(zhí)行、規(guī)范記錄。 報告的寫作，請嚴格按照我院報告的格式要求，并參考網(wǎng)絡課程中“實驗報告互評的評分要求”中的相關要求執(zhí)行。 2.個人實驗報告：每人一份實驗報告，重點報告實驗現(xiàn)象、觀察思考，結果分析，綜合體會等，不涉及方案及實驗原理、步驟等的記錄。 3 實驗匯報，以實驗小組為單位，制作PPT

8、，交流。小組互評，推優(yōu)。 四、實驗安排與完成時間 1. 本周完成方案學習與器材申請，并填寫附表1、2相關內容。（見附錄）本周、下周為集中實驗時間，在實驗課所安排的時間，由實驗老師集中指導。各組也可自行安排實驗時間，在實驗小班科代表的統(tǒng)一安排下，聯(lián)系實驗室開展實驗。 2. 完成時間：十五周前。 本次練習中建議同學們利用實驗室提供的材料，自己練習棉塞的制作。 第三部分 實驗內容（技術要求參考資料） 提示：本次實驗所提供的方案僅供參考。各組在達到目的的情況下，可以自行設計自己的方案，但本方案中所提到的實驗操作細節(jié)，對實驗質量的把握很有幫助，值得關注。 [材料與用品] 1.菌源

9、選定采土地點后，鏟去表土層2～3cm，取3～10cm深層土壤10g，裝入已滅過菌的牛皮紙袋內．封好袋口，并記錄取樣地點、環(huán)境及日期。 土樣采集后應及時分離，凡不能立即分離的樣品，應保存在低溫、干燥條件下，盡量減少其中菌種的變化。從面曲中分離酵母菌,也可用酒曲等替代。 2．培養(yǎng)基 肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（）、馬丁氏培養(yǎng)基、高氏合成一號培養(yǎng)基、豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基(注意：需要制平板和斜面，劃線法所用固體培養(yǎng)基，建議瓊脂濃度為2~2.5%，使平板具有一定的硬度，便于劃線操作) 3．無菌水或無菌生理鹽水 配制生理鹽水．分裝于250mL錐形瓶中，每瓶裝99mL(或95mL分離霉菌用)，每瓶內裝10粒玻

10、璃珠；分裝試管，每管裝約4.5~5mL(不超過試管高度的1/5)。 4．其他試劑與用品 無菌培養(yǎng)皿、無菌移液管、無菌涂棒(刮刀)、稱量紙、藥匙、洗耳球、10％酚溶液。 各組根據(jù)實驗要求，統(tǒng)計后以表格形式申報所需要材料（參考表2） 1 微生物的分離及純化培養(yǎng) 微生物的分離與純化常用技術主要包括稀釋分離法、劃線分離法。稀釋分離法將樣液進行梯度稀釋后，結合所需要分離的菌種特點，選擇一定稀釋度的樣液進行接種培養(yǎng)，或涂布法或混菌法，對已經(jīng)稀釋的樣液中的菌體進行培養(yǎng)，獲得菌落純的細胞。劃線法可以直接獲得單菌落。 *稀釋分離法 通過稀釋，結合平板分離的純化菌株的方法有傾注法和涂布法兩種。本

11、次實驗分離細菌、放線菌、霉菌時采用傾注法，酵母菌分離采用涂布法。 以下以細菌及放線菌的分離為例說明技術要點： 1)細菌的分離 A 制備土壤稀釋液 ：稱取土樣1 g，在火焰旁加入盛有99mL并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．振蕩10~20min，使土樣中菌體、芽孢或孢子均勻分散，制成10—2稀釋度的土壤稀釋液，然后按10倍稀釋法進行稀釋分離。 具體操作技術要點如下：取4.5 mL無菌水試管6支，按10-2……10-7順序編號，放置在試管架上。取無菌移液管一支，從移液管包裝紙?zhí)? 中間撕口，將包裝紙?zhí)追殖缮稀⑾聝啥?，去除下段包裝紙?zhí)?，在移液管上端管口裝橡皮頭，取出下段移液

12、管紙?zhí)追胖米烂妫杂沂帜粗?、食指、中指拿住移液管卜端的橡皮頭，將吸液端口及移液管外部表面迅速通過火焰2～3次，殺滅撕紙?zhí)讜r可能污染的雜菌，切忌不要用手指去觸摸移液管吸液端口及外部。左手持錐形瓶底，以右手掌及小指、無名指夾住錐形瓶上棉塞，在火焰旁拔出棉塞(棉塞夾在手上，不能亂放在桌上)，將1mL移液管的吸液端伸進振蕩混勻的錐形瓶土壤懸液底部，用手指輕按橡皮頭，在錐形瓶內反復吹吸二次(吹吸時注意第二次液面要高于第一次吹吸的液面)，然后準確吸取0.5mL 10-2土壤稀釋液（吸管插入稀釋液不低于2.5cm反復沖洗10次左右，吸液高于所需要刻度少許，然后提起吸管貼于容器內壁取出所需要體積；靠近液面但不

13、接觸液面的情況下將液體緩慢吹出到第二個容器（第一級稀釋液所用吸管不得接觸第二級稀釋液），右手將棉塞插回錐形瓶上，左手放下錐形瓶，換持一支盛有4.5mL無菌水的試管，依前法在火焰旁拔除試管帽(或棉塞)，將0.5mL 10-2土壤稀釋液注入4.5mL無菌水試管內，制成l0-3的土壤稀釋液，將此移液管通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙?zhí)變?，以備再用。另取一只未用過的無菌移液管在試管內反復吹吸三次，然后取出移液管，并將其通過火焰再插入原來包裝移液管的下段紙?zhí)變?，以備再用。蓋上試管帽。右手持10-3稀釋液試管在左手十敲打20～30次?；靹蛲寥老♂屢?。再從紙?zhí)兹〕鲈瓉淼囊埔汗?，插入稀釋液已很勻的試管內?/p>

14、再吹吸三次，然后準確吸出0.5mL 10-3的稀釋液置于第二支裝有4.5 mL無菌水試管中，制成10-4土壤稀釋液。同法再制成 10-5、10-6、10-7的土壤稀釋液(為避免稀釋過程誤差，進行微生物計數(shù)時，最好每一個稀釋度更換一支移液管)。用完的移液管重新放人紙?zhí)變取? 最后應該統(tǒng)一待滅菌后，再洗刷或將用過的移液管放在廢棄物筒中．用3%-5%來蘇爾浸泡l h后再洗滌。 B 傾注法分離 取無菌培養(yǎng)皿6~9套，分別于培養(yǎng)皿底面按稀釋度編號。稀釋完畢后，可用原來的移液管從菌液濃度最小的10-7土壤稀釋液開始吸取1mL稀釋液，按無菌操作技術加到和應編號的無菌培養(yǎng)皿內。再依同方法分別吸取1m

15、L l0-6、10-5的土壤稀釋液，各加到和應編號為10-6、10-5的無菌培養(yǎng)皿內。將已滅菌的肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基融化，待冷卻至45~50℃左右(醫(yī)學標準的要求是451 ℃)，分別傾入到已盛有I0-5、10-6、10-7土壤稀釋液的無菌培養(yǎng)皿內。 注意：溫度過高易將菌燙死，且皿蓋上冷凝水太多，會影響分離效果；低于45℃培養(yǎng)基易凝固，平板易出現(xiàn)凝塊、高低不平。用左手大拇指將培養(yǎng)皿蓋打開一縫，至瓶口正好伸入，傾入培養(yǎng)基約12~15 mL，將培養(yǎng)皿在桌面上輕輕轉動（標準要求是:以約15cm直徑范圍，順時針方向輕輕移動平皿6次，再以15cm直徑范圍前后移動平皿6次，并重復往返1次……），使稀釋的菌

16、懸液與融化的瓊脂培養(yǎng)基混合均勻．混勻后靜置桌上，待凝。 C 培養(yǎng) 待平板完全冷凝后，將平扳倒置于35—37℃恒溫培養(yǎng)箱中，倒置培養(yǎng)24～48h觀察結果。 (2)放線菌、酵母的分離 A 制備土壤稀釋液 稱取土樣l g，加入盛有99mL并裝有玻璃珠的無菌水或無菌生理鹽水錐形瓶中．并加人10滴10％酚溶液抑制細菌生長（也可用l％的重鉻酸鉀溶液代替10%酚溶液．效果更好)。振蕩后靜置5min，即成10-2土壤稀釋液。 B1 傾注法 按前法將土壤稀釋液分別稀釋為10-3、10-4、10-5三個稀釋度，然后用無菌移液管依次分別吸取lmL 10-5、l0-4、10-3土壤稀釋液于

17、對應編號的無菌培養(yǎng)皿內，用高氏合成1號培養(yǎng)基依前法傾倒平板，每個稀釋度做2～3個平行培養(yǎng)皿。 酵母分離時可選擇面曲溶解在生理鹽水內，振蕩20min，即成10-2的面曲稀釋液。若選用果園土樣分離酵母，也依前法稱取土樣，制成10-2壤稀釋液。 B2 涂布法 依前法向無菌培養(yǎng)皿中傾倒已融化并冷卻至45-50℃的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基，待平板冷凝后，用無菌移液管分別吸取上述l0-6、l0-5、10-4三個稀釋度菌懸液0.1mL，依次滴加于對應編號已制備好的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基平板上。右手持無菌玻璃涂棒，左手拿培養(yǎng)皿，并用拇指將皿蓋打開一縫，在火焰旁右手持玻璃涂棒于培養(yǎng)皿平板表面將菌液自平板中央均

18、勻向四周涂布擴散，切忌用力過猛將菌液直接推向平板邊緣或將培養(yǎng)基劃破。 C 培養(yǎng) 接種后，將平板倒置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2～3 d觀察酵母培養(yǎng)結果，5~7d觀察放線菌培養(yǎng)結果。 1.2劃線分離法 菌種被其他雜菌污染時或混合菌懸液常用劃線法進行純種分離。此法將蘸有混合菌懸液（10-2）的接種環(huán)在平板表面多方向連續(xù)劃線，使混雜的微生物細胞在平板表面分散，經(jīng)培養(yǎng)得到分散成由單個微生物細胞繁殖而成的菌落，從而達到純化目的。 平板制作方法如前所述。劃線分離的培養(yǎng)基必須事先傾倒好，需充分冷凝待平板稍于后方可使用；為便于劃線，一般培養(yǎng)基不宜太薄，每皿約傾倒20mL培養(yǎng)基（較之一般培養(yǎng)

19、數(shù)量稍多），培養(yǎng)基應厚薄均勻，平板表面光滑。同時，可以增加瓊脂的用量到2~2.5%。有必要時，應該將平板放置于培養(yǎng)箱內24小時左右，除去皿蓋上的水珠，并使平板的表面干燥。 劃線分離主要有連續(xù)劃線法和分區(qū)劃線法兩種。 (1)連續(xù)劃線法 連續(xù)劃線法適用于菌濃度較低的樣品的分離。方法是從平板邊緣一點開始，連續(xù)作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當中不需灼燒接種環(huán)上的菌。以無菌操作用接種環(huán)直接取平板上待分離純化的菌落。將菌種點種在平板邊緣一處，取出接種，燒去多余菌體。將接種環(huán)再次通過稍打開皿蓋的縫隙伸入平板，在平板邊緣空白處接觸一下使接種環(huán)冷卻．然后從接種有菌的部位在平板上自左向右輕輕劃線。

20、劃線時平板面與接種環(huán)面成30～40的角度，以手腕力量在平板表面輕巧滑動劃線。接種環(huán)不要嵌入培養(yǎng)基內劃破培養(yǎng)基，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊)。劃線完畢，關上皿蓋。灼燒接種環(huán)，待冷卻后放置接種架上。培養(yǎng)皿倒置于適溫的恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)(可以免培養(yǎng)過程中皿蓋冷凝水滴下，重新混亂巳分離的菌落)。 培養(yǎng)后在劃線平板上觀察沿劃線處長出的菌落形態(tài)，涂片鏡檢為純種后再接種斜面。 (2)分區(qū)劃線法 平板分四區(qū)，故又稱四分區(qū)劃線法，適用于菌濃度較高的樣品的分離。劃線時每次將平板轉動60~70劃線，每換一次角度，應將接種環(huán)上的菌燒滅后，再在上次劃線末尾處繼續(xù)劃線。取菌、

21、接種、培養(yǎng)方法與連續(xù)劃線法相似。分區(qū)劃線法劃線分離的平板分4個區(qū)，其中第四區(qū)是單菌落的主要分布區(qū)，故其劃線面積應最大。為防止第四區(qū)內劃線與l、2、3區(qū)線條和接觸，應使4區(qū)線條與l區(qū)線條和平行，這樣區(qū)與區(qū)間線條夾角最好保持120左右。先將接種環(huán)沾取少量菌在平板1區(qū)劃3～5條平行線，取出接種環(huán)，左手關上皿蓋．將平板轉動60～70，右手把接種環(huán)上多余菌體燒滅，將燒紅的接種環(huán)在平板邊緣冷卻，再按以上方法以1區(qū)劃線的菌體為菌源，由1區(qū)向2區(qū)作第二次早行劃線。第二次劃線完畢，同時再把平皿轉動約60~70，同樣依次劃線。劃線完畢，灼燒接種環(huán)，關上皿蓋，同上法培養(yǎng)，在劃線區(qū)觀察單菌落。 本次實驗可在分離細菌

22、的平板上選取單菌落。于肉膏蛋白胨平板上再次劃線分離，使菌進一步純化。劃線接種后的平板，倒置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結果。 酵母及霉菌的分離方法基本步驟同上，但注意細菌、放線菌、霉菌時可采用傾注法，酵母菌分離采用涂布法。 2微生物菌落計數(shù)(平板菌落計數(shù)法，細菌) 說明：這一部分的內容，可以結合1中的內容一并完成。 含菌樣品的微生物經(jīng)稀釋分離培養(yǎng)后，每一個活菌細胞可以在平板上繁殖形成一個肉眼可見的菌落，根據(jù)平板上菌落的數(shù)目，推算出每克含菌樣品中所含的活菌總數(shù)。每克菌樣品中微生物的活細胞數(shù)＝(同一稀釋度的3個平板上菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù))/含菌樣品克數(shù)。 一般由三個稀釋度計算

23、出的每克含菌樣品中的總活菌數(shù)和同一稀釋度出現(xiàn)的總活菌數(shù)均應很接近，不同稀釋度平板上出現(xiàn)的菌落數(shù)應呈規(guī)律性地減少。如相差較大，表示操作不精確。菌落計數(shù)法要求計數(shù)平板中的菌落數(shù)以50~300為準，通常以第二個稀釋度的平板上出現(xiàn)50個左右菌落為好。 3其它要求完成的內容 3.1平板菌落形態(tài)及個體形態(tài)觀察 從不同平板上選擇不同類型菌落用肉眼觀察，區(qū)分細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的菌落形態(tài)特征; 用接種環(huán)試挑菌，看其與基質結合緊密程度; 用接種環(huán)挑取不同菌落制片，在顯微鏡下進行個體形態(tài)觀察; 記錄所分離的含菌樣品中明顯不同的各類菌株的主要菌落特征和細胞形態(tài)。 3.2分離純化菌株轉接斜

24、面(斜面接種) 在分離細菌、放線菌，酵母菌和霉菌的不同平板上選擇分離效果較好，認為已經(jīng)純化的菌落各挑選一個用接種環(huán)接種斜面，操作時注意左手同時拿住平板與斜面試管，單人完成從平板至斜面的轉接。 將細菌接種于肉膏蛋白胨斜面，放線菌接種于高氏1號斜面，酵母菌和霉菌接種于豆芽汁葡萄糖斜面上。 貼好標簽，在各自適宜的溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)后觀察是否為純種，記錄斜面培養(yǎng)條件及菌苔特征。 交驗后，值得保存的菌株置冰箱保藏，其余滅菌后，將器皿清洗交還實驗室。 [實驗報告] 1. 簡述分離微生物純種的原則及列出分離操作過程的關鍵無菌操作技術。 2. 將記錄四大類微生物的分離方法及培養(yǎng)條件填入

25、表中（參考表1，注意標明表序號,表格的說明，下同）。 3. 將你所分離的微生物平板菌落計數(shù)結果填入表中。 4. 將你所分離樣品中單菌落菌株的菌落培養(yǎng)特征與鏡檢形態(tài)填入表中。 5. 將斜面培養(yǎng)條件及菌苔特征(包括純化結果是否上交保藏)填入表中。 [思考題] 1. 使用傾注法進行稀釋分離時．為什么要將已融化的瓊脂培養(yǎng)基冷卻到45～50℃左右才能傾入到裝有菌液的培養(yǎng)皿內? 2. 為什么對細菌、放線菌和霉菌的稀釋分離采用傾注法，而對酵母菌的稀釋分離采用涂布法? 3. 劃線分離時為什么每次都要將接種環(huán)上多余的菌體燒掉? 劃線時為何不能重疊? 4. 在恒溫箱中培養(yǎng)微生物時為何培養(yǎng)皿均需

26、倒置? 5. 分離某類微生物時培養(yǎng)皿中出現(xiàn)其他類微生物，請說明原因。應該如何進一步分離和純化；經(jīng)過—次分離的菌種是否皆為純種，若不純，應采用哪種分離方法最合適? 6. 根據(jù)哪些菌落特征可區(qū)分細菌、放線菌、酵母菌與霉菌（可參考周德慶版教材）?它們的細胞結構表現(xiàn)在菌落形態(tài)上有什么聯(lián)系？ [實驗討論] 附：表格示例 表X 分離獲得的菌株特征記錄表 分離日期 地點 分離培養(yǎng)基 菌株編號 菌落特征 鏡檢形態(tài) 說明 表X平均每克樣品所含微生物數(shù) 培養(yǎng)皿號 菌落數(shù) 每克樣品

27、所含菌數(shù) 表X四大類微生物的斜面培養(yǎng)條件及菌苔特征 生科院 2014年秋微生物學綜合\設計實驗實驗器材領用申請表 器材名稱 數(shù)量 規(guī)格 說明(領用依據(jù)) 備注 器材儲置 小組長 tel: 教師確認 附表2 生科院 2014年秋微生物學綜合\設計實驗 實驗小組實驗安排時間分布情況表 時間 第 組 第 組 第 組 第 組 第 組 第 組 星期一 器材儲置地（門號、柜別） 說明 本表格由各班科代表組織填寫,各組填寫時應寫明實驗內容，一般應按計劃進行實驗。在實驗中應管理好所領器材，并于實驗完成后交還實驗室。 班級 實驗小班