胡蘿卜素含量的測(cè)定.ppt

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高效液相色譜法測(cè)定β—胡蘿卜素含量,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)儀器材料四、實(shí)驗(yàn)操作步驟五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果六、實(shí)驗(yàn)思考題,實(shí)驗(yàn)指導(dǎo),,,,1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、理解高效液相色譜法的目的和意義；2、理解和掌握高效液相色譜法的原理和方法；3、掌握高效液相色譜儀的操作。,,,,2、實(shí)驗(yàn)原理,高效液相色譜儀的組成與工作主要流程如下圖所示：,,,,β-胡蘿卜素含量測(cè)定原理β-胡蘿卜素為脂溶性維生素A的前體，存在于各種動(dòng)植物體內(nèi)，可以直接用有機(jī)溶劑提取后進(jìn)行檢測(cè)，然后利用反相色譜法分析。,,,,3、.實(shí)驗(yàn)儀器和材料,,,,,儀器：高效液相色譜儀紫外檢測(cè)器等。試劑材料：β-胡蘿卜素；乙酸乙酯；正己烷；色譜甲醇；新鮮胡蘿卜。,4、實(shí)驗(yàn)操作步驟：,（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：精確稱(chēng)取100mg的含量為30%的β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品用乙酸乙酯溶解定容到100mL的棕色容量瓶中。進(jìn)樣時(shí)取1ml，稀釋定容到100ml。,（2）樣品的制備：取樣品，搗碎成漿狀，稱(chēng)取10g，加甲醇、正己烷各10ml研磨。過(guò)濾后，濾液以及用乙酸乙酯洗滌渣的濾液一并接收在三角瓶中，提取液放入100ml棕色容量瓶中，乙酸乙酯定容到100ml。,,,,色譜條件,色譜柱：C18柱；流動(dòng)相：甲醇；流速：1.5ml/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：440nm；進(jìn)樣量：20微升。樣品進(jìn)樣前需要用0.45微米的濾膜過(guò)濾，裝入進(jìn)樣瓶中。,5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和計(jì)算,HPLC外標(biāo)法定量式中m：10g(mL)樣品中β-胡蘿卜素含量（mg）；m1：標(biāo)樣進(jìn)樣體積中β-胡蘿卜素含量（mg）；m2：樣品稱(chēng)樣質(zhì)量（g或mL）；A1：標(biāo)樣峰面積值；A2：樣品峰面積；V1：樣品進(jìn)樣質(zhì)量（μL）；V2：樣品定容體積（mL）。,,,,實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng),1、樣品的預(yù)處理；2、流動(dòng)相的過(guò)濾脫氣處理；3、色譜條件的選擇。,思考題：,1、高效液相色譜儀的組成與工作主要流程？2、高效液相色譜的特點(diǎn)？3、進(jìn)行高效液相色譜儀檢測(cè)β-胡蘿卜素時(shí)要對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行哪些預(yù)處理？4、色譜圖中β-胡蘿卜素吸收峰峰高、峰面積與樣品中β-胡蘿卜素濃度和純度有何關(guān)系？,