實驗一 紅細(xì)胞計數(shù) 一、實驗?zāi)康模?掌握紅細(xì)胞計數(shù)原理及技術(shù) 二

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1、 實驗一 紅細(xì)胞計數(shù) 一、實驗?zāi)康模? 掌握紅細(xì)胞計數(shù)原理及技術(shù)。 二、實驗原理： 用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)，充入計數(shù)池中，于顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，經(jīng)過換算示得每升血液內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。 三、實驗器材及試劑： 顯微鏡、血紅蛋白吸管、計數(shù)板、蓋玻片、生理鹽水。 四、實驗操作： 1、取試管1支，加稀釋液3.98ml或1.99ml。 2、用清潔干燥的微量吸管準(zhǔn)確吸取末梢血10微升。 3、擦去管尖外部余血、輕輕注入紅細(xì)胞稀釋液底部，再吸取上層稀釋液清洗吸管2-3次，立即搖勻。 4、將計數(shù)池與蓋玻片用軟布料擦凈，將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上。 5、用吸管吸取混勻的紅細(xì)胞

2、懸液，充入計數(shù)池中。 6、靜止2-3分鐘，待經(jīng)紅細(xì)胞下沉后，用高倍鏡或低倍鏡計數(shù)中央大方格內(nèi)四角和正中五個中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。 五、計算 N(五個中方格內(nèi)RBC數(shù))×5×10×106×200=N×1012個/升 ×5：表示5個中方格內(nèi)RBC數(shù)換算為1個大方格內(nèi)RBC數(shù) × 10：1個大方格容積、0.1ul、換算為1ul內(nèi)RBC數(shù) × 106：1ul換算為1升內(nèi)紅細(xì)胞數(shù) × 200：稀釋倍數(shù) 六、正常參考值 正常參考值： 成年男性：4.00-5.50×1012/升 成年女性：3.50-5.00×1012/升 新生兒： 6.00-7.00×1012/升 實驗二

3、血紅蛋白測定 一、實驗?zāi)康模? 掌握氰化高鐵血紅蛋白比色法原理及技術(shù)。 二、實驗原理： 血液在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中溶血后，除SHb外各種血紅蛋白可被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，再與CNˉ結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋（HicN）。 HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的條件下，毫摩爾消光系數(shù)為44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根據(jù)標(biāo)本的吸光度，即求得血紅蛋白濃度。 三、實驗操作： 1、取指血20ul，加到5ml血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中，混勻，靜止5分鐘。 2、用分光光度計比色，波長540nm，以蒸餾水或空白轉(zhuǎn)化液調(diào)零，測定吸光度。 3、用血紅蛋白濃度為5

4、0g/L、100g/L、150g/L、200g/L在721型分光光度計上測定吸光度分別為0.13，0.27，0.405，0.54. 四、計算:血紅蛋白（g/L）=測定管吸光度×367.7 正常參考值： 成年男性：120-160g/L 成年女性：110-150g/L 新生兒： 170-220g/L 實驗三 白細(xì)胞計數(shù) 一、實驗?zāi)康模? 掌握白細(xì)胞計數(shù)顯微鏡計數(shù)法原理及技術(shù)。 二、實驗原理： 用稀醋酸液將血液稀釋并破壞紅細(xì)胞，混勻后充入計數(shù)池中，于顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)過換算求得每升血液內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。 三、實驗器材及試劑： 顯微鏡、微量吸管、計數(shù)板、蓋

5、玻片、白細(xì)胞稀釋液。 四、實驗操作： 1、取試管1支，加白細(xì)胞稀釋液0.38ml。 2、用清潔干燥的微量吸管準(zhǔn)確吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。 3、擦去管尖外部余血、輕輕注入稀釋液底部，再吸取上清液清洗3次，搖勻。 4、將計數(shù)板與蓋玻片用軟布擦凈，將蓋玻片覆蓋于計數(shù)池上，再用微量吸管吸取懸液，充入計數(shù)池與蓋玻片間的細(xì)縫隙中，靜止2-3分鐘，待白細(xì)胞下沉。 5、用低倍鏡計數(shù)四角的四個大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。 五、計算 (四個大方格內(nèi)WBC數(shù)/4)×10×20× 106 = WBC數(shù)/升 六、正常參考值 正常參考值： 成 人：（4-10）×109/升 新生兒：（15-

6、20）×109/升 6月-2歲：（11-12）×109/升 實驗室四 白細(xì)胞分類計數(shù) 一、實驗?zāi)康模? 掌握白細(xì)胞分類計數(shù)、原理及技術(shù)。 二、實驗原理： 把血液制成細(xì)胞分布均勻的薄膜涂片，經(jīng)wright染色后，顯微鏡下觀察，根據(jù)白細(xì)胞形態(tài)特點逐個分類計數(shù)。得出各種白細(xì)胞的相對比值，并注意觀察其形態(tài)和質(zhì)量的變化。 三、實驗器材及試劑： 顯微鏡、染色缸和架，載玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。 四、實驗操作： 1、取末梢血1滴。置于載玻片的一端，以邊緣平滑的推片制成血涂片，空氣干燥。 2、用蠟筆在血膜兩端劃線，以防染液溢出，然后將血片放于染色架上。 3、先加瑞氏染液數(shù)滴，

7、使其覆蓋整個血膜，固定染色細(xì)胞0.5-1分鐘。 4、按1：1或1：2加緩沖液與染料混勻，染色10分鐘左右。 5、在血膜染10分鐘后，用緩沖液或接近中性的水沖去洗液，待自然干燥或濾紙吸干后，用鏡油觀察。 五、計數(shù)方法： 1、先用低倍鏡觀察血片染色情況，白細(xì)胞多少和細(xì)胞分布情況。 2、選擇血涂片的體尾交界處，染色良好的區(qū)域，在油鏡下計數(shù)100-200個白細(xì)胞，按其形態(tài)特征進(jìn)行分類計數(shù)，求出各自白細(xì)胞所占數(shù)值（百分率）。 3、白細(xì)胞分類計數(shù)方法很多，常用的有，完全記錄法、半記錄法、分類計數(shù)器計數(shù)法。 4、每個病人應(yīng)分類白細(xì)胞數(shù)，視白細(xì)胞總數(shù)多少而定。 5、各類細(xì)胞所占的百分率乘以白細(xì)

8、胞總數(shù)/升，既得每升血液中各類白細(xì)胞的濃度。 實驗五 血小板計數(shù) 一、實驗?zāi)康模? 掌握血小板計數(shù)原理及技術(shù)。 二、實驗原理： 尿素液能溶解紅細(xì)胞及白細(xì)胞而保存完整形態(tài)的血小板，經(jīng)稀釋后在血細(xì)胞計數(shù)池內(nèi)直接計數(shù)以求得每升容積血液內(nèi)的血小板數(shù)。 三、實驗操作： 1、取試管1支，加血小板稀釋液0.38ml。 2、先讓手指溫暖充血，皮膚消毒待干后深刺使血液流出擦去剛出現(xiàn)的少量血。 3、用微量吸管迅速準(zhǔn)確地吸取自然流出的第一滴血液20微升，取血時避免產(chǎn)生氣泡或多次上下吹吸，取好后立即將血輕輕注入已盛稀釋液的試管底部，吸上清液漱洗吸管三次，輕輕混勻。 4、擦凈并放好計數(shù)板和蓋玻片

9、，將試管輕輕震蕩1分鐘，用吸管吸懸液一滴，注入計數(shù)池，避免產(chǎn)生氣泡或溢出，放置10-15分鐘，待血小板下沉。 5、先用低倍鏡找到中央大方格，換高倍鏡計數(shù)中央大方格內(nèi)的血小板數(shù)，各中格內(nèi)的血小板差異不得超過10個，如每中格內(nèi)血小板數(shù)小于1個時，應(yīng)將全大格數(shù)完或另滴計數(shù)板，再數(shù)一大格作對照。 四、計算 五個中方格內(nèi)所得的血小板數(shù)× 109 /L 五、參考值 正常參考值： 100～300×109/L 實驗六 尿沉渣定性檢查 一、實驗操作： 1、取新鮮尿液10ml于試管內(nèi)1500r/min5分鐘。 2、待離心機(jī)停后，取出離心管，棄去上清液。留下 0.2ml，輕輕離心使尿沉渣有形

10、成分混勻。 3、取沉淀于玻片上鏡檢。 二、結(jié)果判斷： 用10×10倍，觀察其中有形成分管型，10×40倍觀察細(xì)胞成分和計數(shù)，觀察10個視野管型計數(shù)20個視野。 參考值： 1、細(xì)胞成分：最低-最高值/HP RBL 0-3/HP WBL 0-5個/HP 2、管型（透明）：平均值/LP 3、尿結(jié)晶和鹽類數(shù)量以每一高倍鏡視野（＋）（ 2＋ ）（ 3＋ ）報告 三、注意事項： 1、清晨空腹第一次尿應(yīng)在1h內(nèi)送檢 2、準(zhǔn)備干凈，干燥尿杯，留取中段尿，尿液細(xì)胞及管型的計數(shù)。Addis 1h尿沉渣計數(shù)。 四、標(biāo)本收集： 患者先排尿棄去準(zhǔn)確收集3h尿液于清潔干燥器內(nèi)

11、 （標(biāo)本留取5：30-8：30） 五、實驗操作： 準(zhǔn)備側(cè)量3h尿量，充分混勻取尿液10ml，1500r/min 5分鐘，用吸管吸取上層尿液9ml留取1ml，吸取混勻尿液1滴注入計數(shù)盤中，cal計數(shù)10大方格，管型20個大方格。 六、計算： 1小時細(xì)胞=10個大方格細(xì)胞總數(shù)×（1000/10）×（3h尿量/3） 1小時Cost計數(shù)=(20個大方格管型數(shù)/2) ×(1000/10)×（3h尿量/3） 式中1000為微升換算成毫升數(shù)，10為尿液濃縮倍數(shù) 七、實驗注意事項： 1、尿液新鮮PH值應(yīng)在6以下。 2、被檢尿SG在1.026以下如<1.016的為低滲尿易破壞cell。 3

12、、尿中有磷酸鹽時應(yīng)加少量冰乙酸，但勿加過多，使cell管型溶解。 實驗八 尿蛋白檢查 一、實驗原理： 加熱可使蛋白質(zhì)變性凝固，加酸可使蛋白質(zhì)接近等電點，促使蛋白質(zhì)沉淀。此外，加酸還可以溶解堿性鹽類沉淀。 二、實驗試劑： 冰乙酸溶液 三、實驗方法： 1、取約10ml新鮮清晰尿于一耐熱大試管內(nèi)。 2、將試管斜置在火焰上煮沸上部尿液。 3、滴加乙酸3-4滴，再煮，沸后立即觀察結(jié)果，如果渾濁或沉淀，提示尿內(nèi)含pr。 實驗結(jié)果判斷：陰性（－）：不渾濁 微量（±）： 輕微渾濁0.1-0.15g/L 弱陽性（＋）：

13、 明顯白霧狀0.2-0.5g/L 陽性（＋ ＋ ）： 明顯渾濁有明顯顆粒0.6-2.0g/L 強陽性（＋ ＋ ＋ ）： 大量絮片狀沉淀渾濁2.0-5.0g/L 最強陽性（＋ ＋ ＋ ＋ ）：出現(xiàn)凝塊并有大量絮片狀沉淀＞5.0g/L 實驗九 尿葡萄糖定性檢查（班氏法） 一、實驗?zāi)康模? 掌握尿葡萄糖定性的班氏法。 二、實驗原理： 葡萄糖或其他還原性糖的醛基在熱堿性溶液中，能將班氏試劑的藍(lán)色硫酸銅還原為黃色的氫氧化銅，進(jìn)而形成紅色氧化亞銅沉淀。 三、實驗器材： 試管架、中試管、滴管、試管夾、酒精燈 四、實驗試劑：班氏試劑

14、五、實驗操作： 1、鑒定班氏試劑質(zhì)量：取試管一支，加入班氏試劑2.0ml，搖動試管徐徐加熱至沸騰，觀察試劑有無顏色及性狀變化，若試劑仍為透明藍(lán)色，可進(jìn)行以下實驗。 2、加尿液：向班氏試劑中加離心后的尿液0.2ml（約4滴），混勻。 3、加熱沸騰：繼續(xù)煮沸1-2min，或置沸水浴5min，自然冷卻。 4、判斷結(jié)果：見下表 Benidict糖定性實驗結(jié)果判定 反應(yīng)現(xiàn)象 報告方式 葡萄糖含量（mmol/L） 藍(lán)色不變 － ＜5.6 藍(lán)色中略帶綠色，但無沉淀 ± 5.6-11.2 綠色，伴少許黃綠色沉淀 ＋ ＜28 較多黃綠色沉淀，以黃為主 ＋ ＋ 28-56 土黃色渾濁，有大量沉淀 ＋ ＋ ＋ 57-112 大量棕紅色或磚紅色沉淀 ＋ ＋ ＋ ＋ ＞112