食品中玉米赤霉烯酮的測(cè)定

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中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 華人民共和國(guó)衛(wèi)生部 發(fā)布 布 施 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品 中 玉米赤霉烯酮 的測(cè)定 （征求意見(jiàn)稿） 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替 谷物中玉米赤霉烯酮的測(cè)定 》和 23504食品中玉米赤霉烯酮的測(cè)定 免疫親和層析凈化高效液相色譜法 》 。 本標(biāo)準(zhǔn)與 B/T 23504要變化 如下： —— 修改了標(biāo)準(zhǔn)的中文名稱，標(biāo)準(zhǔn)中文名稱改為 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中玉米赤霉烯酮的測(cè)定（理化方法 ）》； —— 按照 —— 新標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容是由原 23504個(gè)方法組成， 將 23504 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品 中玉米赤霉烯酮的測(cè)定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了 食品 中玉米赤霉烯酮的測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn) 第一法 適用于 谷物 （ 玉米、小麥 等 ）中玉米赤霉烯酮的測(cè)定 ，第二法 適用于糧食和糧食制品、酒類、醬油、醋、醬及醬制品中玉米赤霉烯酮含量的測(cè)定。 2 原理 試樣中的玉米赤霉烯酮用乙腈 取液經(jīng)免疫親和柱凈化、濃縮后，用配有熒光檢測(cè)器的液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法定量。 第一法 免疫親和層析凈化液相色譜法 3 試劑和材料 除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為 符合 6682中 規(guī)定的 一級(jí) 水 。 試劑 醇 （ ： 色譜 純 。 腈 （ ： 色譜 純 。 化鈉 （ 。 劑配制 乙腈 9+1）： 90 0 準(zhǔn)品 玉米赤霉烯酮 （ 標(biāo)準(zhǔn)品：純度 ≥98%。 準(zhǔn)溶液配制 米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備 液（ 0.1 mg/ 準(zhǔn)確稱取適量的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈 溶解并定容至濃度 為 0.1 mg/ 冰箱中避光保存 ，可使用 3個(gè)月 。 使用前用流動(dòng)相稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。 米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液： 將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用乙腈系列稀釋后，配成濃度為 g/g/g/g/g/g/g/g/可使用 7 d。 料 米赤霉 烯酮免疫親和柱。 璃纖維濾紙 4 儀器和設(shè)備 高效液相色譜儀，配有熒光檢測(cè)器。 粉碎機(jī) 。 高速均質(zhì)器 。 氮吹儀 。 空氣壓力泵 。 玻璃注射器： 20 天平：感量 g。 5 分析步驟 試樣 制備 樣品提取 稱取 40 確到 g）置于 250 入 4 00 9+1） ，以均質(zhì)器高速攪拌提取 2 過(guò)折疊快速定性濾紙過(guò)濾，移取 10.0 0.0 玻璃纖維濾紙過(guò)濾 1次～ 2次，至濾液澄清后進(jìn)行免疫親和柱凈化操作。 凈化 將免疫親和柱連接于 20 確移取 10.0 相當(dāng)于 0.8 入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以 1 滴 /s～ 2 滴 /至有部分空氣通過(guò)柱體。以 5 次，棄去全部流出液，并使部分空氣通過(guò)柱體。準(zhǔn)確加入 1.5 洗脫，流速為 1 mL/集 洗脫液于玻璃試管中，于 55 ℃以下氮?dú)獯蹈珊?，?1.0 b） ]溶解殘?jiān)?，供液相色譜測(cè)定。 儀器參考條件 液相色譜條件 a） 色譜柱： 150 .6 內(nèi)徑 ） ，粒度 4 μm，或相當(dāng)者； b） 流動(dòng)相：乙腈 甲醇 （ 46+46+8） ； c） 流速： 1.0 mL/ d） 檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng) 274 射波長(zhǎng) 440 e） 進(jìn)樣量： 100 μL； f） 柱溫：室溫。 色譜分析 分別取樣液和標(biāo)準(zhǔn)溶液各 100 μ保留時(shí)間定性，峰面積定量。在上述色譜條件下，玉米赤霉烯酮的保留時(shí)間約為 3.4 玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖參見(jiàn) 圖 1。 空白試驗(yàn) 除不加試樣外，均按上述步驟進(jìn)行 。 6 分析結(jié)果的表述 按外標(biāo)法計(jì)算試樣中玉米赤霉烯酮的含量，計(jì)算結(jié)果需將空白值扣除。見(jiàn)式 （ l） ： 式中： X—— 試樣中玉米赤霉烯酮的含量，單位為微克每千克 （ μg/； A—— 樣液中玉米赤霉烯酮的峰面積； 空白樣液中玉米赤霉 烯酮的峰面積； c—— 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中玉米赤霉烯酮的濃度，單位為微克每毫升 （ μg/； V—— 樣液最終定容體積，單位為毫升 （ ； m—— 最終樣液所代表的試樣量，單位為克 （ g） ； 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中玉米赤霉烯酮的峰面積。 第二法 免疫親和層析凈化液相色譜法 7 試劑和材料 除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為 6682規(guī)定的一級(jí)水。 劑 醇 （ ：色譜純。 腈 （ ：色譜純。 化鈉（ 。 磷酸氫二鈉（ 。 磷酸二氫鉀（ 。 氯化鉀（ 。 試劑配制 取液：乙腈 ＋ 水 （ 9+1） ， 9份乙腈和 1份水混合而成 。 取 8.0 1.2 0.2 0.2 990 后用濃鹽酸調(diào)節(jié) 用水定容至 1 L。 醇十乙腈 （ 1+1） ： 1份乙腈和 1份甲醇混合而成。 準(zhǔn)品 玉米赤霉烯酮 （ 標(biāo)準(zhǔn)品：純度 ≥98%。 準(zhǔn)溶液配制 ： 備液 （ 0.1 mg/：準(zhǔn)確稱取一定量的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇 +乙腈（ 1+1） 溶解，配成 0.1 mg/ 保存，可使用 3個(gè)月。 玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)使用需要，準(zhǔn)確吸取一定量的玉米赤霉烯酮儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相稀釋，分別配成相當(dāng)于 10 ng/50 ng/100 ng/200 ng/500 ng/4 ℃保存，可使用 7 d。 料 玉米赤霉 烯酮免疫親和柱。 玻璃纖維濾紙：直徑 11 徑 m，無(wú)熒光特性。 8 儀器和設(shè)備 天平：感量 g。 高效液相色譜儀：配有熒光檢測(cè)器。 均質(zhì)器：轉(zhuǎn)速大于 10 000 r/ 高速萬(wàn)能粉碎機(jī)：轉(zhuǎn)速 10 000 r/ 玻璃注射器： 10 試驗(yàn)篩： 1 空氣壓力泵。 9 分析步驟 試樣制備與提取 糧食和糧食制品：將樣品研磨，硬質(zhì)的糧食等用高速萬(wàn)能粉碎機(jī)磨細(xì)并通過(guò) 試驗(yàn)篩 （ ，不要磨成粉末。稱取 50 g（精確到 g）磨碎的試樣于 入 5 提取液 （ 容至刻度，混勻，轉(zhuǎn)移至均質(zhì)杯中，高速攪拌提取 2 量濾紙過(guò)濾，移取 10.0 0 水定容至刻度，混勻，用玻璃纖維濾紙過(guò)濾至濾液澄清，收集濾液 酒類：取脫氣酒類試樣（含二氧化碳的酒類使用前先置于 4 ℃ 冰箱冷藏 30 濾或超聲脫氣）或其他不含二氧化碳的酒類試樣 20 g（精確到 g）于 50 乙腈定容至刻度，搖勻。移取 10.0 0 水定容至刻度，混勻，用玻璃纖維濾紙過(guò)濾至濾液澄清， 收集濾液 醬油、醋、醬及醬制品：稱取 25 g（精確到 g）混勻的試樣，用乙腈定容至 100.0 聲提取 2 量濾紙過(guò)濾，移取 10.0 0 水定容至刻度，混勻，用玻璃纖維濾紙過(guò)濾至濾液澄清，收集濾液 凈化 將免疫親和柱連接于玻璃注射器 （ 下，準(zhǔn)確移取 A 或 B 或 C 10.0 入玻璃注射器中。將空氣壓力泵與玻璃注射器相連接，調(diào)節(jié)壓力，使溶液以約 1 滴／ 至空氣進(jìn)入親和柱中。依次用 10 和 10 速約為 l 滴 /s～ 2 滴 /s，直至空氣進(jìn)入親和柱中，棄去全部流出液，抽干小柱。 洗脫 準(zhǔn)確加入 1.0 速約為 1 滴 /s，收集全部洗脫液于干凈的玻璃試管中，用甲醇定容至 1 液相色譜參考條件 a） 色譜柱： 5 μm ， 150 .6 b） 流動(dòng)相：乙腈十水十甲醇 （ 46+46+8） ； c） 流速： 1.0 mL/ d） 柱溫： 35℃ ； e） 進(jìn)樣量： 20 μL～ 100 μL； f） 檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng) 274 射波長(zhǎng) 440 在上述色譜條件下 ，玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見(jiàn)圖 2。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 以玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。 試樣溶液的測(cè)定 將試樣溶液注入液相色譜儀中，得到相應(yīng)的峰面積。用標(biāo) 準(zhǔn)工作曲線對(duì)試樣進(jìn)行定量，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液中玉米赤霉烯酮的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)， 平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次 。 空白試驗(yàn) 除不加試樣外，空白試驗(yàn)應(yīng)與測(cè)定平行進(jìn)行，并采用相同的分析步驟。 10 分析結(jié)果的表述 試樣中玉米赤霉烯酮的含量按式 （ l） 計(jì)算： 01 ) 1 0 0 01000c c ?????（ ………………………………… （ 1） 式中： X—— 試樣中玉米赤霉烯酮的含量，單位為微克每千克 （ μg/； 試樣 溶液中玉米赤霉烯酮的濃度，單位為納克每毫升 （ ng/； 空白試樣溶液中玉米赤霉烯酮的濃度，單位為納克每毫升 （ ng/； V—— 甲醇洗脫液體積，單位為毫升 （ ； m—— 試樣的質(zhì)量，單位為克 （ g） ； f—— 稀釋倍數(shù)。 附 錄 A 第一法 玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品 的液相色譜圖 附 錄 B 第二法 玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖 圖 2 玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖