2019-2020年高中生物 第30課 動物細胞工程教案 新人教版必修3.doc

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2019-2020年高中生物 第30課 動物細胞工程教案 新人教版必修3 考試說明具體內容標準 等級 生物課程標準學習要求 動物的細胞培養(yǎng)與體細胞克隆 A 簡述動物細胞培養(yǎng)的過程、條件及其應用 簡述克隆動物的概念和原理 簡述體細胞核移植技術和體細胞克隆及其應用前景 關注體細胞克隆技術的安全性和倫理性問題 細胞融合與單克隆抗體 A 簡說出述動物細胞融合的方法和過程 說出 單克隆抗體的制備過程及其應用 認同細胞學基礎理論研究與技術開發(fā)之間的關系 關注細胞工程研究的發(fā)展和應用前景 一、教學內容及考綱要求 二、重要的結論性語句： 1、動物細胞培養(yǎng)技術是動物細胞工程技術的基礎。 2、原代培養(yǎng)階段，培養(yǎng)的細胞最接近于體內組織或細胞的生長特性，很適合用于藥物測試、基因表達等實驗研究。 3、一般情況下，傳代培養(yǎng)10－50次后，細胞增殖會明顯減緩，甚至完全停止。少部分細胞的細胞核型發(fā)生變化，獲得不死性。 4、動物細胞培養(yǎng)需要嚴格的環(huán)境條件，包括無菌無毒、溫度、pH、氣體和營養(yǎng)物質（如葡萄糖、無機鹽、氨基酸、維生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素和生長因子等。在使用合成培養(yǎng)基時還需加入動物血清等天然成分）。 5、動物細胞核移植是將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新胚胎，并最終發(fā)育為動物個體。 6、細胞融合技術突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能。 7、動物細胞融合技術的最重要的用途之一是制備單克隆抗體。 8、單克隆抗體制備中，第一次篩選：用選擇性培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；第二次篩選：通過抗體檢測篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞。 9、雜交瘤細胞的特點是既能迅速大量增殖，又能產生專一性抗體。 10、單克隆抗體最主要的優(yōu)點在于它的特異性強、靈敏度高，并能大量制備。 三、重、難點知識歸類、整理 1、植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較 比較項目 植物組織培養(yǎng) 動物細胞培養(yǎng) 培養(yǎng)原理 細胞全能性 細胞增殖 培養(yǎng) 基 物理性質 固體 液體 化學成分 營養(yǎng)物質、激素 營養(yǎng)物質、動物血清 培養(yǎng)材料 常用植物幼嫩部位或花藥 常用動物胚胎或出生不久的幼齡 動物的器官或組織 培養(yǎng)結果 培育成植株 培育成細胞株或細胞系 培養(yǎng)目的 快速繁殖、培育無病毒植株 獲得細胞或細胞產品等 聯系 均為無菌操作,需要適宜的溫度,pH值,O2等條件 2、植物體細胞雜交和動物細胞融合 項目 植物體細胞雜交 動物細胞融合 細胞融 合原理 細胞膜的流動性 細胞膜的流動性 細胞融 合方法 酶解法去細胞壁后誘導原生質體 融合 胰蛋白酶處理使細胞分散后誘導 細胞融合 誘導 手段 離心、振動、電刺激、 聚乙二醇誘導 （同上） 再加上滅活的病毒誘導 用途 獲得雜種植株 主要：制備單克隆抗體 3、受精作用、原生質體融合、動物細胞融合 受精作用 原生質體融合 動物細跑融合 不 同 細胞類型 精子與卵細胞 體細胞 體細胞 細胞來源 來自同一生物個體 一般來自不同種的生物個體 一般來自不同種的生物個體 染色體數目變化 2N 2N1+2N2 2N1+2N2 融合條件 不需人工誘導 需人工誘導 需人工誘導 同 都有兩個細胞融合成一個細胞，并且融合成這個細胞的遺傳物質都是由原來的兩個細胞決定的 4、試管動物與克隆動物 試管動物（嬰兒）:。通過體外受精和胚胎移植技術而產生的動物或嬰兒，其實質是通過有性生殖而形成的后代。在這一技術過程中，精子和卵子從動物（人）體內取出來，在人工提供的生活條件下（通常是在試管中）進行受精，并讓體外受精的受精卵在試管中發(fā)育，再把發(fā)育到一定階段的胚胎移植到“代理母親”動物（人）的子宮內繼續(xù)發(fā)育直到誕生。 克隆動物：一般是指通過無性繁殖形成動物后代。將供體體細胞的細胞核與受體去核卵細胞的細胞質進行人工組合，借助卵細胞的發(fā)育能力，經過培養(yǎng)發(fā)育成胚胎進而形成個體?？寺∈侵笩o性繁殖系，具體地說，是指從一個共同的祖先，通過無性繁殖的方法產生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子、細胞或個體?？寺∫部芍笩o性繁殖的過程。 5、動物細胞工程與基因工程、胚胎工程的聯系 動物細胞是基因工程技術中常用的受體細胞，因此基因工程離不開動物細胞的培養(yǎng)。克隆動物則是通過體細胞核移植形成的重組細胞發(fā)育成的胚胎也要經過胚胎移植等胚胎工程技術完成。 四、例題解析： 例1：下列關于細胞工程的敘述，錯誤的是 A． 電刺激可誘導植物原生質體融合或動物細胞融合 B． 去除植物細胞的細胞壁和將動物組織分散成單個細胞均需酶處理 C． 小鼠骨髓瘤細胞和經抗原免疫小鼠的B淋巴細胞融合可制備單克隆抗體 D． 某種植物甲乙兩品種的體細胞雜種與甲乙兩品種雜交后代的染色體數目相同 例2：下列各圖表示單克隆抗體制備過程的各階段圖解，請根據圖回答下列問題： ①請用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆制備過程的順序連接起來。 ②在單克隆抗體制備過程中之所以選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，是因為它們融合后的雜交瘤細胞具有 、 的特性。 ③由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用了 和 的動物細胞工程技術手段。 課堂練習 一 、單選題： 1．為了使用于培養(yǎng)的動物組織細胞分散開以便配制成一定濃度的細胞懸浮液，選取來的動物組織應選用下列哪種物質處理 A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.鹽酸 D.胰脂肪酶 2．在克隆多利羊的過程中，下列哪項技術沒有運用到 A.細胞培養(yǎng)技術 B.細胞核移植 C.胚胎移植技術 D.基因工程技術 3．科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經培養(yǎng)可產生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是 A.經過免疫的B淋巴細胞 B.不經過免疫的T淋巴細胞 C.經過免疫的T淋巴細胞 D.不經過免疫的B淋巴細胞 4．動物細胞融合的目的中最重要的是 A.克服遠源雜交不親和 B.制備單克隆抗體 C.培育新物種 D.生產雜種細胞 5．能使動物細胞融合的特有的誘導因子是 A.離心 B.滅活的病毒 C.電刺激 D.振動 6．一只羊的卵細胞核被另一只羊的體細胞核置換后，這個卵細胞經過多次分裂，再植入第三只羊的子宮內發(fā)育，結果產下一只羊羔。這種克隆技術具有多種用途，但是不能 （ ） A．有選擇地繁殖某一性別的家畜 B．繁殖家畜中的優(yōu)秀個體 C．用于保存物種 D．改變動物的基因型 7．單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞。在這種培養(yǎng)基上不能存活、增殖的細胞是 （ ） ①B淋巴細胞 ②小鼠骨髓瘤細胞 ③B淋巴細胞自身融合細胞 ④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞 ⑤雜交瘤細胞 A．①②③④ B．①③⑤ C．②④ D．①③ 8．植物體細胞雜交與動物細胞工程中所用技術與原理不相符的是 A．纖維素酶、果膠酶處理和胰蛋白酶處理——酶的專一性 B．植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)——細胞的全能性 C．原生質體融合和動物細胞融合——生物膜的流動性 D．紫草細胞培養(yǎng)和雜交瘤細胞的培養(yǎng)——細胞分裂 9．在下列自然現象或科學研究成果中，能為“動物細胞具有全能性”觀點提供直接證據的是 A．壁虎斷尾后重新長出尾部 B．蜜蜂的未受精卵細胞發(fā)育成雄蜂 C．用體外培養(yǎng)的皮膚治療燒傷病人 D．小鼠腺細胞的自我復制 10．利用細胞工程方法，以SARS病毒核衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體。下列相關敘述正確的是 A．用純化的核衣殼蛋白反復注射到小鼠體內，產生的血清抗體為單克隆抗體 B．體外培養(yǎng)單個效應B細胞可以獲得大量針對SARS病毒的單克隆抗體 C．將等量效應B細胞和骨髓瘤細胞混合，經PEG誘導融合后的細胞均為雜交瘤細胞 D．利用該單克隆抗體與SARS病毒核衣殼蛋白特異性結合的方法可診斷出病毒感染者 11．下列哪一項屬于克隆 A．將雞的某個DNA分子片段整合到小鼠的DNA分子上 B．將抗藥菌的某基因引入草履蟲的細胞內 C．將鼠骨髓瘤細胞與經過免疫的脾細胞融合成雜交瘤細胞 D．將某腫瘤細胞在體外培養(yǎng)繁殖成一個細胞系 二、多選題： 12．下列關于單克隆抗體的制備和應用的敘述中，正確的是 （　 ） A．B淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合，一般不需要滅活的仙臺病毒或聚乙二醇誘導 B．融合后形成的雜交瘤細胞既能無限增殖，又能產生單克隆抗體 C．體外培養(yǎng)時，一個效應B淋巴細胞可以產生抗體，但不能無限增殖 D．單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性明顯 13．（多選）1975年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下列細胞中與單克隆抗體的制備有關的是 （　 ） 　　A.效應B細胞 B．T淋巴細胞 C.骨髓瘤細胞 D．雜交瘤細胞 三、非選題： 14．右圖為細胞融合的簡略過程，請據圖回答： （1）若A、B是植物細胞，在細胞融合之前已用_____________ 處理，除去了　　　　　??；由A、B到細胞C的過程中，常用的物理方法是　　　　　　　　　　　　。融合完成的標志是　　　　　　　　　　。 （2）若A、B是植物細胞，則形成的D細胞還要應用 　　　　　　 　　　　　技術把D培養(yǎng)成植株。 （3）若A、B是動物細胞，一般取自　　　　　　　　　 ，然后用 使其分散開來；由A、B到C的過程中，常用的不同于植物細胞融合的手段是 　　 ，所形成的D稱為 　　　　　 ，A、B融合為C的過程說明了細胞膜具有 。 （4）若該過程是制備單克隆抗體，A為小鼠效應B細胞，那么，在獲得此細胞之前，小鼠已經被注射了 。注射后小鼠身體發(fā)生了相應的免疫反應，生成了________________________________________，圖中B為 　　　　　 。 （5）若該過程仍是制備單克隆抗體，在A、B到C的過程中，所形成的C有 種（只考慮兩兩融合），用來培養(yǎng)的D細胞應該是 　　　　　　 。從中選擇出它的方法是 　　 　　　 培養(yǎng)，獲得D后，常用的培養(yǎng)方法是培養(yǎng)液中培養(yǎng)和 　　　　 。 15.兩場籌備了10年的“太空結合”首次在神舟八號飛船上舉行了,“新人”之一是小白鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞,新人在“產房”——電融合儀內孕育新生命。160min后,中國首批“太空娃娃”終于順利誕生?！疤胀尥蕖闭Q生和地面實驗如圖所示。請回答下列問題： (1)小白鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞能融合在一起,體現了細胞膜具有__________的特點。 (2)若用于SARS的預防上,則宜采用_______細胞?？茖W工作者正在研究治療癌癥使用的生物導彈是____　　　__　　　　　　　　　　_。 (3)B淋巴細胞和T淋巴細胞都是由________________細胞形成的。這種相同細胞的后代,在形態(tài)、結構和生理功能上產生穩(wěn)定差異的過程,叫做 _____。 (4)鼠的淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后,在培養(yǎng)時通過_______________（有絲/減數）分裂方式大量繁殖。細胞中染色體數目與淋巴細胞相比有何特點？_____________；要觀察融合后的細胞中的染色體形態(tài)、數目,可用一定濃度的 處理。 (5)融合的細胞具有兩種細胞的特性,即_______________和___________________。 課后練習 一、單選題： 1．下列關于動物細胞培養(yǎng)的敘述，正確的是 A．培養(yǎng)中的人效應T細胞能產生單克隆抗體　B．培養(yǎng)中的人B細胞能夠無限地增殖 C．人的成熟紅細胞經過培養(yǎng)能形成細胞株　　D．用胰蛋白酶處理肝組織可獲得單個肝細胞 2．單克隆抗體技術在疾病診斷和治療以及生命科學研究中具有廣泛的應用。下列關于單克隆抗體的敘述，錯誤的是 A．特異性強、靈敏度高 　　　 B．與抗癌藥物結合可制成“生物導彈” C．體外培養(yǎng)B淋巴細胞可大量分泌單克隆抗體 D．由效應B細胞與骨髓瘤細胞融合而成的雜交瘤細胞分泌 3．關于單克隆抗體，下列敘述不正確的是 A．可以制成診斷盒．用于疾病的珍斷 B．可以與藥物結合，用于病變細胞的定向治療 C．可以利用基因工程技術生產 D．可以在生物體內生產，不能體外生產 4．下列關于細胞工程的敘述中，錯誤的是 A．植物細胞融合必須先制備原生質體 B．試管嬰兒技術包括人工受精和胚胎移植兩方面 C．經細胞核移植培育出新個體只具有一個親本的遺傳性狀 D．用于培養(yǎng)的植物器官或屬于外植體 5．用動物細胞工程技術獲取單克隆抗體，下列實驗步驟中錯誤的是 A．將抗原注入小鼠體內，獲得能產生抗體的B淋巴細胞 B．用纖維素酶處理B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞 C．用聚乙二醇（PEG）作誘導劑，促使能產生抗體的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合 D．篩選雜交瘤細胞，并從中選出能產生所需抗體的細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體 6．人類寄希望于利用干細胞（人體中具有分裂、分化能力的細胞）的分離和體外培養(yǎng)，在體外培育出組織器官，并最終通過組織或器官移植實現對臨床疾病的治療。能否用肌細胞代替干細胞 A．不能，因為肌細胞與干細胞所含有的遺傳物質不同 B．不能，因為肌細胞是高度分化的細胞，沒有分裂能力 C．能，因為肌細胞雖然是分化的細胞，但在一定條件下也可脫分化，實現細胞全能性 D．能，因為肌細胞與干細胞具有完全相同的遺傳物質 7．下列屬于組織培養(yǎng)但不是克隆的是 （ ） A．將花粉離體培養(yǎng)成單倍體植株 B．芽發(fā)育成枝條 C．根尖分生區(qū)發(fā)育成成熟區(qū) D．上皮細胞無性繁殖產生的細胞群 8．動物細胞培養(yǎng)液和植物組織培養(yǎng)液的共有成分是 （ ） A．葡萄糖 B．蔗糖 C．動物血清 D．維生素 9．動物細胞培養(yǎng)的細胞來自于 （ ） A．任何個體的細胞 B．只能取自動物胚胎細胞 C．只能取自幼齡動物的組織細胞 D．胚胎或幼齡動物的器官和組織細胞 10．動物細胞工程常用的技術手段中，最基礎的是 （　 ） 　A.動物細胞培養(yǎng)　 B．動物細胞融合 C．單克隆杭體 D．胚胎、核移植 11.“生物導彈”是指 （ ） 　　A.單克隆抗體 　　　　　　　　 B.雜交瘤細胞 　　C.產生特定抗體的B淋巴細胞　　D.在單抗上連接抗癌藥物 12．.如用動物的細胞進行克隆實驗應該選擇的細胞核不能是　　　　　　?。? ） A、乳腺細胞的 B、卵細胞的 C、胃腺細胞的 D、囊胚時期的胚胎細胞的 13．單克隆抗體制備過程中使用的骨髓瘤細胞是一種缺陷型細胞，在含有次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培養(yǎng)基（HAT）中無法生長；而小鼠脾細胞是正常細胞，在HAT培養(yǎng)基上可正常存活。用聚乙二醇誘導細胞融合后，經過數代培養(yǎng)，最終可在HAT培養(yǎng)基上存活并能產生單克隆抗體的細胞是 （ ） A．骨髓瘤細胞之間形成的融合細胞 B．脾細胞之間形成的融合細胞 C．骨髓瘤細胞與脾細胞之間形成的融合細胞 D．脾細胞 14．研究單克隆抗體治療癌癥的思路是 （ ） A．利用單克隆抗體特異性地對抗癌細胞 B．以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細胞 C．抗癌物質在克隆細胞中大量合成 D．單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細胞結合 15．用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞 （　 ） A.容易產生各種變異 B．具有更強的全能性 C.取材十分方便 　　 D．分裂增殖的能力強 16．動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是 （　 ） ①誘導融合的方法完全相同 ②所用的技術手段不相同 ③所采用的原理完全相同 ④都能形成雜種細胞 A.①② B.①③ C.②④ D.③④ 17．有關動物細胞培養(yǎng)的敘述中正確的是 A．動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細胞分散 B．動物細胞培養(yǎng)的目的是獲得大量的細胞分泌蛋白 C．細胞遺傳物質的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中 D．培養(yǎng)至50代后能繼續(xù)傳代的傳代細胞叫細胞株 二.多選題 18．關于制備單克隆抗體的敘述不正確的是 A．單克隆抗體產自淋巴細胞 B．單克隆抗體的制備要經過細胞融合 C．單克隆抗體的獲得不需要使細胞癌變 D．必須同時在體內和體外培養(yǎng)挑選出所需抗體的細胞群 19．對細胞全能性的表述不正確的有 A．沒有離體植物細胞也能表現出全能性 B．動物細胞融合標志著動物細胞全能性的實現 C．單克隆抗體的制備原理依據是細胞的全能性 D．花粉可培育成單倍體，是細胞全能性的體現 20．將小鼠骨髓瘤細胞與一種B淋巴細胞融合，可使融合的細胞經培養(yǎng)產生單克隆抗體，其依據是 A．B淋巴細胞只有與骨髓瘤細胞融合后才能產生抗體 B．B淋巴細胞可以產生抗體，但不能無限增殖 C．骨髓瘤細胞可以產生抗體，但不能無限增殖 D．骨髓瘤細胞可以無限增殖，但不能產生抗體 21．動物細胞體外培養(yǎng)時，通常要在培養(yǎng)基中補充一定濃度的某些物質。如圖是血清對正常細胞和癌細胞培養(yǎng)影響的實驗結果。從該圖提供的信息可以獲得的正確結論有 : A．正常細胞與癌細胞的增殖速率相同 B.有無血清對正常細胞培養(yǎng)的影響不同 C．培養(yǎng)基中補充血清有助于正常細胞的培養(yǎng) D.培養(yǎng)基中是否補充血清對癌細胞的培養(yǎng)影響不大 三、非選題： 22、下圖為細胞融合的簡略過程（只考慮兩個細胞的融合），請據圖回答： I．若A、B是基因型分別為rrHH、RRhh兩個煙草品種細胞的花粉，且這兩對基因位于非同源染色體上，由于一對隱性純合基因(rr或hh) 的作用，在光照強度大于800勒克斯時，都不能生長。 （1）實驗開始時必須用 除去不利于原生質體融合的物質。 （2）實驗中除獲得雜種細胞外，還有基因型為 　　 的融合細胞。 （3）設計一方法（不考慮機械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細胞，方法： （4）將雜種細胞培養(yǎng)成雜種植株依據的理論基礎是 　　 。 II．若該過程是制備治療“SARS”病毒的單克隆抗體，A為人B淋巴細胞（染色體組成為2A＋XX=46），B為鼠骨髓瘤細胞（染色體組成為2A＋XX=40） （5）用單克隆抗體制成“生物導彈”主要利用了抗體的 特性。 （6）A細胞來自于 ，雜種細胞C共有 個染色體組。 （7）雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)時與植物組織培養(yǎng)的主要區(qū)別是培養(yǎng)基要用 培養(yǎng)基。（物理狀態(tài)），培養(yǎng)基中除了添加必要的營養(yǎng)物質為還需加入 。 23、肺癌在全國的發(fā)病率居腫瘤之首，小細胞肺癌是惡性程度最高的一種，上海肺癌研究所細胞與分子免疫研究室在國內率先研制出一種名叫“2F7”的靶向生物導彈。這種生物導彈是一種專門對小細胞肺癌產生特定靶向性的特異性單克隆抗體。注入靜脈后，會“直撲”小細胞肺癌病灶，使其攜帶的腫瘤化療藥物能“集中火力”抑制、殺滅腫瘤細胞。這預示著化療藥物有望彌補“良莠不分”、損害全身免疫力的缺陷。 （1）制備單克隆抗體的原理是 。 （2）制備單克隆抗體用到的動物細胞工程技術手段有 。 （3）單克隆抗體是由 細胞產生的。 （4）靜脈注入而不是口服單克隆抗體的原因是 。 （5）單克隆抗體與腫瘤細胞結合并發(fā)揮作用的過程屬于 免疫的 階段。 24．為某同學根據右圖雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌抗體的實驗方案，據圖回答： 1）該方案能達到預期效果嗎？_________原因是______________________________。 （2）圖中②為_________過程，常用_______________________作為誘導劑，該細胞繼承了_________________，因此不僅能分泌_________，還有_________________本領。 （3）破傷風桿菌的抗體最終可以從_______和_______中提取。 （4）該方案的目的是_________________。 25、右圖是制備分泌抗X抗體的過程，根據圖解回答問題： （1）給小鼠注射抗原的目的是__________________。 （2）在單克隆抗體制備過程中之所以選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，是因為它們融合后的雜交瘤細胞具有_________________________的特性。 （3）由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用了____ __和__________的動物細胞工程技術手段，前者常用的誘導劑與植物原生質體融合不同的是可用________________。 （4）動物細胞培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等，與植物細胞培養(yǎng)基有所不同的是，還含有________________。 （5）在動物細胞融合過程中，需要將所選取的組織細胞離散開，以利于細胞融合，可用___________處理離體組織細胞使之分散開。 （6）圖中有兩次篩選過程，其中步驟④的目的是篩選出___________ _____，步驟⑤⑥的目的是篩選出________ _______。 （7）請根據以下信息，設計一方法（不考慮機械方法），從培養(yǎng)液中篩選出雜交瘤細胞。已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細胞。方法：____________ ______________。原理：______________ ________ 26、(1)在動物細胞培養(yǎng)過程中，當貼壁細胞分裂長年到細胞表面 時，細胞會停止分裂增增殖，這種現象稱為細胞的 。此時，瓶壁上形成的細胞層數是 。要使貼壁細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是 。 (2)隨首細胞傳代次數的增多，絕大部分細胞分裂停止，進面出現 的現象；但極少數細胞可以連續(xù)增殖，其中有些細胞會因遺傳物質發(fā)生改變面變成 細胞，該種細胞的黏著性 ，細胞膜表面蛋白質（糖蛋白）的量 。 (3)現用某種大分子染料，對細胞進行染色時，觀察到死細胞被污色，而活細胞不染色，原因是 。 (4) 檢查某種毒物是否能改變細胞染一的數目，最好選用細胞分裂到 期的細胞用顯微鏡進行觀察。 (5)在細胞培養(yǎng)過程中，通常在 條件下保存細胞。因為在這種條件下，細胞中 的活性降低，細胞 的速率降低。 (6)給患者移植經細胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現象，這是因為機體把移植的皮膚組織當作 進行攻擊。 27、現有甲、乙兩種可能有一定毒性的化學物質，實驗室研究人員欲通過動物細胞培養(yǎng)的方法來鑒定它們是否有毒性并比較二者毒性的強弱。請你以一個研究人員的身份參與此項研究，完成下列有關問題。 Ⅰ．實驗原理： 根據這種變異細胞占全部培養(yǎng)細胞的百分數(以下稱Q值)，可判斷該化學物質的毒性。 Ⅱ．材料用具：活的小白鼠胚胎、胰蛋白酶液、動物細胞培養(yǎng)液、動物細胞固定液、適宜濃度的龍膽紫溶液、適宜濃度的化學物質甲溶液、適宜濃度的化學物質乙溶液、蒸餾水、滴管、培養(yǎng)皿、剪刀、錐形瓶、恒溫箱、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、小白鼠正常有絲分裂各時期的高倍顯微照片。 Ⅲ．實驗步驟： (1)制備細胞懸浮液。 把活的小白鼠胚胎放在培養(yǎng)皿中剪碎，轉入錐形瓶中，加入胰蛋白酶液處理，使胚胎組織離散成單個細胞，再加入動物細胞培養(yǎng)液，制成細胞懸浮液。 (2)進行細胞培養(yǎng)。 ①取A、B、C 3個潔凈的培養(yǎng)瓶， ； ②A、B兩個培養(yǎng)瓶中分別加入等量的甲、乙溶液。C瓶中加入等量的蒸餾水，搖勻； ③ (3)制作臨時裝片。 ①當細胞增殖到大約8代左右時，同時從恒溫箱中取出3個培養(yǎng)瓶，用胰蛋白酶液處理，加入動物細胞固定液，迅速殺死細胞并固定細胞分裂相； ②靜置一段時間后，分別從各培養(yǎng)瓶底部吸取適量的細胞懸浮液，滴在與培養(yǎng)瓶有相同編號的載玻片的中央， ，3min~5min后，蓋上蓋玻片。 （4）鏡檢和統(tǒng)計 把臨時裝片放在顯微鏡下，先用低倍鏡后用高倍鏡，尋找處于 期的細胞，并與 進行對比，統(tǒng)計并計算該期變異的細胞占該期細胞總數的百分數(Q值)。 Ⅵ.結果分析與結論： （1）經研究人員實驗得知，A、B、C三個培養(yǎng)瓶的Q值依次為：QA=1.3%，QB=12.5%，QC=0.1%，由此可知該實驗的結論是 。 （2）在實驗中，C培養(yǎng)瓶起 作用，C瓶的Q值說明 ?！　? 28、自然界中有一種含有葉綠體的原生動物—眼蟲，這說明植物的細胞器同樣可以在某些動物細胞中存活。某同學提出問題“動物細胞與植物細胞之間可以實現雜交嗎？”他嘗試設計出下列具體的實驗方案。結合實驗方案回答： 實驗原理：根據眼蟲的特點，動物細胞和植物細胞之間在理論上是可以實現雜交的。實驗步驟如下： （1）①中選的植物材料細胞中，必須有的細胞器是 。 （2）③過程所用的酶是 和 （3）④過程除了用電激之外，還可以用 、 　　　 等做誘導因素。 （4）⑤過程動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足的條件是 、 、 、 。 （5）在整個實驗過程中，要強調所用的器械的滅菌和實驗人員的無菌操作，原因是 。 （6）在⑤⑥過程中，通常要添加血清，原因是 。 （7）如果讓動植物雜交種批量培養(yǎng)生產，可以用 技術。 （8）動植物雜交種細胞是否有細胞壁？ 。理由是 。 第30課 動物細胞工程答案 例1：解析：植物原生質體融合或動物細胞融合均需誘導，誘導方法可以是電刺激等物理方法，聚乙二醇處理等化學方法，動物細胞還常用滅活的病毒誘導融合。去除植物細胞的細胞壁常用纖維素酶和果膠酶，將動物組織分散成單個細胞常用胰蛋白酶。小鼠骨髓瘤細胞和經抗原免疫小鼠的B淋巴細胞融合形成的雜交瘤細胞的主要用途是制備單克隆抗體。某種植物（如：染色體數目為2N），甲乙兩品種的體細胞雜種的染色體數目是兩品種體細胞染色體數之和（4N），甲乙兩品種雜交后代的染色體數目不改變（2N）。 選D 例2：解析：單克隆抗體的制備是利用了雜交瘤細胞具有既能迅速大量繁殖，又能產生專一抗體的特點，單克隆抗體的制備包括誘導骨髓瘤細胞與經免疫的B淋巴細胞融合，經過多次篩選獲得能產生特定抗體的雜交瘤細胞，經體外或體內細胞培養(yǎng)，從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲得單克隆抗體，其中重要的技術手段包括動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)等。 ① ②在體外大量繁殖 產生特異性抗體 ③動物細胞融合 動物細胞培養(yǎng) 課堂練習 1B　2D　3A　4B　5B　6D　7A　8B　9B　10D　11D　　12BCD　13ABCD 14．（1）纖維素酶和果膠酶 細胞壁 　離心、振動、電激 產生新的細胞壁 （2）植物組織培養(yǎng) （3）幼齡動物的組織或器官或胚胎 胰蛋白酶 滅活的病毒誘導 雜種細胞 流動性 （4）抗原 效應B細胞、記憶細胞、抗體 骨髓瘤細胞 （5）3 雜交瘤細胞 用特定選擇培養(yǎng)基 小鼠腹腔內增殖 15．（1）一定的流動性 （2）SARS病毒感染后產生的效應B細胞,單克隆抗體+抗癌藥物（3）造血干細胞 細胞分化（4）有絲　加倍　龍膽紫 （5）無限增值,產生單一抗體 課后練習 1D　2C　3D　4C　5B　6B　7A　8D　9D　10A　11D　12B　13C　14D　15D　16C　17A　18ACD　19ABC　20BD 21BCD 22（1）纖維素酶(或果膠酶)（2）rrHH、RRhh（3）置大于800勒克斯光照下培養(yǎng)，收集分化的細胞團 （4）細胞的全能性 II （5）抗體與抗原結合，發(fā)揮特異性免疫效應 （6）非典患者　2；（7）液體　動物血清 23（1）每種效應B細胞只能產生一種特異性抗體 　瘤細胞能無限增殖 （2）動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)　?。?）雜交瘤 （4）抗體是蛋白質，若口服則被消化，使抗體失去其功能　?。?）體液 效應 24（1）不能 因為沒有將抗原注入小鼠體內，無法獲得產生此種抗體的效應B細胞 （2）細胞融合 滅活的病毒（或聚乙二醇） 雙親細胞的遺傳物質 特異性抗體 在體外培養(yǎng)條件下大量繁殖 （3）培養(yǎng)液 小鼠腹水 （4）制備單克隆抗體 25(1)獲得能產生相應抗體的B淋巴細胞(2)既能無限增殖，又能產生特定抗體(3)動物細胞融合 動物細胞培養(yǎng) 滅活病毒 (4)動物血清(5)胰蛋白酶 (6)雜交瘤細胞 能產生特定抗體的雜交瘤細胞(7)方法：培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細胞　　原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖 26（1）相互接觸 接觸抑制 單層（或一層） 胰蛋白酶 （2）衰老甚至死亡 不死性 降低減少 （3）由于活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進入活細胞內，故活細胞不能著色（或由于死細胞的膜喪失了選擇透過性，大分子染料能夠進入死細胞內而著色） （4）中 （5）冷凍（或超低溫、液氮） 酶 新陳代謝 （6）抗原 27 I．有毒物質會使動物細胞發(fā)生染色體變異 Ⅲ．(2)①分別放人等量的細胞懸浮液 ③把3個培養(yǎng)瓶放在37℃(或適宜溫度)的恒溫箱中培養(yǎng) (3)②加1～2滴龍膽紫溶液染色 (4)有絲分裂中小白鼠正常細胞有絲分裂中期高倍顯微照片 Ⅳ．(1)甲、乙兩種化學物質均有毒性．且乙的毒性比甲的毒性大 (2)對照動物細胞在正常培養(yǎng)狀態(tài)下染色體變異頻率非常低 28⑴葉綠體 ⑵纖維素酶和果膠酶 ⑶病毒 聚乙二醇（振蕩、離心、生物、化學因素等） ⑷無菌、無毒的環(huán)境 營養(yǎng) 溫度和pH 氣體環(huán)境 ⑸組織培養(yǎng)中用到的培養(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)成分，有利于培養(yǎng)物的生長，然而各種雜菌同樣也可以在上面迅速生長，所以組織培養(yǎng)過程中污染現象經常發(fā)生。培養(yǎng)基一旦被污染，迅速生長的各種雜菌不但會和培養(yǎng)物爭奪營養(yǎng)，而且這些雜菌生長的過程中會生成大量對培養(yǎng)物有害的物質，導致培養(yǎng)物迅速死亡（2分） ⑹由于人們對細胞所需的營養(yǎng)物質還沒有完全搞清楚，通常加入血清、血漿等一些天然成分 ⑺動物細胞培養(yǎng) ⑻無 因為胚胎在母體子宮中完成胚胎發(fā)育