（通用版）2020版高考生物一輪復習 第十三單元 第一講 基因工程學案（含解析）.doc

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基因工程 考點一　基因工程的操作工具 1．限制性核酸內切酶(簡稱限制酶) (1)來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。 (2)作用：識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列并切開特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。 (3)結果：產(chǎn)生黏性末端或平末端。 2．DNA連接酶 種類 Ecoli DNA連接酶 T4DNA連接酶 來源 大腸桿菌 T4噬菌體 特點 只縫合黏性末端 縫合黏性末端和末端 作用 恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵 3．載體 (1)作用：攜帶外源DNA片段進入受體細胞。 (2)種類：質粒、λ噬菌體的衍生物、動植物病毒等。 (3)條件 [基礎自測] 1．判斷下列敘述的正誤 (1)切割質粒的限制性核酸內切酶均能特異性地識別6個核苷酸序列() (2)載體質粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標記基因() (3)限制酶只能用于切割目的基因() (4)DNA連接酶能將兩堿基間通過氫鍵連接起來() (5)限制性核酸內切酶、DNA連接酶和質粒是基因工程中常用的三種工具酶() (6)Ecoli DNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端() (7)用于載體的質粒DNA分子上至少含一個限制酶識別位點(√) (8)載體的作用是攜帶目的基因導入受體細胞中，使之穩(wěn)定存在并表達(√) 2．載體需具備的條件及其作用(連線) 3．據(jù)兩種限制酶的作用圖示填空 (1)已知限制酶EcoRⅠ和SmaⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別為G↓AATTC和CCC↓GGG，在圖中畫出兩種限制酶切割DNA后產(chǎn)生的末端。 (2)寫出產(chǎn)生的末端的種類：①產(chǎn)生的是黏性末端；②產(chǎn)生的是平末端。 (3)EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶識別的堿基序列不同，切割位點不同(填“相同”或“不同”)，說明限制酶具有專一性。 4．學透教材、理清原因、規(guī)范答題用語專練 (1)①是________酶，②是____________酶，二者的作用部位都是______________。 (2)限制酶不切割自身DNA的原因：__________________________________________。 答案：(1)限制　DNA連接　磷酸二酯鍵　(2)自身DNA不存在該酶的識別序列或識別序列已經(jīng)被修飾  1.與DNA有關的酶的比較 名稱 作用部位 作用底物 作用結果 限制酶 磷酸二酯鍵 DNA 將DNA切成兩個片段 DNA連接酶 磷酸二酯鍵 DNA片段 將兩個DNA片段連接為一個DNA分子 DNA聚合酶或熱穩(wěn)定DNA聚合酶 磷酸二酯鍵 脫氧核苷酸 將單個脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端 DNA(水解)酶 磷酸二酯鍵 DNA 將DNA片段水解為單個脫氧核苷酸 解旋酶 堿基對之間的氫鍵 DNA 將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈，形成兩條長鏈 RNA聚合酶 磷酸二酯鍵 核糖核苷酸 將單個核糖核苷酸依次連接到單鏈末端 2．限制酶的特點與使用 (1)限制酶具有特異性，即一種限制酶只能識別特定的核苷酸序列，并在特定的位點上進行切割；限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在該酶的識別序列或識別序列已經(jīng)被修飾。 (2)在獲取目的基因和切割載體時通常用同一種限制酶，以獲得相同的黏性末端。但如果用兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同，在DNA連接酶的作用下目的基因與載體也可以連接起來。 (3)為了防止載體或目的基因的黏性末端自己連接即所謂“環(huán)化”，可用不同的限制酶分別處理含目的基因的DNA和載體，使目的基因兩側及載體上各自具有兩個不同的黏性末端。 [對點落實] 1．(2016全國卷Ⅲ)圖(a)中的三個DNA片段上依次表示出了EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ和Sau3AⅠ三種限制性內切酶的識別序列與切割位點，圖(b)為某種表達載體的示意圖(載體上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切點是唯一的)。 ↓　　　　　　　　↓　　　　　　　↓ ——GAATTC——　——GGATCC——　——GATC—— ——CTTAAG——　——CCTAGG——　——CTAG—— 　　　　　↑　　　　　　　　↑　　　　　　　↑ 圖(a) 根據(jù)基因工程的有關知識，回答下列問題： (1)經(jīng)BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以與上述表達載體被________酶切后的產(chǎn)物連接，理由是____________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (2)若某人利用圖(b)所示的表達載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖(c)所示。這三種重組子中，不能在宿主細胞中表達目的基因產(chǎn)物的有________，不能表達的原因是_______________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 圖(b)　　　　　　　　　　圖(c) (3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有________________和________________，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是______________。 解析：(1)由題圖可知，BamHⅠ和Sau3AⅠ兩種限制性內切酶的共同識別序列是，二者切割可以形成相同的黏性末端，因此經(jīng)BamHⅠ酶切得到的目的基因可以與圖(b)所示表達載體被Sau3AⅠ酶切后的產(chǎn)物連接。(2)在基因表達載體中，啟動子應位于目的基因的首端，終止子應位于目的基因的尾端，這樣目的基因才能順利地轉錄，再完成翻譯過程，即順利表達。圖中甲所示的目的基因插入在啟動子的上游，丙所示目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉錄，因此目的基因不能表達。(3)常見的DNA連接酶有Ecoli DNA連接酶和T4DNA連接酶，其中T4DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端。 答案：(1)Sau3AⅠ　兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端　(2)甲和丙　甲中目的基因插入在啟動子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉錄(其他合理答案也可)　(3)Ecoli DNA連接酶　T4DNA連接酶　T4DNA連接酶(其他合理答案也可) 2．(2016江蘇高考，有改動)下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注。請回答下列問題： 限制酶 BamHⅠ BclⅠ Sau3AⅠ Hind Ⅲ 識別序 列及切 割位點 (1)用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用__________________兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過________酶作用后獲得重組質粒。為了擴增重組質粒，需將其轉入處于________態(tài)的大腸桿菌。 (2)為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加________，平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中________________________________________________________________________。 (3)若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為________________________，對于該部位，這兩種酶________(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開。 (4)若用Sau3AⅠ切圖1質粒最多可能獲得________種大小不同的DNA片段。 解析：(1)基因工程中選擇合適的限制酶切割質粒和目的基因時，應保留目的基因和至少一個標記基因結構的完整性，即遵循“目的基因切兩側，標記基因留一個”的基本原則，最好選擇切割產(chǎn)生不同末端的兩種限制酶同時切割質粒和目的基因，以避免目的基因的反向插入帶來的不正常表達，因此據(jù)圖分析應選擇的限制酶為BclⅠ和HindⅢ，切割后質粒上保留的四環(huán)素抗性基因作為標記基因。酶切后的載體和目的基因通過DNA連接酶的作用形成重組質粒，重組質粒需要導入Ca2＋處理后的處于感受態(tài)的大腸桿菌(處于感受態(tài)的大腸桿菌細胞膜的通透性大大增加，便于重組質粒進入)。(2)由上述分析可知，為了篩選出導入重組質粒的大腸桿菌，應先配制含四環(huán)素的選擇培養(yǎng)基，平板上長出的菌落為導入普通質?；蛑亟M質粒的大腸桿菌菌落，進一步鑒定出導入重組質粒的大腸桿菌，可利用PCR擴增的方式，結合電泳技術來分析處理。DNA的兩條鏈是反向平行的，在PCR過程中，當引物與DNA母鏈通過堿基互補配對結合后，DNA聚合酶只能從引物的3′端延伸DNA鏈，因此應選擇引物甲和引物丙。(3)因為BclⅠ和BamHⅠ酶切產(chǎn)生的黏性末端相同，所以可以被DNA連接酶連接，連接部位的6個堿基對序列為，但是連接后形成的DNA中不再具有BclⅠ和BamHⅠ的識別序列，連接部位不能被這兩種酶切開。(4)由圖可知，能被限制酶BclⅠ和BamHⅠ切割的序列也能被Sau3AⅠ識別并切割，因此圖中質粒上存在3個Sau3AⅠ的切割位點，若將3個切割位點之間的DNA片段分別編號為a、b和c，則完全酶切(3個切割位點均被切割)會產(chǎn)生3種大小的DNA片段，即為a、b和c；考慮只切1個切割位點，有3種情況，都產(chǎn)生1種大小的DNA片段，即大小均為a＋b＋c；考慮切2個切割位點，則會產(chǎn)生a＋b、c、a＋c、b、b＋c、a幾種不同大小的DNA片段。綜上所述，若用Sau3AⅠ識別并切割圖中質粒，最多可獲得7種大小的DNA片段，即為a＋b＋c、a＋b、a＋c、b＋c、a、b、c。 答案：(1)BclⅠ和HindⅢ　連接　感受　(2)四環(huán)素　引物甲和引物丙　(3)　都不能　(4)7 [類題通法] 選擇限制酶的技巧 (1)根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點確定限制酶的種類 ①應選擇切點位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇PstⅠ。 ②不能選擇切點位于目的基因內部的限制酶，如圖甲不能選擇SmaⅠ。 ③為避免目的基因和質粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質粒，如圖甲也可選擇用PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶(但要確保質粒上也有這兩種酶的切點)。 (2)根據(jù)質粒的特點確定限制酶的種類 ①所選限制酶要與切割目的基因的限制酶一致，以確保具有相同的黏性末端。 ②質粒作為載體必須具備標記基因等，所以所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結構，如圖乙中限制酶SmaⅠ會破壞標記基因。 考點二　基因工程的基本操作程序 　基因工程的基本操作程序 ―→―→―→ 1．目的基因的獲取 (1)目的基因：主要是指編碼蛋白質的基因，也可以是具有調控作用的因子。 (2)獲取方法 2．基因表達載體的構建 (1)構建基因表達載體的目的 ①使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代。 ②使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。 (2)基因表達載體的組成：目的基因、啟動子、終止子及標記基因等。 3．目的基因導入受體細胞 受體細胞類型 方法 植物細胞 農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法 動物細胞 顯微注射技術(注射到受精卵內) 微生物細胞 感受態(tài)細胞法(Ca2＋處理法) 4．目的基因的檢測與鑒定 檢測目的 檢測方法 判斷標準 目的基因是否插入轉基因生物的DNA DNA分子雜交技術 是否出現(xiàn)雜交帶 目的基因是否轉錄出了mRNA 分子雜交技術 是否出現(xiàn)雜交帶 目的基因是否翻譯出蛋白質 抗原—抗體雜交技術 是否出現(xiàn)雜交帶 個體水平的檢測 如抗蟲、抗病的接種實驗 是否表現(xiàn)出相應的特性 [基礎自測] 1．判斷下列敘述的正誤 (1)表達載體的復制和胰島素基因的表達均啟動于復制原點() (2)轉基因抗蟲棉植株抗蟲效果的鑒定必須通過分子檢測() (3)PCR反應中溫度的周期性改變是為了DNA聚合酶催化不同的反應() (4)抗蟲基因即使成功地插入植物細胞染色體上也未必能正常表達(√) (5)用PCR方法擴增目的基因時不必知道基因的全部序列(√) (6)PCR體系中一定要添加從受體細胞中提取的DNA聚合酶() (7)外源DNA必須位于重組質粒的啟動子和終止子之間才能進行復制() (8)目的基因導入雙子葉植物一般采用農桿菌轉化法(√) (9)為培育抗除草劑的作物新品種，導入抗除草劑基因時只能以受精卵為受體() (10)檢測目的基因是否導入受體細胞可用抗原－抗體雜交技術() 2．基因表達載體的組成及各部分的作用(連線) 3．學透教材、理清原因、規(guī)范答題用語專練 (1)從圖中可以看出，目的基因是________________，使用的載體是________，將基因表達載體導入受體細胞的方法是________________。 (2)請寫出兩種檢測目的基因是否表達的方法：__________________________________。 答案：(1)Bt毒蛋白基因　Ti質?！∞r桿菌轉化法　(2)抗原—抗體雜交法、用棉葉飼喂棉鈴蟲 1．獲取目的基因的方法比較 方法 從基因文庫中獲取 人工合成 從基因組文 庫中獲取 從部分基因文 庫中獲取，如 cDNA文庫 化學 合成法 逆轉 錄法 過程 2．PCR反應的過程 過程 說明 圖解 變性 溫度上升到90 ℃左右，雙鏈DNA解聚為單鏈 復性 溫度下降到55 ℃左右，兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合 延伸 溫度上升到72 ℃左右，Taq酶從引物起始合成互補鏈，可使新鏈由5′端向3′端延伸 3．目的基因檢測與鑒定的方法 [對點落實] 1．(2018海南高考)甜蛋白是一種高甜度的特殊蛋白質。為了改善黃瓜的品質，科學家采用農桿菌轉化法將一種甜蛋白基因成功導入黃瓜細胞，得到了轉基因植株?；卮鹣铝袉栴}： (1)用農桿菌感染時，應優(yōu)先選用黃瓜________(填“受傷的”或“完好的”)葉片與含重組質粒的農桿菌共培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是_____________________________________ ___________________________________________________________________________。 (2)若在轉基因黃瓜中檢測到這種甜蛋白，則表明該重組質粒中____________已轉移到植物細胞中且能夠表達；用該轉基因黃瓜的某一植株與一株非轉基因植株雜交，發(fā)現(xiàn)子代中含甜蛋白個體數(shù)與不含甜蛋白個體數(shù)之比為1∶1，則說明甜蛋白基因已經(jīng)整合到________________(填“核基因組”“線粒體基因組”或“葉綠體基因組”)中。 (3)假設某種轉基因作物因為受到病毒感染而減產(chǎn)，若要以該轉基因作物為材料獲得脫毒苗，應選用________作為外植體進行組織培養(yǎng)。 (4)通常，基因工程操作主要有4個步驟，即目的基因獲取、重組表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定。因此，基因工程的含義可概括為________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 解析：(1)用農桿菌感染時，應優(yōu)先選用黃瓜受傷的葉片與含重組質粒的農桿菌共培養(yǎng)，理由是葉片傷口處的細胞釋放出大量酚類物質，可吸引農桿菌移向這些細胞。(2)若在轉基因黃瓜中檢測到這種甜蛋白，則表明該重組質粒中甜蛋白基因已轉移到植物細胞中且能夠表達；用該轉基因黃瓜的某一植株與一株非轉基因植株雜交，發(fā)現(xiàn)子代中含甜蛋白個體數(shù)與不含甜蛋白個體數(shù)之比為1∶1，則說明甜蛋白基因已經(jīng)整合到核基因組中。(3)假設某種轉基因作物因為受到病毒感染而減產(chǎn)，若要以該轉基因作物為材料獲得脫毒苗，應選用莖尖作為外植體進行組織培養(yǎng)。(4)通常，基因工程操作主要有4個步驟，即目的基因獲取、重組表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定。因此，基因工程的含義可概括為按照人們的愿望進行設計，并通過體外重組和轉基因等技術，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出符合人們需要的新生物類型。 答案：(1)受傷的　葉片傷口處的細胞釋放出大量酚類物質，可吸引農桿菌移向這些細胞　(2)甜蛋白基因　核基因組　(3)莖尖　(4)按照人們的愿望進行設計，并通過體外重組和轉基因等技術，賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出符合人們需要的新生物類型 2．(2018江蘇高考有改動)為生產(chǎn)具有特定性能的α淀粉酶，研究人員從某種海洋細菌中克隆了α淀粉酶基因(1 656個堿基對)，利用基因工程大量制備α淀粉酶，實驗流程見下圖。請回答下列問題： (1)利用PCR技術擴增α淀粉酶基因前，需先獲得細菌的________________。 (2)為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接，需在引物的________端加上限制性酶切位點，且常在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點，主要目的是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)進行擴增時，反應的溫度和時間需根據(jù)具體情況進行設定，下列選項中________的設定與引物有關，________的設定與擴增片段的長度有關。(填序號) ①變性溫度　②退火(復性)溫度?、垩由鞙囟取、茏冃詴r間?、萃嘶?復性)時間?、扪由鞎r間 (4)下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼α淀粉酶的mRNA 的部分堿基序列： 圖中虛線框內mRNA片段包含________個密碼子，如虛線框后的序列未知，預測虛線框后的第一個密碼子最多有________種。 (5)獲得工程菌表達的α淀粉酶后，為探究影響酶活性的因素，以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測定酶活性，結果如下： 緩沖液 50 mmol/L Na2HPO4KH2PO4 50 mmol/L TrisHCl 50 mmol/L GlyNaOH pH 6.0 6.5 7.0 7.5 7.5 8.0 8.5 9.0 9.0 9.5 10.0 10.5 酶相對活性(%) 25.4 40.2 49.8 63.2 70.1 95.5 99.5 85.3 68.1 63.7 41.5 20.8 根據(jù)上述實驗結果，初步判斷該α淀粉酶活性最高的條件為________________________________________________________________________。 解析：(1)利用PCR技術擴增α淀粉酶基因前，需先獲得細菌的基因組DNA作為模板，并依據(jù)α淀粉酶基因兩端的部分核苷酸序列合成兩條引物。(2)利用PCR技術擴增DNA時，只能從3′端延伸DNA子鏈，為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接，需在引物的5′端加上限制性酶切位點，并且要注意在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點，這樣既能防止目的基因、載體的自身連接，又能確保目的基因與表達載體的定向連接。(3)PCR技術包括變性、退火(復性)和延伸三步，變性溫度決定PCR反應中雙鏈DNA的解鏈，且時間很短；退火(復性)時引物結合到互補的DNA單鏈上，退火(復性)溫度由引物復性溫度決定，其溫度設定與引物的長度、堿基組成及濃度等有關；延伸時間與產(chǎn)物片段的長度有關，產(chǎn)物在1 kb以內的延伸時間為1 min左右，3～4 kb的延伸時間為3～4 min。(4)圖中虛線框內共含有24個堿基，mRNA上3個相鄰的堿基編碼1個氨基酸，故共包含8個密碼子。虛線框后的第1個密碼子的第1個堿基是U，第2和第3個堿基各有4種可能性，因此共有16種可能性。題干表明控制α淀粉酶的基因有1 656個堿基對，說明圖中虛線框后的第1個密碼子肯定不是終止密碼子(3種終止密碼子為UAA、UAG、UGA)，故虛線框后第1個密碼子實際最多可能性有16－3＝13(種)。(5)分析表格中的數(shù)據(jù)，酶相對活性最高為99.5%，對應的條件是pH為8.5，緩沖液為50 mmol/L TrisHCl。 答案：(1)基因組DNA　(2)5′　使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連　(3)②?、蕖?4)8　13　(5)pH為8.5，緩沖液為50 mmol/L TrisHCl 考點三　基因工程的應用與蛋白質工程 一、基因工程的應用 1．植物基因工程：培育抗蟲轉基因植物、抗病轉基因植物和抗逆轉基因植物；利用轉基因改良植物的品質；利用植物生產(chǎn)藥物等。 2．動物基因工程：用于提高動物生長速度；用于改善畜產(chǎn)品品質；用轉基因動物生產(chǎn)藥物；用轉基因動物作器官移植的供體等。 3．基因工程藥物 (1)來源：利用轉基因的“工程菌”來生產(chǎn)的藥物。 (2)種類：細胞因子、抗體、疫苗、激素等。 4．基因治療 (1)概念：把正?；驅氩∪梭w內，使該基因的表達產(chǎn)物發(fā)揮功能， 從而達到治療疾病的目的，這是治療遺傳病的最有效的手段。 (2)類型：體外基因治療和體內基因治療。 二、蛋白質工程 (1)操作手段：基因修飾或基因合成。 (2)結果：對現(xiàn)有蛋白質進行改造或制造出新的蛋白質。 (3)設計流程 ―→―→―→ [基礎自測] 1．判斷下列敘述的正誤 (1)將人的干擾素基因重組到質粒后導入大腸桿菌，獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株(√) (2)利用乳腺生物反應器能夠獲得一些重要的醫(yī)藥產(chǎn)品，如人的血清白蛋白，這是因為將人的血清白蛋白基因導入了動物的乳腺細胞中() (3)由大腸桿菌工程菌獲得人的干擾素后可直接應用() (4)蛋白質工程的目的是改造或合成人類需要的蛋白質(√) (5)蛋白質工程可以合成自然界中不存在的蛋白質(√) (6)蛋白質工程是在分子水平上對蛋白質分子直接進行操作，定向改變分子的結構() 2．填寫蛋白質工程流程圖中字母代表的含義 A．轉錄，B.翻譯，C.分子設計，D.氨基酸序列，E.預期功能。 1．體外基因治療與體內基因治療的區(qū)別 方法 比較　　 體外基因治療 體內基因治療 不同點 途徑 從患者體內獲得某種細胞→體外完成基因轉移→篩選、細胞擴增→輸入體內 直接向患者體內組織細胞中轉移基因 特點 操作復雜，但效果可靠 方法較簡單，但效果難以控制 相同點 都是將外源基因導入靶細胞，以糾正缺陷基因，目前兩種方法都處于臨床試驗階段 2．基因治療與基因診斷的比較 原理 操作過程 進展 基因治療 基因表達 利用正常基因導入有基因缺陷的細胞中，以表達出正常性狀來治療(疾病) 臨床試驗 基因診斷 堿基互 補配對 制作特定DNA探針與病人樣品DNA混合，分析雜交帶情況 臨床應用 3.蛋白質工程與基因工程的關系 項目 區(qū)別與聯(lián)系 蛋白質工程 基因工程 區(qū)別 過程 預期蛋白質功能→設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列 獲取目的基因→構建基因表達載體→將目的基因導入受體細胞→目的基因的檢測與鑒定 實質 定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質 定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類所需的類型或生物產(chǎn)品 結果 可生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質 只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質 聯(lián)系 ①蛋白質工程是在基因工程基礎上延伸出來的第二代基因工程 ②基因工程中所利用的某些酶需要通過蛋白質工程進行修飾、改造 [對點落實] 1．(2019大慶質檢)鐮刀型細胞貧血癥是一種單基因遺傳病，患者的血紅蛋白分子β肽鏈第6位氨基酸谷氨酸被纈氨酸代替，導致功能異常?；卮鹣铝袉栴}： (1)異常血紅蛋白的氨基酸序列改變的根本原因是編碼血紅蛋白基因的________________序列發(fā)生改變。 (2)將正常的血紅蛋白基因導入患者的骨髓造血干細胞中，可以合成正常的血紅蛋白達到治療的目的。此操作________(填“屬于”或“不屬于”)蛋白質工程，理由是該操作________________________________。 (3)用基因工程方法制備血紅蛋白時，可先提取早期紅細胞中的________，以其作為模板，在________酶的作用下反(逆)轉錄合成cDNA。cDNA與載體需在限制酶和________酶的作用下，構建基因表達載體，導入受體菌后進行表達。 (4)檢測受體菌是否已合成血紅蛋白，可從受體菌中提取____________，用相應的抗體進行________________雜交，若出現(xiàn)雜交帶，則表明該受體菌已合成血紅蛋白。 解析：(1)編碼血紅蛋白的基因中堿基對的替換導致編碼的氨基酸種類改變。(2)蛋白質工程通過基因修飾或基因合成，實現(xiàn)對現(xiàn)有蛋白質的改造或制造新蛋白質，由于該操作中沒有對蛋白質或基因進行改造，因此不屬于蛋白質工程。(3)因血紅蛋白基因只在早期紅細胞中表達，所以可從其中提取mRNA，以mRNA為模板，在逆轉錄酶的作用下，反(逆)轉錄合成cDNA。構建基因表達載體需要限制酶和DNA連接酶。(4)目的基因是否表達可以通過從受體菌中提取蛋白質，進行抗原－抗體雜交實驗加以判斷。 答案：(1)堿基對(或脫氧核苷酸)　(2)不屬于　沒有對現(xiàn)有的蛋白質進行改造(或沒有對基因進行修飾)　(3)mRNA(或RNA)　逆轉錄　DNA連接　(4)蛋白質　抗原—抗體 2．(2015全國卷Ⅱ)已知生物體內有一種蛋白質(P)，該蛋白質是一種轉運蛋白，由305個氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質(P1)不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性。回答下列問題： (1)從上述資料可知，若要改變蛋白質的功能，可以考慮對蛋白質的____________進行改造。 (2)以P基因序列為基礎，獲得P1基因的途徑有修飾________基因或合成________基因。所獲得的基因表達時是遵循中心法則的，中心法則的全部內容包括________的復制，以及遺傳信息在不同分子之間的流動，即：____________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)蛋白質工程也被稱為第二代基因工程，其基本途徑是從預期蛋白質功能出發(fā)，通過____________________和________________，進而確定相對應的脫氧核苷酸序列，據(jù)此獲得基因，再經(jīng)表達、純化獲得蛋白質，之后還需要對蛋白質的生物________進行鑒定。 解析：(1)從題中所述資料可知，將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸后，該蛋白質的功能發(fā)生了改變，此過程是通過對構成蛋白質的氨基酸的排列順序進行改造，進而改變了蛋白質的結構，從而改變了蛋白質的功能。(2)在蛋白質工程中，目的基因可以以P基因序列為基礎，對生物體內原有P基因進行修飾，也可以通過人工合成法合成新的P1基因。中心法則的內容如下圖所示： 由圖可知，中心法則的全部內容包括：DNA以自身為模板進行的復制，DNA通過轉錄將遺傳信息傳遞給RNA，最后RNA通過翻譯將遺傳信息表達成蛋白質；在某些病毒中RNA可自我復制(如煙草花葉病毒)，在某些病毒中能以RNA為模板逆轉錄合成DNA(如HIV)，這是對中心法則的補充。(3)蛋白質工程的基本途徑是預期蛋白質功能→設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→合成DNA→表達出蛋白質，經(jīng)過該過程得到的蛋白質，需要對其生物功能進行鑒定，以保證其發(fā)揮正常作用。 答案：(1)氨基酸序列(或結構)(其他合理答案也可) (2)P　P1　DNA和RNA(或遺傳物質)　DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白質(或轉錄、逆轉錄、翻譯) (3)設計蛋白質的結構　推測氨基酸序列　功能 考點四　DNA的粗提取與鑒定 1．實驗原理 (1)提取原理 ①DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同。 ②DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性。 ③DNA不溶于酒精溶液。 (2)鑒定原理： DNA＋二苯胺試劑藍色。 2．實驗流程 [基礎自測] 1．判斷下列敘述的正誤 (1)用兔的成熟紅細胞可提取DNA() (2)進行DNA粗提取和鑒定實驗時，加入洗滌劑后用力進行快速、充分地研磨() (3)洗滌劑能瓦解細胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度() (4)在溶有DNA的 NaCl溶液中，加入二苯胺試劑即呈藍色() (5)在DNA的粗提取與鑒定實驗中，用菜花替代雞血作為實驗材料，其實驗操作步驟相同() (6)實驗中兩次使用蒸餾水的目的不同(√) 2．學透教材、理清原因、規(guī)范答題用語專練 (1)分析DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線，思考如何通過控制NaCl溶液的濃度將DNA與蛋白質等雜質分離。 提示：NaCl溶液濃度為2 mol/L時，DNA溶解，而部分蛋白質發(fā)生鹽析生成沉淀，通過過濾可除去部分蛋白質及不溶于NaCl溶液的雜質。當NaCl溶液稀釋至0.14 mol/L時，DNA析出，過濾可除去溶于NaCl溶液中的部分蛋白質和其他雜質。 (2)下圖為“DNA粗提取和鑒定”實驗的相關操作，請仔細觀察并分析①～④操作的目的分別是什么？ ①_______________________________________________________________________； ②_______________________________________________________________________； ③_______________________________________________________________________； ④_______________________________________________________________________。 提示：①是使雞血細胞吸水漲破釋放出核物質?、谑俏龀鯠NA，去除溶于酒精的雜質?、凼鞘笵NA溶解在2 mol/L NaCl溶液中　④是稀釋NaCl溶液使其濃度接近0.14 mol/L，去除溶于低濃度NaCl溶液的雜質 1．DNA與蛋白質在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 溶解規(guī)律 2 mol/L NaCl溶液 0.14 mol/L NaCl溶液 DNA 溶解 析出 蛋白質 NaCl溶液物質的量濃度從2 mol/L逐漸降低的過程中，溶解度逐漸增大 部分發(fā)生 鹽析沉淀 溶解 2．DNA粗提取與鑒定實驗中的“2、4、4” 加蒸餾 水2次 ①加到雞血細胞液中，使血細胞吸收水破裂； ②加到含DNA的2 mol/L的NaCl溶液中，使NaCl溶液的物質的量濃度下降到0.14 mol/L，使DNA析出 用紗布 過濾4次 ①過濾血細胞破裂液，得到含細胞核物質的濾液； ②過濾溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液； ③濾取0.14 mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物)； ④再次過濾溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液 用NaCl 溶液4次 ①加2 mol/L的NaCl溶液，溶解提取的細胞核物質； ②用0.14 mol/L的NaCl溶液使DNA析出； ③用2 mol/L的NaCl溶液，溶解濾取的DNA黏稠物； ④用2 mol/L的NaCl溶液，溶解絲狀物用于鑒定DNA 3．注意事項 (1)本實驗不能用哺乳動物成熟的紅細胞作實驗材料，原因是哺乳動物成熟的紅細胞無細胞核(無DNA)?？蛇x用雞血細胞作材料。 (2)加入洗滌劑后，動作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫。加入酒精和用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導致DNA分子不能形成絮狀沉淀。 (3)二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定的效果。 (4)提取植物細胞的DNA時，加入的洗滌劑能溶解細胞膜，有利于DNA的釋放；加入食鹽(主要成分是NaCl)的目的是溶解DNA。 (5)在DNA進一步提純時，選用冷卻的95%的酒精的作用是溶解雜質和析出DNA。 [對點落實] 1．(2019南通模擬)對利用雞血進行“DNA的粗提取與鑒定”的實驗，下列敘述正確的是(　　) A．用蒸餾水將NaCl溶液濃度調至0.14 mol/L，濾去析出物 B．可用木瓜蛋白酶純化過濾后研磨液中的DNA C．由于DNA對高溫耐受性較差，故需向DNA濾液中加入冷酒精 D．將絲狀物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺試劑即呈藍色 解析：選B　DNA在濃度為0.14 mol/L NaCl溶液中的溶解度最低，因此用蒸餾水將NaCl溶液濃度調至0.14 mol/L時，DNA析出，應該去除濾液；木瓜蛋白酶能分解蛋白質，但不能分解DNA，因此可用木瓜蛋白酶純化過濾后研磨液中的DNA；由于DNA不溶于酒精，蛋白質溶于酒精，因此可向DNA濾液中加入冷酒精以進一步純化DNA；將絲狀物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺試劑后要經(jīng)過沸水浴才能呈現(xiàn)藍色。 2．圖1、2分別為“DNA的粗提取與鑒定”實驗中部分操作步驟示意圖，下列敘述錯誤的是(　　) A．圖1、2中加入蒸餾水稀釋的目的相同 B．圖1中完成過濾之后保留濾液 C．圖2中完成過濾之后棄去濾液 D．在圖1雞血細胞液中加入少許嫩肉粉有助于去除雜質 解析：選A　圖1中加入蒸餾水的目的是使雞血細胞吸水漲破，圖2中加入蒸餾水的目的是稀釋NaCl溶液，使DNA析出；圖1中加入蒸餾水后，DNA存在于濾液中；圖2中加入蒸餾水后，NaCl溶液濃度降低，DNA析出，所以棄去濾液；嫩肉粉主要成分是蛋白酶，雞血細胞液中加入少許嫩肉粉可將蛋白質水解成小分子肽或氨基酸，有利于除去蛋白質。  　 　　　課堂一刻鐘 1．(2018北京高考)用Xho Ⅰ和Sal Ⅰ兩種限制性核酸內切酶同一DNA片段，酶切位點及酶切產(chǎn)物分離結果如圖。以下敘述不正確的是(　　) 易錯探因——審題不細 解答本小題可因審題不細致，誤認為是XhoⅠ和SalⅠ兩種限制酶同時作用于DNA片段，而不能得出正確答案。這要求學生在平時的練習中養(yǎng)成仔細審題的習慣，必要時可在關鍵部位進行標注。 　 A．圖1中兩種酶識別的核苷酸序列不同 B．圖2中酶切產(chǎn)物可用于構建重組DNA C．泳道①中是用SalⅠ處理得到的酶切產(chǎn)物 D．圖中被酶切的DNA片段是單鏈DNA 解析：選D　通過圖1可知，兩種限制性核酸內切酶切割DNA分子的不同部位，說明兩種限制性核酸內切酶識別的核苷酸序列不同；圖2中的酶切產(chǎn)物是DNA分子片段，可用于構建重組DNA；觀察圖1可知，該DNA片段有3個SalⅠ酶切位點，故用SalⅠ處理后，可形成4個DNA分子片段，電泳后出現(xiàn)4條電泳帶，與電泳條帶①對應；限制性核酸內切酶作用的是雙鏈DNA片段，因此圖中被酶切的DNA片段應是雙鏈DNA。 2．(2017北京高考)為了增加菊花花色類型，研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1)，擬將其與質粒(圖2)重組，再借助農桿菌導入菊花中。 下列操作與實驗目的不符的是(　　) A．用限制性核酸內切酶EcoRⅠ和連接酶構建重組質粒 B．用含C基因的農桿菌侵染菊花愈傷組織，將C基因導入細胞 C．在培養(yǎng)基中添加卡那霉素，篩選被轉化的菊花細胞 D．用分子雜交方法檢測C基因是否整合到菊花染色體上 解析：選C　目的基因C和質粒都有可被EcoRⅠ切割的酶切位點，另外需要DNA連接酶將切好的目的基因和質粒連接起來；愈傷組織全能性較高，是理想的植物受體細胞，將目的基因導入植物受體細胞的方法通常為農桿菌轉化法；質粒中含有潮霉素抗性基因，因此選擇培養(yǎng)基中應該加入潮霉素；使用分子雜交方法可檢測目的基因是否整合到受體染色體上。 3．(2018江蘇高考)，下列敘述正確的是(　　) A．在甘蔗莖的組織樣液中加入雙縮脲試劑，溫水浴后液體由藍色變成磚紅色 B．在大豆種子勻漿液中加入斐林試劑，液體由藍色變成紫色 C．提取DNA時，在切碎的洋蔥中加入適量洗滌劑和食鹽，充分研磨，過濾并棄去濾液 D．將DNA粗提物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺試劑，沸水浴后液體由無色變成藍色 解題關鍵——歸納整合 本題綜合了必修①還原糖和蛋白質的鑒定與選修①DNA的提取與鑒定的相關實驗的原理與步驟，意在考查考生的歸納整合和辨別能力。這也啟示我們在復習選修內容時要注意與必修部分的知識相聯(lián)系，多進行歸納整合?！　　　　?　　　　　　　　　　　　　　 　　 解析：選D　甘蔗莖的組織樣液中含有大量的蔗糖，蔗糖屬于非還原糖，與斐林試劑在50～65 ℃的水浴加熱條件下不會產(chǎn)生磚紅色沉淀；大豆種子的勻漿液中含有大量的蛋白質，鑒定蛋白質時應使用雙縮脲試劑，雙縮脲試劑在常溫下能與蛋白質發(fā)生反應，生成紫色的絡合物；提取DNA時，在切碎的洋蔥中加入適量的洗滌劑和食鹽，進行充分地研磨，過濾后收集濾液；在沸水浴條件下，DNA與二苯胺試劑反應呈現(xiàn)藍色。 4．(2014江蘇高考)下列，錯誤的是(　　) A．酵母和菜花均可作為提取DNA的材料 B．DNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸餾水 C．向雞血細胞液中加蒸餾水攪拌，可見玻棒上有白色絮狀物 D．DNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱，冷卻后變藍 易錯探因——知識不全 本題考查對“DNA的粗提取和鑒定”實驗的原理、實驗材料的選擇、實驗采用的試劑及試劑的作用等的記憶，需要考生識記的細節(jié)較多，考生在平時的學習過程中要注意積累。　　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　 　　 解析：選C　原則上含DNA的生物材料都可用來提取DNA，只是選用DNA含量高的生物組織，成功的可能性更大；DNA在2 mol/L NaCl溶液和蒸餾水中溶解度都較大；向雞血細胞液中加蒸餾水攪拌，雞血細胞會吸水破裂，但在蒸餾水中不會析出DNA；DNA溶液加入二苯胺試劑后需沸水浴加熱，待冷卻后溶液變藍。 5．(2018全國卷Ⅰ)回答下列問題： (1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質粒重組后導入大腸桿菌細胞中進行了表達。該研究除證明了質?？梢宰鳛檩d體外，還證明了________________________________________________________________________ ____________________________________________________(答出兩點即可)。 (2)體外重組的質粒可通過Ca2＋參與的________方法導入大腸桿菌細胞；而體外重組的噬菌體DNA通常需與______________組裝成完整噬菌體后，才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNA導入宿主細胞。在細菌、心肌細胞、葉肉細胞中，可作為重組噬菌體宿主細胞的是________。 (3)真核生物基因(目的基因)在大腸桿菌細胞內表達時，表達出的蛋白質可能會被降解。，在實驗中應選用________________的大腸桿菌作為受體細胞，在蛋白質純化的過程中應添加________的抑制劑。 解題關鍵——信息獲取 解答本小題應先根據(jù)“蛋白質會被降解”的信息，再根據(jù)酶的專一性原理可推測大腸桿菌體內含有分解該蛋白質的酶，以此作為突破口即可成功解答本小題。　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　 解析：(1)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質粒重組后導入大腸桿菌中，該過程利用的技術是轉基因技術。該研究除了證明質?？勺鳛檩d體外，還證明了體外重組的質?？梢赃M入受體細胞，真核生物的基因可在原核細胞中表達等。(2)重組質粒導入大腸桿菌細胞可采用Ca2＋參與的轉化方法；體外重組噬菌體要通過將體外重組的噬菌體DNA和外殼蛋白(或噬菌體蛋白)進行組裝獲得；因為噬菌體是專門寄生在細菌中的病毒，所以宿主細胞應選用細菌。(3)為防止蛋白質被降解，在實驗中應選用蛋白酶缺陷型的大腸桿菌作為受體細胞；在蛋白質純化過程中，為防止目的蛋白質被降解，需要添加蛋白酶的抑制劑。 答案：(1)體外重組的質?？梢赃M入受體細胞；真核生物基因可在原核細胞中表達　(2)轉化　外殼蛋白(或答噬菌體蛋白)　細菌　(3)蛋白酶缺陷型　蛋白酶 6．(2018全國卷Ⅱ)某種熒光蛋白(GFP)在紫外光或藍光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細胞中目的基因的表達。某科研團隊甲)，并將其插入質粒P0，構建了真核表達載體P1，其部分結 解題關鍵——信息獲取 本題結合新情景、新材料考查考生從題干及題圖中獲取信息的能力。在解答此類問題時應注重信息獲取和結合已有的知識理解、應用信息?！　　　　?　　　　　　　　　　　　　 　　 回答下列問題： (1)據(jù)圖推斷，該團隊在將甲插入質粒P0時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是______________。使用這兩種酶進行酶切是為了保證______________，也是為了保證____________________。 (2)將P1轉入體外培養(yǎng)的牛皮膚細胞后，若在該細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細胞中完成了________和________過程。 (3)為了獲得含有甲的牛，該團隊需要做的工作包括：將能夠產(chǎn)生綠色熒光細胞的________移入牛的______________中、體外培養(yǎng)、胚胎移植等。 (4)為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細胞中，某同學用PCR方法進行鑒定，在鑒定時應分別以該牛不同組織細胞中的________(填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”)作為PCR模板。 解析：(1)由題意可知，L1基因和GFP基因形成了L1GFP融合基因(簡稱為甲)，題圖中顯示了四個酶切位點，當將L1GFP融合基因插入質粒P0時，可用E1和E4限制酶進行酶切，用這兩種酶進行酶切不會破壞甲的完整性，同時能保證甲按照正確的方向與載體連接。(2)若在牛皮膚細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1GFP融合基因得到表達，即目的基因在受體細胞中通過轉錄和翻譯合成了熒光蛋白。(3)為了獲得含有甲的牛，可將含有目的基因的細胞的細胞核移入牛的去核卵母細胞中，然后進行體外培養(yǎng)、胚胎移植等。(4)利用PCR技術擴增目的基因，可以檢測目的基因是否存在，PCR擴增的模板是DNA。 答案：(1)E1和E4　甲的完整　甲與載體正確連接　(2)轉錄　翻譯　(3)細胞核　去核卵母細胞　(4)核DNA 7．(2017江蘇高考)金屬硫蛋白(MT)是一類廣泛存在的金屬結合蛋白，某研究小組計劃通過多聚酶鏈式反應(PCR)擴增獲得目的基因，構建轉基因工程菌，用于重金屬廢水的凈化處理。PCR擴增過程示意圖如下，請回答下列問題： (1)從高表達MT蛋白的生物組織中提取mRNA，通過________獲得________用于PCR擴增。 (2)設計一對與MT基因兩端序列互補配對的引物(引物1和引物2)，為方便構建重組質粒，在引物中需要增加適當?shù)腳___________位點。設計引物時需要避免引物之間形成________________，而造成引物自連。 (3)圖中步驟1代表________，步驟2代表退火(復性)，步驟3代表延伸，這三個步驟組成一輪循環(huán)。 (4)PCR擴增時，退火(復性)溫度的設定是成敗的關鍵。退火溫度過高會破壞________________的堿基配對。退火(復性)溫度的設定與引物長度、堿基組成有關，長度相同但____________的引物需要設定更高的退火(復性)溫度。 (5)如果PCR反應得不到任何擴增產(chǎn)物，則可以采取的改進措施有________[填序號：①升高退火(復性)溫度　②降低退火(復性)溫度?、壑匦略O計引物]。 解題關鍵——理解應用 本題主要考查PCR技術的相關知識，要求考生理解PCR的具體過程，以及引物的作用，學會分析引物或溫度改變對PCR結果的影響。 解析：(1)PCR技術可在體外對DNA進行擴增，模板可以是mRNA經(jīng)過逆轉錄獲得的cDNA。(2)設計一對與MT基因兩端序列互補配對的引物(引物1和引物2)時，需在引物中增加適當?shù)南拗菩院怂醿惹忻傅淖R別序列，便于目的基因與質粒的連接。為了避免引物自連，設計引物時需要避免引物之間形成堿基互補配對。(3)根據(jù)PCR的過程可知，圖中步驟1為變性，步驟2為退火(復性)，步驟3為延伸，這三個步驟構成一個循環(huán)。(4)退火(復性)溫度的設定與引物長度、堿基組成有關，過高的退火(復性)溫度會破壞引物與模板的堿基配對。因G、C之間的氫鍵數(shù)多于A、T之間的氫鍵數(shù)，故GC含量高的引物需要設定更高的退火(復性)溫度。(5)如果PCR反應得不到任何擴增產(chǎn)物，可能的原因是退火(復性)溫度過高使擴增效率降低，也可能是未按照目的基因兩端的核苷酸序列來設計引物，因此可以采取的措施是降低退火(復性)溫度、重新設計引物等。 答案：(1)逆轉錄　cDNA　(2)限制性核酸內切酶　堿基互補配對　(3)變性　(4)引物與模板　GC含量高　(5)②③ [學情考情了然于胸] 一、明考情知能力——找準努力方向 考查知識 1.基因工程三種操作工具的特點及作用、基因工程的基本操作程序是常規(guī)考點，難度一般。 2.獲取目的基因的方法、限制酶的選擇及基因表達載體的構建是高頻考點，也是難點、易錯點。 3.DNA的粗提取與鑒定。 考查能力 1.識記能力：主要考查對基因工程操作工具的種類、作用和特點及基本操作程序等的記憶。 2.讀圖能力：如限制酶的選擇及基因表達載體的構建常以圖示為載體進行考查。 3.實驗操作能力：DNA的粗提取的原理、方法、操作步驟等。 4.綜合應用能力：如第3、4、5題，考查考生綜合運用基因工程的相關知識解決相關生物學問題的能力。 二、記要點背術語——匯總本節(jié)重點 1．DNA重組技術的基本工具 (1)基因工程操作的基本工具有限制性核酸內切酶、DNA連接酶和使目的基因進入受體細胞的載體。 (2)限制酶具有特異性，即一種限制酶只能識別DNA分子中某種特定的堿基序列，并在特定的位點上進行切割。 (3)Ecoli DNA連接酶只能連接黏性末端，而T4DNA連接酶既能連接黏性末端也能連接平末端。 (4)質粒是基因工程常用的