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1、實驗一實驗一生物化學與分子生生物化學與分子生物學基本操作物學基本操作一、實驗課紀律一、實驗課紀律1. 課前要預習，課前要預習，不能遲到、早退，不能遲到、早退，進實驗室要求穿白大進實驗室要求穿白大衣，不允許穿拖鞋、背心，不要攜帶食品飲料到教室，衣，不允許穿拖鞋、背心，不要攜帶食品飲料到教室，課堂上應避免大聲喧嘩、打鬧或隨便進出；課堂上應避免大聲喧嘩、打鬧或隨便進出；2. 請假一定要有假條，并經(jīng)年級輔導員簽字才有效；請假一定要有假條，并經(jīng)年級輔導員簽字才有效；3.凡凡曠課三次及以上曠課三次及以上，缺交缺交報告（報告（遲交遲交、抄襲抄襲）三次及）三次及以上者以上者，則不能參加理論課的考試，即本門課程
2、做補考則不能參加理論課的考試，即本門課程做補考處理；處理；4. 實驗前后要清點儀器，實驗前后要清點儀器，損壞要照價賠償；損壞要照價賠償；5. 實驗結(jié)束后要清洗儀器，收拾桌面，禁止實驗結(jié)束后要清洗儀器，收拾桌面，禁止向水池丟棄碎片、廢紙；向水池丟棄碎片、廢紙；6. 每周安排每周安排4人值日，值日生需經(jīng)教師檢查人值日，值日生需經(jīng)教師檢查 同意方可離開，否則按重新值日處理。同意方可離開，否則按重新值日處理。二、清點儀器二、清點儀器1. 試管架試管架 1個個 7 . 10ml量筒量筒 1個個2 . 中試管中試管 20支支 8 . 吸耳球吸耳球 1個個3 . 小試管小試管 10支支 9 . 試管夾試管夾
3、 1個個4 . 燒杯燒杯 1個個 10 . 滴管滴管 1支支5 . 錐形瓶錐形瓶 1個個 11 . 玻璃棒玻璃棒 1支支6 . 漏斗漏斗 1個個實驗結(jié)果實驗結(jié)果（包括：（包括：原始數(shù)據(jù)或現(xiàn)象及數(shù)原始數(shù)據(jù)或現(xiàn)象及數(shù)據(jù)處理）據(jù)處理）討論討論（對原理、（對原理、實驗結(jié)果的探討，思考實驗結(jié)果的探討，思考題的解答等題的解答等）三、實驗報告三、實驗報告1. 實驗名稱，實驗原理，操作步驟實驗名稱，實驗原理，操作步驟四、實驗操作四、實驗操作（一）（一） 刻度吸量管的使用刻度吸量管的使用 ( (二二) ) 渦旋振蕩器的使用渦旋振蕩器的使用（四）（四） 分光光度計的使用（分組）分光光度計的使用（分組）（三）（三）
4、 微量移液器的使用微量移液器的使用（一）（一） 刻度吸量管刻度吸量管1. 最大量程最好等于或稍大于取液最大量程最好等于或稍大于取液量。量。選用原則：選用原則：2. 同一試劑一系列體積時選最大者。同一試劑一系列體積時選最大者。 1.1.選用合適的吸量管（大小和選用合適的吸量管（大小和“專管專專管專用用”）, ,看清刻度的大小、順序（看清刻度的大小、順序（是是自上而下還自上而下還是自下而上，是否要吹）是自下而上，是否要吹） 2.2.讀數(shù)時吸量管要讀數(shù)時吸量管要垂直垂直，視線、凹液面底部和視線、凹液面底部和刻度刻度要在同一水平要在同一水平上上。 3.3.放液時試管或容量瓶要放液時試管或容量瓶要稍傾斜
5、稍傾斜，吸量管尖端，吸量管尖端要要接觸接觸內(nèi)壁內(nèi)壁但但不能插入不能插入容器液體中。容器液體中。 4.4.吸取吸取粘度大粘度大的液體（如血清），放液前要的液體（如血清），放液前要擦擦干干凈吸量管凈吸量管尖部外壁尖部外壁的液體。的液體。注意事項：注意事項：（二）（二）渦旋振蕩器渦旋振蕩器一手扶振蕩器防移動，另一手持容器一手扶振蕩器防移動，另一手持容器45傾傾斜斜，勿將管口對著人，勿將管口對著人輕壓容器至形成旋渦，每次輕壓容器至形成旋渦，每次10秒，反復數(shù)秒，反復數(shù)次次不要突然加力，以防容器內(nèi)的液體濺出。不要突然加力，以防容器內(nèi)的液體濺出。用完關(guān)閉電源用完關(guān)閉電源（三）微量加樣器（俗稱加樣（三）微量
6、加樣器（俗稱加樣槍槍)的使用方法的使用方法v使用方法：使用方法：2. 安裝吸嘴安裝吸嘴：將吸嘴（：將吸嘴（Tip頭）在吸液桿上套牢頭）在吸液桿上套牢 1. 設(shè)定移液量設(shè)定移液量：旋轉(zhuǎn)：旋轉(zhuǎn)“手輪手輪”，使，使“數(shù)輪數(shù)輪”顯示顯示所需值所需值 3. 吸液吸液：按壓按鈕至按壓按鈕至“第一停點位置第一停點位置”，浸入溶，浸入溶液，緩慢放松按鈕，稍停后移出液面液，緩慢放松按鈕，稍停后移出液面 4. 放液放液：按壓推動按鈕至：按壓推動按鈕至“第一停點位置第一停點位置”，稍，稍停再按壓至停再按壓至“第二停點位置第二停點位置”，排盡管嘴殘余液，排盡管嘴殘余液體體5. 吸嘴脫卸吸嘴脫卸:用卸吸嘴按鈕脫卸吸嘴，
7、每次實驗結(jié)用卸吸嘴按鈕脫卸吸嘴，每次實驗結(jié)束后將束后將“數(shù)輪數(shù)輪”調(diào)到其標稱的最大值調(diào)到其標稱的最大值注意事項：注意事項：1. 調(diào)整調(diào)整“數(shù)輪數(shù)輪”的讀數(shù)的讀數(shù)不得超出刻度范圍不得超出刻度范圍。2. 吸不同類型的溶液應吸不同類型的溶液應更換吸嘴更換吸嘴，以防止，以防止 試樣之間的試樣之間的交叉污染交叉污染。 3. 移液器吸液后移液器吸液后嚴禁倒置、平放嚴禁倒置、平放，以免，以免 溶液流入內(nèi)腔，損壞活塞。溶液流入內(nèi)腔，損壞活塞。 A = k Lc （ k為吸光系數(shù)；為吸光系數(shù)；L為液為液層厚度；層厚度；c為溶液的濃度）為溶液的濃度）與溶液與溶液的濃度及液層的厚度成正比。的濃度及液層的厚度成正比。
8、vUV2100型分光光度計操作步驟：型分光光度計操作步驟：1.1.插插頭，開電源，預熱至顯示器顯示插插頭，開電源，預熱至顯示器顯示“546nm 100.0”546nm 100.0”，方可進行測試方可進行測試 2.2.用用鍵將測試方法設(shè)置至鍵將測試方法設(shè)置至A(A(吸光度吸光度) )狀態(tài)狀態(tài)3.3.選擇光源選擇光源W:W:鎢燈鎢燈(335-900nm)(335-900nm)；D:D:氘燈氘燈(200-334nm)(200-334nm)4.4.用用WAVELENGTHWAVELENGTH設(shè)置鍵，設(shè)置樣品波長設(shè)置鍵，設(shè)置樣品波長5 5. . 倒比色液，放比色杯，空白管放在第一個槽位中；比倒比色液，放
9、比色杯，空白管放在第一個槽位中；比色杯的透明壁位于光路上色杯的透明壁位于光路上6 6. . 按按“0A/100%T”0A/100%T”鍵調(diào)鍵調(diào)0A/100%T0A/100%T，此時顯示器顯示的，此時顯示器顯示的“BLA”BLA”直至顯示直至顯示“0.000”0.000”為止為止7 7. . 將測定管依次推（拉）入光路，則分別得到它們的吸將測定管依次推（拉）入光路，則分別得到它們的吸光度值光度值 可用毛刷的儀器（試管、燒杯、錐可用毛刷的儀器（試管、燒杯、錐形瓶等）形瓶等） 毛刷沾洗衣粉刷洗（先內(nèi)后外）毛刷沾洗衣粉刷洗（先內(nèi)后外） 自來水沖洗自來水沖洗 蒸餾水沖洗蒸餾水沖洗23次次 倒置晾干倒置晾
10、干五、五、普通玻璃儀器（試管、燒杯、量筒）普通玻璃儀器（試管、燒杯、量筒） 的洗滌的洗滌六、操作練習（隨機抽查）六、操作練習（隨機抽查）取取3支中試管，按下表加液：支中試管，按下表加液： 管號管號 1 2 3 K2Cr2O7 (mL) 0.40 1.20 2.00 3mmol/L 蒸餾水（蒸餾水（mL） 4.60 3.80 3.00 各管加完后，在振蕩器上振勻，用蒸餾水各管加完后，在振蕩器上振勻，用蒸餾水調(diào)零，測定各管調(diào)零，測定各管440nm吸光度吸光度標準曲線的繪制標準曲線的繪制方法一：用坐標紙手工繪制方法一：用坐標紙手工繪制方法二：利用方法二：利用EXCEL軟件的作圖功能繪軟件的作圖功能繪 制，并可求出回歸方程及相關(guān)制，并可求出回歸方程及相關(guān) 系數(shù)系數(shù)
生物化學：實驗一 實驗基本操作
