分枝桿菌屬細(xì)菌檢驗醫(yī)學(xué)PPT

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微生物學(xué)檢驗,分枝桿菌屬、諾 卡菌屬、放線菌屬鑒定,返回總目錄,本 章 內(nèi) 容,第二節(jié) 諾卡菌屬,學(xué)習(xí)目標(biāo)及重點,學(xué)習(xí)目標(biāo)： 1.掌握結(jié)核分枝桿菌生物學(xué)特征，痰涂片抗酸染色及報告。 2.熟悉結(jié)核菌素試驗的臨床意義；結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌；星形諾卡菌的鑒別要點，諾卡菌與分枝桿菌、棒狀桿菌的鑒別。 3.了解結(jié)核分枝桿菌的致病物質(zhì)；麻風(fēng)分枝桿菌致病性；放線菌屬的生物學(xué)特性、致病及免疫性 本章重點： ★結(jié)核分枝菌的生物學(xué)特性、培養(yǎng)特性 ★結(jié)核分枝菌的微生物學(xué)檢驗 ★結(jié)核分枝菌與其他分枝菌的鑒別,第一節(jié) 分枝桿菌屬,分枝桿菌屬（Mycobacterium）概述 是一類細(xì)長彎曲的桿菌，因有分枝生長的趨勢而得名主要特點 細(xì)長彎曲，分枝狀生長 細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)（分枝菌酸） 常用抗酸染色鑒定，呈抗酸染色陽性（紅色） 引起疾病多呈慢性，且伴肉芽腫,一、結(jié)核分枝菌 (一)生物學(xué)性狀 1.形態(tài)與染色：G+（不易著色），細(xì)長略彎，分枝狀，有莢膜，抗酸染色陽性。菌體外有莢膜 2.培養(yǎng)特性 營養(yǎng)要求較高，最適pH6.5～6.8，在羅氏（Lowenstein-Jensen，L-J）培養(yǎng)基上生長良好 生長緩慢，14～18h分裂1次，在固體培養(yǎng)基上2～5w才出現(xiàn)肉眼可見的菌落 典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣,第一節(jié) 分枝桿菌屬,結(jié)核菌抗酸染色結(jié)果,結(jié)核菌菌落,第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 ３.生化反應(yīng) 不發(fā)酵糖類，觸酶試驗陽性，而熱觸酶試驗陰性——加熱68℃散失活性（區(qū)別非結(jié)核菌） 煙酸合成試驗、硝酸鹽還原試驗、吡嗪酰胺試驗均陽性，可與牛型結(jié)核分枝菌鑒別 ４.抵抗力 對乙醇、濕熱、紫外線、抗結(jié)核藥物（鏈霉素、異煙肼、利福平等）敏感 對干燥、酸（3% HCl或6% H2SO4) 或堿（4% NaOH)、堿性染料（孔雀綠、結(jié)晶紫）、青霉素等抗生素等有抵抗力,第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 ５.變異性 （１）形態(tài)結(jié)構(gòu)變異： 結(jié)核桿菌的L型：顆粒狀（Much顆?！≡钪懈锾m陽性非抗酸性）、絲狀 （２）毒力變異： 卡介苗(BCG)：Calmette和Guérin將牛型分枝桿菌經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒菌株——活疫苗 （３）耐藥性變異： 耐異煙肼及其他抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多,第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 （二）微生物檢驗 1.標(biāo)本：根據(jù)感染部位的不同來采集不同的標(biāo)本，最常用痰液標(biāo)本 2. 標(biāo)本前處理 目前有酸（4%HCl）處理和堿（4%NaOH）處理兩種方法 3.檢驗程序,第一節(jié) 分枝桿菌屬,第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 4.形態(tài)學(xué)檢查 （高壓滅菌后進(jìn)行） （1）直接涂片染色鏡檢 （2）濃縮集菌涂片檢查法 （3）熒光染色：觀察形態(tài) 黃綠色、橙色熒光 （4）初步報告：檢出抗酸分枝桿菌（結(jié)核桿菌？）,第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 （5）報告方式,第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 5.分離培養(yǎng) L-J斜面或平板：生長緩慢，涂片抗酸染色 快速培養(yǎng)系統(tǒng)：自動報告 6.核酸檢測：PCR法,第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 (三)臨床意義 1.致病物質(zhì)：主要與菌體成份有關(guān)。 （1）脂質(zhì),第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 （2）蛋白質(zhì) 誘發(fā)超敏反應(yīng) （3）糖類 抵抗吞噬作用 2.所致疾病 （1）經(jīng)多途徑感染，引起全身各組織結(jié)核病，以肺結(jié)核最多見 （2）類型 原發(fā)感染和繼發(fā)感染 3.免疫性 抗結(jié)核免疫以細(xì)胞免疫為主 ※抗結(jié)核免疫屬帶菌免疫或稱傳染性免疫 ※抗結(jié)核免疫與Ⅳ型超敏反應(yīng)同時出現(xiàn),第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 4.結(jié)核菌素試驗 （1）原理 用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗，以檢測受試者對結(jié)核桿菌是否有細(xì)胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的試驗。 （2）結(jié)核菌素試劑 （PPD 5單位）舊結(jié)核菌素（old tuberculin，OT)，純蛋白衍化物(purified protein derivative，PPD) （3）結(jié)果 48h-72h ,根據(jù)注射部位是否出現(xiàn)紅腫判斷結(jié)果 ＜5mm為陰性 ≥ 5mm為陽性 ＞15mm為強陽性,第一節(jié) 分枝桿菌屬,一、結(jié)核分枝菌 （4）結(jié)核菌素試驗意義 選擇卡介苗接種對象、測定卡介苗接種后的免疫效果 了解人群結(jié)核菌的自然感染率 作為嬰幼兒結(jié)核病的輔助診斷 測定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能,第一節(jié) 分枝桿菌屬,二、麻風(fēng)分枝菌 1.生物學(xué)特性 1873年挪威學(xué)者Armauer Hansen從麻風(fēng)患者皮膚結(jié)節(jié)中發(fā)現(xiàn)，又名Hansen桿菌，具抗酸性 細(xì)胞內(nèi)寄生，有麻風(fēng)桿菌寄生的細(xì)胞呈泡沫狀，稱為麻風(fēng)細(xì)胞 體外人工培養(yǎng)尚未成功 犰狳是動物感染模型,第一節(jié) 分枝桿菌屬,麻風(fēng)分枝菌,犰狳,第一節(jié) 分枝桿菌屬,二、麻風(fēng)分枝菌 2.所致疾病: 傳播途徑：主要是密切接觸 麻風(fēng)：侵害皮膚、粘膜和神經(jīng)系統(tǒng) 臨床分型：（臨床表現(xiàn)、病理特征和菌檢結(jié)果） 瘤型麻風(fēng)（占20%~30%，傳染性強） 結(jié)核樣型麻風(fēng)（占60%~70%，傳染性弱） 界線類綜合癥（占5%，可轉(zhuǎn)化為以上兩型） 3.防治原則：早發(fā)現(xiàn)（檢驗時，標(biāo)本通常采用刮片），早隔離、早治療，治療藥物主要有砜類（氨苯砜、苯丙砜、醋氨苯砜）、利福平、氯苯吩嗪及丙硫異煙胺,第一節(jié) 分枝桿菌屬,麻風(fēng)“獅面”,第一節(jié) 分枝桿菌屬,三、非典型分枝菌 1.非典型分枝桿菌：除人型結(jié)核分枝桿菌、牛型結(jié)核分枝桿菌與麻風(fēng)分枝桿菌以外的分枝桿菌菌群，也稱為非結(jié)核分枝桿菌 2.致病性：多存在于自然界，為條件致病菌 3.分類：根據(jù)菌落色素和生長速度分為4組 第Ⅰ組（RunyonⅠ群）：光產(chǎn)色菌 第Ⅱ組（Runyon Ⅱ群）：暗產(chǎn)色菌 第Ⅲ組（Runyon Ⅲ群）：不產(chǎn)色菌 第Ⅳ組（Runyon Ⅳ群）：迅速生長菌,光產(chǎn)色菌,第一節(jié) 分枝桿菌屬,4.代表菌種 第Ⅰ組（RunyonⅠ群）：光產(chǎn)色菌：堪薩斯分枝桿菌、猿猴分枝桿菌 第Ⅱ組（Runyon Ⅱ群）：暗產(chǎn)色菌：蟾蜍分枝桿菌、蘇加分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌 第Ⅲ組（Runyon Ⅲ群）：不產(chǎn)色菌：鳥分枝桿菌復(fù)合群(Mlvium complex ,MAC) 、瑪爾摩分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌 第Ⅳ組（Runyon Ⅳ群）：迅速生長菌：龜分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、偶發(fā)分枝桿菌,返回章內(nèi)容,第一節(jié) 分枝桿菌屬,第二節(jié) 諾卡菌屬,一、諾卡菌屬 （一）種類：諾卡菌屬（Nocordio ）中有22個種，廣泛分布于土壤，與醫(yī)學(xué)有關(guān)的13個菌種： 膿腫諾卡菌 星形諾卡菌 新星諾卡菌 非洲諾卡菌 豚鼠耳炎諾卡菌 少食諾卡菌 巴西諾卡菌 假巴西諾卡菌 短鏈諾卡菌 南非諾卡菌 肉色諾卡菌 老兵諾卡菌 皮瘟諾卡菌 諾卡菌屬主要形成基內(nèi)菌絲，菌絲纖細(xì)，一般無氣生菌絲。少數(shù)菌產(chǎn)生一薄層氣生菌絲，成為孢子絲?；鶅?nèi)菌絲和孢子絲均有橫隔，斷裂后形成不同長度的桿形,一、諾卡菌屬 （二）生物學(xué)特性 1.專性需氧 2.菌體內(nèi)含分枝菌酸 3.分布：土壤中，多數(shù)為非致病菌 4.常見致病菌： 星形諾卡菌（N. asteroides） 巴西諾卡菌（N. brasiliensis） 豚鼠諾卡菌（N. caviae） 5.培養(yǎng)：菌落表面多皺、致密、干燥或濕潤，呈黃、黃綠、橙紅等色。用接種環(huán)一觸即碎,第二節(jié) 諾卡菌屬,（三）星形諾卡菌 1.形態(tài)：球形、絲狀（與以色列放線菌相似，但末端不膨大） 革蘭染色：陽性 抗酸染色：陽性 脫色時間延長→陰性(與TB區(qū)別) 2. 類似“硫磺樣顆?！保ǚQ色素顆粒） 滲出液、痰或膿汁中有時可見淡黃、紅色或黑色小顆粒,美藍(lán)染色,G+絲狀，弱抗酸性,第二節(jié) 諾卡菌屬,（三）星形諾卡菌 3.培養(yǎng)： 營養(yǎng)要求：不高（沙氏或普通瓊脂培養(yǎng)基） 氣體環(huán)境：需氧，有氣生菌絲 培養(yǎng)溫度：室溫或37℃ 生長速度：緩慢生長，約1w 色素：星形諾卡菌：黃色或深橙色，無白色菌絲 巴西諾卡菌：有白色菌絲 菌絲斷裂： 5d后→鏈球狀或鏈桿狀（放線菌屬：24h開始) 培養(yǎng)特征：菌落：有皺褶、顆粒狀 液體：菌膜,第二節(jié) 諾卡菌屬,（三）星形諾卡菌 4.鑒定： （1）“硫磺樣顆?！眽浩?（2）取痰、腦脊液、膿汁 涂片→革蘭染色及抗酸染色 （3）分離培養(yǎng) 沙保弱或普通瓊脂培養(yǎng)基 （4）生化試驗,第二節(jié) 諾卡菌屬,（四）巴西諾卡菌 巴西諾卡菌及星形諾卡菌因侵入皮下組織，引起慢性化膿性肉芽腫，表現(xiàn)為皮下腫脹、膿腫及多發(fā)性瘺管，如發(fā)生于足部或腿部，稱足分枝菌?。∕ycotoma）。 本病也可能由馬杜拉放線菌及某些真菌引起 該菌七葉苷、黃嘌呤、肌醇、甘露醇均陽性，可與星形諾卡菌區(qū)別,返回章內(nèi)容,第二節(jié) 諾卡菌屬,第三節(jié) 放線菌屬,一、放線菌屬 1.致病：放線菌能引起牛和人的放線菌?。ˋctinomycosis）的病原菌，屬于內(nèi)源性感染。因菌落生長呈放射狀而得名。 2.常見種類： 衣氏放線菌(A.israelii) (最多見) 牛放線菌(A.bouis) 內(nèi)氏放線菌（A.naeslundii) 黏液放線菌(A.viscous) 齲齒放線菌（A.adontolyticus),3.培養(yǎng)：厭氧或微需氧 氣體環(huán)境：5％ CO2 培養(yǎng)基：腦心浸液瓊脂平板 溫度與時間：37℃，24h～48h 菌落:灰白色蜘蛛狀、不規(guī)則結(jié)節(jié)狀或臼齒狀菌落, 初次分離時(粗糙) 4.生化特性：葡萄糖(＋) 甘露醇(＋)吲哚(－) 溶血(－) 觸酶試驗(－)(黏液放線菌除外),第三節(jié) 放線菌屬,放線菌菌落特點,第三節(jié) 放線菌屬,5.鑒定 （1）形態(tài)染色 G+、非抗酸性絲狀菌 （2）培養(yǎng)困難，厭氧或微需氧 （3）生化反應(yīng) 不典型 （4）硫磺樣顆粒（菌落） 壓片或組織切片，鏡下見顆粒呈菊花狀,硫磺樣顆粒(sulfur granule),第三節(jié) 放線菌屬,6.臨床意義 為正常菌群，如無并發(fā)感染一般為慢性無痛性經(jīng)過（放線菌?。? 常可引起膿腫和瘺管 膿腫或瘺管內(nèi)容物可檢出“硫磺樣顆?！?返回章內(nèi)容,第三節(jié) 放線菌屬,