自身免疫性疾病及其免疫檢測.ppt

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常見自身免疫性疾病的自身抗體檢測 自身抗體 autoantibody 是指抗自身細胞內 細胞表面和細胞外抗原的免疫球蛋白 是自身免疫和自身免疫病重要特征之一 某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體 譜 分類 臟器特異性自身抗體臟器非特異性自身抗體 自身免疫性疾病的重要標志高滴度存在于自身免疫性疾病患者與疾病的活動性相關參與免疫病理性損傷 一 自身抗體的特性 自身抗體免疫球蛋白補體淋巴細胞細胞因子 自身免疫性疾病的主要實驗檢測 1948年Haragraves等發(fā)現(xiàn)LE細胞現(xiàn)象 1957年Holborow等應用IIF檢測ANA 1961年Beck等發(fā)現(xiàn)ANA不同熒光染色模型 60 70年代IIF ID CIE應用 新的自身抗體 1979年Towbin等應用免疫印跡技術檢測自身抗體 80年代IB RIP應用 蛋白多肽水平認識自身抗原 1987年DNA基因重組技術開始應用自身抗體研究 近十年應用分子生物學技術 自身抗體研究發(fā)展簡史 抗核抗體 ANA 抗可提取性核抗原抗體 ENA 抗中性粒細胞胞漿抗體 ANCA 類風濕因子 RF 抗角蛋白抗體 AKA 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體 抗CCP抗體 抗心磷脂抗體 ACLA 常檢測的自身抗體 常見自身免疫性疾病的標志抗體 間接免疫熒光法 IIF ELISA免疫印跡法 Western blot 酶免疫斑點法 檢測自身抗體常用的方法 抗核抗體 以真核細胞 如HEp 2細胞 肝細胞 的各種細胞核成分為靶抗原所檢測的自身抗體的總稱 二 抗核抗體的檢測與應用 抗核抗體譜 以首先檢出該抗體的患者名字命名 如抗Sm 抗Sa抗體等 以相關疾病命名 如抗Scl 70 抗SS A 抗SS B抗體等 以抗原的部位命名 如抗核仁抗體 抗線粒體抗體 抗核膜抗體 抗細胞漿抗體等 以抗原的化學名稱分類命名 如抗DNA 抗RNP 抗組蛋白抗體 抗核小體抗體等 抗核抗體譜的分類和命名 間接免疫熒光法 indirectimmunofluorescence IIF 酶免疫斑點法ELISA免疫印跡法 Western blot 抗核抗體檢測方法 間接免疫熒光法示意圖 細胞核細胞漿細胞骨架細胞周期均質型核糖體型肌蛋白型中心體型斑點型線粒體型波形纖維蛋白型紡綞體型核仁型高爾基體型細胞角蛋白型紡綞絲型著絲點型溶酶體型原肌球蛋白型中間體型周邊型顆粒型紐帶蛋白型PCNA型核點型 dots IIF檢測ANA熒光染色模型 斑點型 nRNP Sm 高滴度的抗U1 nRNP為MCTD的特征 抗Sm抗體對SLE具有高度特異性 斑點型 SSA SSB 抗SSA最常出現(xiàn)于SS及新生兒紅斑狼瘡 100 抗SSB抗體幾乎僅見于女性 可出現(xiàn)于SS和SLE 均質型 抗dsDNA抗體抗組蛋白抗體 histone 抗ssDNA抗體抗核小體抗體 nucleosome 周邊型 可見于膠原病 PBC CAH等患者 核點型 DOTS 見于SLE SS PBC 風濕病 抗著絲點型 PSS局限型標志抗體 抗原纖維蛋白型 僅見于5 10 的PSS 男性高于女性 抗RNA多聚酶 型抗體 僅見于硬皮病患者 陽性率為4 抗PM Scl PM 1 抗體 見于重疊綜合征 多發(fā)性肌炎PM 皮肌炎DM 彌漫性PSS 抗Scl 70型 PSS彌漫型的標志抗體 增殖細胞核抗原 型 PCNA SLE特異性抗體 與發(fā)生彌漫性增殖性腎小球腎炎相關 抗核糖體P蛋白 rib P 抗體 抗線粒體抗體 AMA SLE標志抗體 原發(fā)性膽汁性肝硬化標志抗體 抗Jo 1抗體 抗高爾基體抗體 多發(fā)性肌炎 PM 標志抗體 偶見于SLE和SS 抗肌動蛋白抗體 見于自身免疫性慢性活動型肝炎 抗雙鏈DNA抗體 抗dsDNA抗體與細胞核DNA 外圍區(qū) 脫氧核糖磷酸框架結合 抗dsDNA抗體是SLE患者的特征性標志抗體 其抗體滴度與疾病的活動程度有相關性 抗體滴度的動態(tài)測定為監(jiān)控治療提供了有效的實驗室手段 抗雙鏈DNA抗體 檢測方法及應用 間接免疫熒光檢測 是目前國內外臨床常規(guī)檢測抗dsDNA抗體最常用的方法 抗dsDNA抗體診斷SLE的特異性可達95 100 但其敏感性僅為30 50 因此抗dsDNA抗體陰性不能排除SLE的診斷 檢測方法及應用 抗dsDNA抗體 SLE特異性抗體 與病情活動度相關 抗核小體抗體 核小體 nucleosome 是真核生物細胞核染色質的基本單位 凋亡細胞是核小體的重要來源 當SLE患者的吞噬細胞對凋亡細胞的清除能力受損或降低 導致核小體在患者體內大量存積 激活B細胞產生抗核小體抗體 Antinucleosomeantibody AnuA 檢測及應用 AnuA的檢測通常采用ELISA檢測法 AnuA具有同抗ds DNA抗體相同的診斷特異性 可達到95 在系統(tǒng)性硬化 SSc 病中可有20 50 低濃度陽性率 其他自身免疫性疾病中該抗體均為陰性 AnuA的表達與SLE病情活動分數(shù)相關 檢測及應用 抗ENA抗體譜 可提取核抗原抗體的總稱臨床常檢測的抗ENA抗體譜主要包括 抗Sm抗U1 RNP抗SSA抗SSB抗Jo 1抗Scl 70抗rib P蛋白 三 抗ENA抗體譜的檢測與應用 抗可提取性核抗原 ENA 抗體 雙向免疫擴散 ID 對流免疫電泳 CIE 免疫印跡法 Western blot ELISA酶免疫斑點法 ENA檢測方法 免疫印跡法 SDS PAGE電泳 轉移電泳 酶免疫檢測 免疫印跡法 抗可提取性核抗原 ENA 抗體 抗Sm抗體 SLE標記性抗體 20 30 抗nRNP抗體 MCTD95 100 高滴度 抗SSA抗體 PSS60 75 其它CTD 抗SSB抗體 PSS10 40 其它CTD 抗Scl 70抗體 SSc25 75 標記性抗體 抗Jo 1抗體 PM DM25 標記性抗體 抗rRNP抗體 SLE特異性抗體 10 30 抗中性粒細胞胞漿抗體 anti neutrophilcytoplasmicautoantibodies ANCA 是一組以人中性粒細胞胞漿成分為靶抗原 與臨床多種小血管炎性疾病密切相關的自身抗體 對系統(tǒng)性血管炎 炎癥性腸病等疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義 四 與小血管炎相關的自身抗體檢測與應用 熒光染色型 靶抗原 胞漿型 cANCA 蛋白酶3 PR3 殺菌 通透性增高蛋白 BPI 核周型 pANCA 髓過氧化物酶 MPO 組織蛋白酶G Cath G 乳鐵蛋白 LF 白細胞彈性蛋白酶 HLE 非典型型 aANCA 兼有兩種特性 ANCA熒光染色型與靶抗原 周邊型抗中性粒細胞胞漿抗體 pANCA 主要見于炎癥性腸病 潰瘍性結腸炎和克羅恩病 胞漿型抗中性粒細胞胞漿抗體 cANCA 主要見于Wegener s肉芽腫及微小多動脈炎 ANCA臨床應用 髓過氧化物酶 MPO 與顯微鏡下多血管炎 壞死性新月體型腎小球腎炎 過敏性肉芽腫性血管炎相關 殺菌 通透性增高蛋白 BPI 主要見于肺部炎癥性疾病并與長期慢性綠膿桿菌感染有一定關系 蛋白酶3 PR3 與Wegener s肉芽腫 WG 密切相關 僅cANCA診斷WG的特異性大于90 聯(lián)合PR3可超過95 活動期幾乎100 陽性 組織蛋白酶G Cath G 白細胞彈性蛋白酶 HLE 乳鐵蛋白 LF 可見于SLE IBD PBC PSC等 RA早期診斷相關自身抗體 抗角質層蛋白抗體 AKA 1979年Young等報告靶抗原 filaggrin 40KD 抗核周因子 APF 1964年Nienhuis等報告靶抗原 profilaggrin 37 41KD 及其降解產物 抗聚角蛋白微絲蛋白抗體 AFA 1993年Simon等報告靶抗原 filaggrin 40KD 抗Sa抗體 1994年Despres等報告靶抗原 50 55KD非酰基多肽 半抗原 瓜氨酸 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體 抗CCP抗體 1998Schellekens 五 與RA相關自身抗體的檢測與應用 類風濕因子 rheumatoidfactor RF 為抗變性IgGFc的自身抗體 主要是IgM型致病機理 RF與體內變性IgG結合形成免疫復合物 激活補體或被吞噬細胞吞噬 產生炎性介質導致組織炎性損傷 使患者發(fā)生骨關節(jié)炎及血管炎 1 膠乳顆粒凝集實驗定性 半定量 敏感性和特異性不高 測定IgM RF2 速率散射比濁法 ARRAY IMAGE 定量 準確 快速 測定IgM RF3 ELISA定量 準確 可測定不同類型的RF 檢測方法 1 RF在RA SLE PSS等多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出 臨床應用 2 RF滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關 IgM RF效價 80IU ml并伴有嚴重關節(jié)功能障礙時通常提示患者預后不良 3 IgG RF與RA患者的滑膜炎 血管炎和關節(jié)癥狀密切相關 常伴隨IgM RF同時出現(xiàn) 在正常人及非RA患者中很難檢出 4 IgA RF與RA患者關節(jié)癥狀的嚴重程度及骨質破壞有顯著相關性 AKA主要見于RA 陽性率36 59 特異性95 99 其出現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn) 高滴度可預示較嚴重的RA類型 抗角蛋白抗體 AKA 常用方法 ELISA臨床意義 RA特異性自身抗體 敏感性65 85 特異性為94 98 高濃度抗CCP抗體是RA發(fā)生關節(jié)侵蝕的危險因子之一 定量檢測有助于判斷預后 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體 抗CCP抗體 自身免疫性肝病是與自身免疫密切相關的特殊類型的肝病 其診斷和治療完全不同于一般的慢性病毒性肝炎自身免疫性肝炎 AIH 原發(fā)性膽汁性肝硬化 PBC 原發(fā)性硬化性膽管炎 PSC 重疊綜合征 六 與自身免疫性肝病相關自身抗體的檢測與應用 在多種累及肝膽疾患的自身免疫疾病中 自身抗體在發(fā)病機制中起重要作用 自身免疫性肝病具有相對特異性自身抗體譜 自身抗體檢測對自身免疫性肝病的診斷及鑒別診斷具有重要意義 自身免疫性肝病與自身抗體 自身免疫性肝病及其自身抗體譜 疾病類型相關自身抗體自身免疫性肝炎 AIH 型AIHANA ASMA 型AIHanti LKM 1anti LC 1 型AIHanti SLA 可溶性肝抗原 原發(fā)性膽汁性肝硬化 PBC AMA M2 M4 M8 M9 anti gp210 sp100ACA原發(fā)性硬化性膽管炎 PSC pANCA 自身免疫性肝病及其自身抗體譜 抗甲狀腺球蛋白抗體 TGAb 抗甲狀腺過氧化物酶抗體 TPOAb 抗促甲狀腺素受體抗體 TSH RAb 七 與橋本甲狀腺炎相關自身抗體的檢測與應用 重癥肌無力 MG 自身抗體譜 抗骨胳肌抗體 ASA 抗乙酰膽堿受體 AchR 抗體多發(fā)性硬化 MS 自身抗體譜 抗髓鞘堿性蛋白 MBP 抗體 抗腦苷脂抗體 抗神經結苷脂抗體急性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經病 格林 巴利綜合征 自身抗體譜 抗髓鞘糖脂抗體 抗髓鞘硫脂抗體 八 與神經系統(tǒng)自身免疫性相關自身抗體的檢測與應用 大多數(shù)自身免疫患者血清中可測到高效價的自身抗體 特別是有些自身抗體的檢測已納入某些自身免疫性疾病的診斷標準中 自身抗體檢測已是臨床免疫檢測的一項重要的實驗室指標 第五節(jié)自身抗體檢測的臨床應用 篩查性試驗與確診性試驗項目的合理組合選擇相關的自身抗體檢測項目切忌盲目的全面檢測實驗中應同步設置陽性和陰性對照 一 自身抗體檢測的一般原則 95 99 可排除SLE SLE治療緩解病情特重 大量IC沉積消耗抗體 低滴度常見于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可作為診斷SLE的依據(jù)ENA抗體譜檢測 不能排除抗dsDNA Sm rib抗體 可幫助診斷 ANA初篩 二 實驗室方法的選擇及結果的確認 ANA在自身免疫性疾病中的檢出率 第六節(jié)自身免疫性疾病的相關實驗檢測 在自身免疫病患者體內 因有多種自身抗原的存在 自身抗體的種類也可有交叉重疊現(xiàn)象 故實驗中檢測出多種自身抗體陽性時還必須結合臨床癥狀進行綜合分析 自身抗體 免疫球蛋白 II型及III型自身免疫病消耗補體 補體 監(jiān)測病情 一 免疫球蛋白及補體檢測及臨床意義 淋巴細胞數(shù)量及功能 反應患者體內免疫細胞狀態(tài) 二 淋巴細胞檢測及臨床意義 細胞因子介導和調節(jié)免疫應答及炎癥反應或應用治療 監(jiān)測病情或指導治療 三 細胞因子檢測及臨床意義 CIC與多種自身免疫病相關 輔助診斷疾病 四 循環(huán)免役復合物檢測及臨床意義 1 區(qū)分自身免疫和自身免疫性疾病 2 自身免疫性疾病分為幾類 其代表性疾病有哪些 3 ANA有哪些種類 它們在AID及SLE診斷中的價值如何 4 自身免疫病的發(fā)病機制是什么 5 自身免疫性疾病根據(jù)超敏反應類型可分為幾類 代表性疾病有哪些 6 常見的免疫熒光法檢測ANA的核型有哪些 有何臨床意義 7 抗ENA抗體譜的可檢測自身抗體項目包括哪些 有何臨床意義 8 SLE和RA診斷的篩查試驗和確診試驗分別是什么 9 小血管炎相關的自身抗體和自身免疫性肝病相關自身抗體檢測項目分別有哪些 10 自身免疫性疾病的實驗室診斷指標有哪些 思考題 自身免疫性疾病是自身免疫應答引起的疾病 其體內產生針對自身成份的自身抗體或自身反應性T淋巴細胞 自身抗體是自身免疫性疾病診斷的重要標志 IIF檢測的ANA結果及其熒光模型在自身免疫性疾病的臨床診斷與鑒別診斷中是重要的篩選試驗 抗dsDNA抗體是SLE患者的特征性標志抗體 抗Sm抗體是SLE的血清標志抗體 高滴度的抗RNP抗體是診斷MCTD的重要血清學依據(jù) 抗SSA Ro抗體和抗SSB La抗體與干燥綜合癥密切相關 抗Jo 1抗體常見于多發(fā)性肌炎 抗Scl 70抗體幾乎僅見于進行性系統(tǒng)性硬皮病 其他疾病相關的自身抗體還有 與小血管炎相關的抗中性粒細胞胞漿抗體 抗磷脂抗體 與RA相關的RF 抗角蛋白抗體 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體 與自身免疫性肝病相關的抗平滑肌抗體 抗線粒體抗體等 小結