白芷香豆素類成分的提取分離和鑒定

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1、白芷香豆素類成分的提取分離和鑒定 二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1. 學(xué)習(xí)用有機(jī)溶劑提取香豆素類成分的方法。 2. 學(xué)習(xí)用柱層析色譜分離香豆素類化合物的方法。 三、實(shí)驗(yàn)操作 （一） 總提取物的制備 取白芷生藥粗粉200g，用石油醚-丙酮（4:1）回流提取3次，每次250ml，分別 提取2,1,1h，合并提取液，回收溶劑至干，得總提取物月2.5g。 （二） 柱層析色譜分離 取總提取物1.5g，用5g硅膠吸附，在25x4cm的色譜柱上干法上樣，進(jìn)行低壓 柱層析色譜。 色譜條件： 吸附劑：硅膠H 20g （薄層色譜用） 洗脫劑：石油醚-丙酮 8:1， 6:1， 4:1， 3:1 各 80ml。

2、壓力： 0.5~0.7 kg/cm2 收集：5?8ml/份 用下述薄層色譜條件進(jìn)行檢識(shí)，將相同斑點(diǎn)的流分合并，用石油醚 -乙酸乙酯 （8:2）的溶劑重結(jié)晶1?2次，分別得到單體化合物，測(cè)定熔點(diǎn)。 （三） 鑒定 1. 薄層色譜 吸附劑：硅膠（薄層色譜用） 展開劑：（1）石油醚-丙酮 8:2；（2）苯-乙酸乙酯 8:2 樣品：白芷總提取物，異歐前胡素，歐前胡素 標(biāo)準(zhǔn)品：異歐前胡素，歐前胡素 顯色：紫外燈（365nm）下觀察熒光。 2. 光譜測(cè)定 1H-NMR譜：用CDCl3作為溶劑。 一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1.掌握連續(xù)回流提取法的原理和方法； 2.掌握重結(jié)晶的原理和方法 二、 實(shí)驗(yàn)原

3、理 白芷為傘型科植物白芷的干燥根。具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿的功能。 白芷中的有效成分為香豆素類化合物。用單位白芷的提取物(其中主要是香豆素 類化合物)制成的制劑對(duì)功能性頭痛、白癜風(fēng)的臨床療效較好。異歐前胡素和歐 前胡素為白芷的主要有效成分。 常見的提取方法有：溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、升華法。其中，溶劑提取 法應(yīng)用 最廣。溶劑提取法的原理：根據(jù)相似相溶原理，選擇與化合物極性相當(dāng) 的溶劑將化合物從植物組織中溶解出來，同時(shí)，由于某些化合物的增溶或助溶作 用，其極性與溶劑極性相差較大的化合物也可溶解出來。溶劑提取法一般包括浸 漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)回流提取法等，其實(shí)用反胃和

4、特點(diǎn)各 有所不同。連續(xù)回流提取法具有提取效率高、溶劑用量少等優(yōu)點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)利用連續(xù)回流提取法提取白芷中的香豆素。 三、試劑與儀器 試劑：乙醇，白芷粗粉，石油醚，乙醚，蒸餾水，丙酮。 儀器：燒杯，圓底 燒瓶，三角燒瓶，索氏提取器，電子天平，恒溫水浴，硅膠薄層板，色譜缸，球 形冷凝管，真空泵。 四、 實(shí)驗(yàn)步驟與記錄 (1) .白芷中香豆素的提取 取白芷粗粉30g，置于索氏提取器中，加入95% 的乙醇300ml, 80°C恒溫水浴回流2h,提取液減壓濃縮至糖漿狀。用丙酮溶解并 轉(zhuǎn)移至 50ml 三角燒瓶中，放置結(jié)晶，抽濾后，再重結(jié)晶，所得產(chǎn)品干燥稱重， 計(jì)算得率。 (2) .產(chǎn)品的薄層色譜

5、鑒定 色譜材料：硅膠薄層板 點(diǎn)樣：產(chǎn)品，歐前胡素和異歐前胡素標(biāo)準(zhǔn)品。 展開劑：石油醚-乙醚 1:1 顯色：置紫外光燈(365nm)下，觀察斑點(diǎn)顏色。 展開方式：預(yù)飽和后，上行展開。 五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及結(jié)果 ① .索氏提取兩個(gè)小時(shí)后得到棕色的澄明液體，真空抽提后得到深棕色的糖漿狀 濃稠液體。丙酮轉(zhuǎn)移靜置后析出淡黃色晶體，精制后得到白色晶體。 香豆素樣品中含有歐前胡素和異歐前胡素兩種物質(zhì)，并且還含有其他兩種未知物 質(zhì)，在紫外光照射下顯紫色 ② . 產(chǎn)品為無色晶體。 六、注意事項(xiàng) 抽濾操作要小心，以免倒吸。 七、問題討論 1) 連續(xù)回流提取法的原理是什么？有何特點(diǎn)？ 答

6、：原理：將裝好藥材粉末的濾紙袋中藥粉高度應(yīng)低于虹吸管頂部，自冷凝 管家溶劑入燒瓶?jī)?nèi)，水浴加熱。溶劑受熱蒸發(fā)，遇冷后變?yōu)橐后w回滴入提取器中， 接觸藥材開始進(jìn)行浸提，待溶劑液面高于虹吸管上端時(shí)，在虹吸作用下，浸出液 體流入燒瓶，溶劑在燒瓶?jī)?nèi)因受熱繼續(xù)氣化蒸發(fā)，而被提取的藥物被溶劑帶入燒 瓶?jī)?nèi)逐漸累積。 特點(diǎn)：不斷循環(huán)利用提取藥物的溶劑，可使溶劑的利用率提高 2) 對(duì)比浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法和連續(xù)回流提取法的使用范圍和 特點(diǎn) 答：浸漬法 適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的成分及含大量淀粉、樹膠、果膠、黏液質(zhì)中藥 的提取 特點(diǎn)：本法簡(jiǎn)單可行，但浸出率低，如用水注意防腐 滲漉法 適用于貴重藥材、

7、毒性藥材及高濃度制劑；也可用于有效成分含量較低的藥材 提取。 特點(diǎn)：溶劑利用率高，有效成分浸出完全，可直接收集浸出液，該法 常用不同濃度的乙醇或白酒做溶劑，故應(yīng)防止溶劑的揮發(fā)損失。 煎煮法 煎 煮法適用于有效成分能溶于水，且對(duì)濕、熱均穩(wěn)定的藥材。 特點(diǎn)：該法浸提成分范圍廣，但往往雜質(zhì)較多，給精制帶來不利，且煎出液易霉 敗變質(zhì)。 ④回流提取法 適用于對(duì)熱穩(wěn)定的成分。特點(diǎn)： 提取效率高；溶劑消 耗量大。 ⑤連續(xù)回流提取法 適用于對(duì)熱穩(wěn)定的成分。特點(diǎn)： 提取效率最高； 節(jié)省溶劑； 提取時(shí)間較長(zhǎng)。 回流提取法是用乙醇等易揮發(fā)的有機(jī)溶劑提取原料成分，將浸出液加熱蒸餾，其 中揮發(fā)性溶劑餾出后又被冷

8、卻，重復(fù)流回浸出容器中浸提原料，這樣周而復(fù)始， 直至有效成分回流提取完全的方法。 回流法提取液在蒸發(fā)鍋中受熱時(shí)間較長(zhǎng)， 故不適用于受熱易遭破壞的原料成分的浸出。 回流的目的是為了節(jié)省溶劑。乙醇是易揮發(fā)的液體，如果不采用回流提取法的話， 在提取的過程中乙醇會(huì)因?yàn)檎舭l(fā)消耗。這時(shí)候就需要不斷地補(bǔ)充乙醇的量，不僅 操作繁瑣而且浪費(fèi)?；亓魈崛〉暮锰幘褪强梢允挂掖颊羝淠笤倩氐綗?jī)?nèi)達(dá) 到反復(fù)循環(huán)的作用。 在回流的過程中，植物中能溶解在乙醇中的成分就會(huì)跑到乙醇中（包括你要的產(chǎn) 品）。其實(shí)跟煎中藥是一個(gè)道理。 至于你要的產(chǎn)品很簡(jiǎn)單，只要回流提取完畢之后，回收乙醇提取液，濾過，然后 減壓蒸餾至干，然后再進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化得到產(chǎn)物。