白芷香豆素類成分的提取分離和鑒定

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1、白芷香豆素類成分的提取分離和鑒定 二、實驗目的 1. 學習用有機溶劑提取香豆素類成分的方法。 2. 學習用柱層析色譜分離香豆素類化合物的方法。 三、實驗操作 （一） 總提取物的制備 取白芷生藥粗粉200g，用石油醚-丙酮（4:1）回流提取3次，每次250ml，分別 提取2,1,1h，合并提取液，回收溶劑至干，得總提取物月2.5g。 （二） 柱層析色譜分離 取總提取物1.5g，用5g硅膠吸附，在25x4cm的色譜柱上干法上樣，進行低壓 柱層析色譜。 色譜條件： 吸附劑：硅膠H 20g （薄層色譜用） 洗脫劑：石油醚-丙酮 8:1， 6:1， 4:1， 3:1 各 80ml。

2、壓力： 0.5~0.7 kg/cm2 收集：5?8ml/份 用下述薄層色譜條件進行檢識，將相同斑點的流分合并，用石油醚 -乙酸乙酯 （8:2）的溶劑重結晶1?2次，分別得到單體化合物，測定熔點。 （三） 鑒定 1. 薄層色譜 吸附劑：硅膠（薄層色譜用） 展開劑：（1）石油醚-丙酮 8:2；（2）苯-乙酸乙酯 8:2 樣品：白芷總提取物，異歐前胡素，歐前胡素 標準品：異歐前胡素，歐前胡素 顯色：紫外燈（365nm）下觀察熒光。 2. 光譜測定 1H-NMR譜：用CDCl3作為溶劑。 一、 實驗目的 1.掌握連續(xù)回流提取法的原理和方法； 2.掌握重結晶的原理和方法 二、 實驗原

3、理 白芷為傘型科植物白芷的干燥根。具有散風除濕、通竅止痛、消腫排膿的功能。 白芷中的有效成分為香豆素類化合物。用單位白芷的提取物(其中主要是香豆素 類化合物)制成的制劑對功能性頭痛、白癜風的臨床療效較好。異歐前胡素和歐 前胡素為白芷的主要有效成分。 常見的提取方法有：溶劑提取法、水蒸氣蒸餾法、升華法。其中，溶劑提取 法應用 最廣。溶劑提取法的原理：根據(jù)相似相溶原理，選擇與化合物極性相當 的溶劑將化合物從植物組織中溶解出來，同時，由于某些化合物的增溶或助溶作 用，其極性與溶劑極性相差較大的化合物也可溶解出來。溶劑提取法一般包括浸 漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)回流提取法等，其實用反胃和

4、特點各 有所不同。連續(xù)回流提取法具有提取效率高、溶劑用量少等優(yōu)點。 本實驗利用連續(xù)回流提取法提取白芷中的香豆素。 三、試劑與儀器 試劑：乙醇，白芷粗粉，石油醚，乙醚，蒸餾水，丙酮。 儀器：燒杯，圓底 燒瓶，三角燒瓶，索氏提取器，電子天平，恒溫水浴，硅膠薄層板，色譜缸，球 形冷凝管，真空泵。 四、 實驗步驟與記錄 (1) .白芷中香豆素的提取 取白芷粗粉30g，置于索氏提取器中，加入95% 的乙醇300ml, 80°C恒溫水浴回流2h,提取液減壓濃縮至糖漿狀。用丙酮溶解并 轉移至 50ml 三角燒瓶中，放置結晶，抽濾后，再重結晶，所得產品干燥稱重， 計算得率。 (2) .產品的薄層色譜

5、鑒定 色譜材料：硅膠薄層板 點樣：產品，歐前胡素和異歐前胡素標準品。 展開劑：石油醚-乙醚 1:1 顯色：置紫外光燈(365nm)下，觀察斑點顏色。 展開方式：預飽和后，上行展開。 五、實驗數(shù)據(jù)處理及結果 ① .索氏提取兩個小時后得到棕色的澄明液體，真空抽提后得到深棕色的糖漿狀 濃稠液體。丙酮轉移靜置后析出淡黃色晶體，精制后得到白色晶體。 香豆素樣品中含有歐前胡素和異歐前胡素兩種物質，并且還含有其他兩種未知物 質，在紫外光照射下顯紫色 ② . 產品為無色晶體。 六、注意事項 抽濾操作要小心，以免倒吸。 七、問題討論 1) 連續(xù)回流提取法的原理是什么？有何特點？ 答

6、：原理：將裝好藥材粉末的濾紙袋中藥粉高度應低于虹吸管頂部，自冷凝 管家溶劑入燒瓶內，水浴加熱。溶劑受熱蒸發(fā)，遇冷后變?yōu)橐后w回滴入提取器中， 接觸藥材開始進行浸提，待溶劑液面高于虹吸管上端時，在虹吸作用下，浸出液 體流入燒瓶，溶劑在燒瓶內因受熱繼續(xù)氣化蒸發(fā)，而被提取的藥物被溶劑帶入燒 瓶內逐漸累積。 特點：不斷循環(huán)利用提取藥物的溶劑，可使溶劑的利用率提高 2) 對比浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法和連續(xù)回流提取法的使用范圍和 特點 答：浸漬法 適用于對熱不穩(wěn)定的成分及含大量淀粉、樹膠、果膠、黏液質中藥 的提取 特點：本法簡單可行，但浸出率低，如用水注意防腐 滲漉法 適用于貴重藥材、

7、毒性藥材及高濃度制劑；也可用于有效成分含量較低的藥材 提取。 特點：溶劑利用率高，有效成分浸出完全，可直接收集浸出液，該法 常用不同濃度的乙醇或白酒做溶劑，故應防止溶劑的揮發(fā)損失。 煎煮法 煎 煮法適用于有效成分能溶于水，且對濕、熱均穩(wěn)定的藥材。 特點：該法浸提成分范圍廣，但往往雜質較多，給精制帶來不利，且煎出液易霉 敗變質。 ④回流提取法 適用于對熱穩(wěn)定的成分。特點： 提取效率高；溶劑消 耗量大。 ⑤連續(xù)回流提取法 適用于對熱穩(wěn)定的成分。特點： 提取效率最高； 節(jié)省溶劑； 提取時間較長。 回流提取法是用乙醇等易揮發(fā)的有機溶劑提取原料成分，將浸出液加熱蒸餾，其 中揮發(fā)性溶劑餾出后又被冷

8、卻，重復流回浸出容器中浸提原料，這樣周而復始， 直至有效成分回流提取完全的方法。 回流法提取液在蒸發(fā)鍋中受熱時間較長， 故不適用于受熱易遭破壞的原料成分的浸出。 回流的目的是為了節(jié)省溶劑。乙醇是易揮發(fā)的液體，如果不采用回流提取法的話， 在提取的過程中乙醇會因為蒸發(fā)消耗。這時候就需要不斷地補充乙醇的量，不僅 操作繁瑣而且浪費?；亓魈崛〉暮锰幘褪强梢允挂掖颊羝淠笤倩氐綗績冗_ 到反復循環(huán)的作用。 在回流的過程中，植物中能溶解在乙醇中的成分就會跑到乙醇中（包括你要的產 品）。其實跟煎中藥是一個道理。 至于你要的產品很簡單，只要回流提取完畢之后，回收乙醇提取液，濾過，然后 減壓蒸餾至干，然后再進行進一步的分離純化得到產物。