反芻動物糞中阿克醇濃度測定方法編制說明

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1、《反芻動物糞中阿克醇濃度測定方法》編制說明 一、工作簡況 ⒈ 任務來源：任務來源：原內(nèi)蒙古質監(jiān)局《關于下達2018年第二批內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標準制修訂項目計劃的通知》（內(nèi)質監(jiān)標函〔2018〕154號） ⒉ 起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院 ⒊ 起草人：孫海洲、張春華、李勝利、桑丹、張崇志、金鹿、珊丹、凌樹禮、任曉萍、伶俐。 二、制定標準的目的和意義 隨著全球氣候變暖形勢的日益嚴峻,人們越來越關注溫室氣體的排放問題。溫室氣體的排放問題已成為全球關注的焦點，研究降低反芻動物甲烷排放的技術措施，成為畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關鍵。目前測定甲烷排放量的技術主要有：六氟化硫（SF6）示蹤法、呼吸代謝

2、箱技術、體外產(chǎn)氣法、CO2示蹤技術、模型化方法、微氣象測定技術、生物指示物法、呼吸代謝箱技術等，但現(xiàn)有方法存在著技術設備復雜等不足，開發(fā)簡便快捷的測定反芻動物內(nèi)源甲烷排放量的技術，對于準確測定反芻動物內(nèi)源甲烷排放量、篩選有效的減排技術措施具有重要意義。本項目團隊前期通過測定反芻動物糞中古細菌膜脂成分阿克醇（archaeol）濃度，建立了阿克醇與動物甲烷產(chǎn)量的相關關系。因此，通過糞中阿克醇含量的測定可以很好預測反芻動物內(nèi)源甲烷產(chǎn)量。為了提高生產(chǎn)實際中測定反芻動物內(nèi)源甲烷排放量的準確性，由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院動物營養(yǎng)與飼料研究所制定和起草了“反芻動物糞中阿克醇濃度測定方法”標準，為更加便捷和準

3、確反映溫室氣體的排放問題提供指導，對畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供可靠依據(jù)。 三、主要起草過程 1.標準的制定過程 本標準由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院的科研工作人員，在執(zhí)行內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學院青年創(chuàng)新基金“內(nèi)蒙古白絨山羊糞中阿克醇濃度、內(nèi)源甲烷排放量及瘤胃內(nèi)產(chǎn)甲烷菌總數(shù)間相關性研究”（2016-2018）等項目的過程中，通過采集反芻動物糞樣烘干等前處理制備好，在大量查閱國內(nèi)外相關文獻和已有的前期工作的基礎之上，使用熱電DSQ單四級桿氣相色譜質譜聯(lián)用分析儀，利用六氟化硫（SF6）示蹤法和呼吸面罩測定了奶牛、絨山羊和細毛羊的甲烷產(chǎn)量，并同時采集了實驗動物相應的糞便，進行了各動物糞便中阿克醇濃度的測定，最終

4、建立了各自物種甲烷產(chǎn)量與糞便中阿克醇濃度的回歸公式。在實驗過程中通過對測定方法不斷優(yōu)化，最終制定出“反芻動物糞中阿克醇濃度測定方法”標準。 2. 工作過程 2018年4月開始查閱國內(nèi)外相關文獻，與本實驗方法進行對照，2018年6月份到2019年9月期間通過長時間的摸索份采集內(nèi)蒙古地區(qū)奶牛、絨山羊和細毛羊三種主要反芻動物，根據(jù)實施方案的具體要求，開展以下幾方面的研究工作：一是組織實驗室相關人員對采集的樣本進行阿克醇含量的測定；二是依據(jù)測定結果來判斷該方法的可重復性和準確度的高低；三是將測得的結果與國外相關研究結果和方法進行比較。本研究中建立起的關于反芻動物糞中阿克醇濃度的測定方法，是反映瘤胃

5、中產(chǎn)甲烷古細菌數(shù)量的直接指標，與個體甲烷排放量存在直接關系，本技術標準可以為草食家畜低碳減排技術和日糧高效利用提供一定的理論依據(jù)。 四、標準編制原則和依據(jù) （一）標準編制原則 本標準嚴格按照GB/T1.1-2009標準化工作導則第一部分標準的結構和編寫規(guī)則進行編寫的。在制定本標準的過程中，汲取國內(nèi)外同類標準先進生產(chǎn)技術及編制的先進經(jīng)驗和方法，力求以實事求是的原則使本標準具有較強的科學性、先進性、可靠性和可操作性。 （二）主要技術內(nèi)容確定的依據(jù) 在進行大量試驗研究的基礎上，結合國外反芻動物內(nèi)源甲烷排放量的測定方法，對實驗室的設備、化學試劑的純度規(guī)格、測定方法及操作規(guī)程，都做了具體要求。

6、 五、技術規(guī)范的編寫說明 為了確保起草好本標準，工作人員首先確定了本標準中所涉及的技術內(nèi)容不僅具有科學性、先進性、實用性，而且要更具有精確性和可操作性。因此在編寫內(nèi)容的安排上選用氣質聯(lián)用分析儀作為阿克醇含量的測定裝置，并充分考慮了測定的準確性，選用總脂的提取、去除極性頭基團和分餾脂質等步驟進行分離純化。該方法的建立可為反芻動物糞中阿克醇濃度測定的準確性測定提供技術保障，這正是編寫本標準需要預期達到的目的。 本標準以多年實驗研究工作為基礎并借鑒了國內(nèi)外測定反芻動物糞中阿克醇濃度含量方法的實用技術和先進成果編制而成，在具體技術操作方面以廣大專業(yè)科研測試者的工作人員為主體，技術部門輔助協(xié)作共同

7、實施。 六、標準主要內(nèi)容的說明 本標準的主要內(nèi)容由三個部分組成，即1.范圍；2.名詞術語解釋；3. 反芻動物糞中阿克醇濃度的測定方法，下面重點予以說明。 1． 對范圍的描述 本標準規(guī)定了反芻動物糞中阿克醇濃度的測定方法。本標準適用于奶牛、綿羊、山羊等反芻動物糞中阿克醇濃度的測定。 2． 對名詞術語解釋的描述 名詞及術語的解釋主要針對阿克醇的解釋，目的是讓測試的工作人員對阿克醇概念有一個正確的認識和了解。 3． 對反芻動物糞中阿克醇濃度的測定方法的描述 本標準中主要規(guī)定了反芻動物糞中阿克醇濃度的測定方法。 七、 貫徹實施標準的要求及措施 本標準在經(jīng)相關部門批準后，建議作為推薦

8、性標準發(fā)布實施?！皹藴省痹趫?zhí)行的過程中還需要不斷的完善和健全。 八、 專家意見采納情況 本標準在撰寫完成后，送給相關行業(yè)專家征求意見。征求意見后，按照專家意見進行了修改完善。英文標題修改為“Test method of for archaeol in ruminant”，將“內(nèi)蒙古自治區(qū)質量技術監(jiān)督局”已改為“內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局”，將“阿克醇（2,3-diphytanyl-O-sn-glycerol，1,2-雙植烷酸甘油）為產(chǎn)甲烷古細菌膜脂的基本結構，C20和C40的植烷醇與甘油通過醚鍵結合，是一種具有前景的產(chǎn)甲烷菌豐度的替代標記物?！币迅臑椤鞍⒖舜迹?,3-diphytanyl

9、-O-sn-glycerol，1,2-雙植烷酸甘油）為反芻動物瘤胃中產(chǎn)甲烷菌膜脂質的基本結構，通過測定糞中阿克醇含量即可測算甲烷產(chǎn)量。已刪除3.3 相對相差 Relative Difference條款。4.修改為試劑和材料，4.1,4.2 條款修改為：“如無特別說明，所用試劑均為色譜純試劑，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水”。已刪除條款號4.1,4.2。緩沖液、甲醇和氯仿按4:10:5的體積比配制而成的方法已標明。5.1已修改為5.1氣相色譜質譜聯(lián)用儀，配有電子轟擊源（EI源）。已刪除5.9條款。6測定步驟已改為6 樣品處理，采用6.1條款內(nèi)容。6.2 以后的條款單獨為7測定步驟條款。封面ICS 65.020.30、B 40已修改。按照標準編寫的規(guī)范要求已修改書寫格式。