反芻動(dòng)物飼料降解率測(cè)定技術(shù)規(guī)程

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1、反芻動(dòng)物飼料瘤胃降解率的測(cè)定-瘤胃尼龍袋法 技術(shù)規(guī)程 Regulation for Determination of Rumen Degradability of Feeds for Ruminants — Rumen nylon bag method 1主題內(nèi)容與適用范圍 1.1 主題內(nèi)容 本規(guī)程規(guī)定了采用瘤胃尼龍袋法測(cè)定各種反芻動(dòng)物飼料主要營(yíng)養(yǎng)成分瘤胃降解率的試 驗(yàn)條件、試驗(yàn)方法、結(jié)果計(jì)算和結(jié)果表示。 1.2 適用范圍 1.2.1 本規(guī)程適用于一切理化性質(zhì)符合采用瘤胃尼龍袋法測(cè)定其主要營(yíng)養(yǎng)成分瘤胃降解率的 反芻動(dòng)物飼料。 1.2.2 適用于本規(guī)程測(cè)定瘤胃降解率的飼料營(yíng)養(yǎng)成

2、分主要包括：干物質(zhì)、有機(jī)物、粗蛋白、 中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維。 1.2.3 本規(guī)程1.2.2中未包括的適用于采用瘤胃尼龍袋法測(cè)定的飼料其他營(yíng)養(yǎng)成分和非營(yíng)養(yǎng) 目標(biāo)成分的瘤胃降解率的測(cè)定可參照本規(guī)程的相關(guān)條款進(jìn)行。 1.2.4 本規(guī)程1.2.1中未包括的適用于采用瘤胃尼龍袋法測(cè)定的飼料類似物中營(yíng)養(yǎng)成分和非 營(yíng)養(yǎng)目標(biāo)成分的瘤胃降解率的測(cè)定可參照本規(guī)程的相關(guān)條款進(jìn)行。 1.2.5 下列飼料和飼料類似物不適用于本規(guī)程瘤胃降解率的測(cè)定： (1)水溶性超過(guò)5 %的飼料和飼料類似物。 (2)顆粒直徑過(guò)小或 45 Pm篩孔篩下物超過(guò) 5%的飼料和飼料類似物。 (3)理化特性不適用于本方法的其他飼

3、料和飼料類似物。 1.2.6 某些飼料或飼料類似物，如高含量的維生素和微量元素制品或預(yù)混料，微生態(tài)制劑和 藥物等化學(xué)制劑，有毒有害物質(zhì)含量過(guò)高的飼料或飼料類似物質(zhì)，在本規(guī)程所規(guī)定的 裝樣量情況下足以導(dǎo)致試驗(yàn)動(dòng)物瘤胃功能及其他生理機(jī)能異常，此類飼料和飼料類似 物不適用于直接采用本規(guī)程測(cè)定其目標(biāo)成分的瘤胃降解率。但可根據(jù)其特性采取適當(dāng) 降低裝樣量的方法進(jìn)行測(cè)定。 2規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款，通過(guò)本規(guī)程的引用而成為本規(guī)程的條款。 凡是注明日期的引用文件， 其隨后所有的修改字 (不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本規(guī)程，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本 規(guī)程達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最

4、新版本。 凡是不注明日期的引用文件， 其 最新版本適用于本規(guī)程。 GB6435-86 飼料中水分含量的測(cè)定 GB/T6438-2007 飼料中有機(jī)物含量的測(cè)定 GB/T6432-1994 飼料中粗蛋白含量的測(cè)定 GB/T20805-2006 飼料中中性洗滌纖維含量的測(cè)定 GB/T20805-2006 飼料中酸性洗滌纖維含量的測(cè)定 3 術(shù)語(yǔ) 3.1 瘤胃實(shí)時(shí)降解率( Instantaneous rumen degradability ) 被測(cè)飼料在瘤胃中停留某一定時(shí)間某成分被降解的部分占該成分原含量的百分比稱該 飼料該成分在該時(shí)間點(diǎn)的實(shí)時(shí)降解率，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示。 3.2

5、瘤胃食糜外流速率( Outflow rate of rumen digesta ) 指單位時(shí)間內(nèi)從瘤胃中流出的食糜重量占瘤胃內(nèi)食糜重量的百分比，用“ %/h ”表示， 是表示飼料在瘤胃內(nèi)停留時(shí)間的重要指標(biāo)。 3.3 瘤胃有效降解率( Effective rumen degradability ) 不同性質(zhì)的飼料在瘤胃內(nèi)實(shí)際停留的時(shí)間不同， 根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)的實(shí)時(shí)降解率， 結(jié)合實(shí) 際飼喂條件下瘤胃食糜外流速率計(jì)算而得的降解率稱瘤胃有效降解率， 表示被測(cè)飼料在實(shí)際 飼喂條件下的瘤胃降解程度，是配合反芻動(dòng)物日糧時(shí)實(shí)際使用的降解率，又稱動(dòng)態(tài)降解率。 用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示。 3.4 飼料類似物

6、( Feed-like materials ) 指根據(jù)飼料的分類與定義未被界定為飼料的、 但可通過(guò)采食方式進(jìn)入反芻動(dòng)物瘤胃的物 質(zhì)。 此類物質(zhì)中， 有些具有某種營(yíng)養(yǎng)功能或非營(yíng)養(yǎng)生理調(diào)控功能， 但其可否作為飼料在反芻 動(dòng)物生產(chǎn)中使用需要進(jìn)一步研究； 有些雖然具有一定營(yíng)養(yǎng)或生理功能， 但含有有毒有害成分， 其在反芻動(dòng)物生產(chǎn)中的使用方法與限量需要進(jìn)一步研究。 在對(duì)此類物質(zhì)的研究中有時(shí)需要測(cè) 定其中所含某種成分的瘤胃降解率。 3.5 非營(yíng)養(yǎng)目標(biāo)成分 目標(biāo)成分指所要測(cè)定的成分。 目標(biāo)成分可以是粗蛋白、 中性洗滌纖維等營(yíng)養(yǎng)成分， 也可 以是棉酚、黃曲霉毒素等非營(yíng)養(yǎng)成分。 3.6 培養(yǎng)時(shí)間(

7、 Incubation time ) 指裝有待測(cè)樣品的尼龍袋在瘤胃內(nèi)的停留時(shí)間。 4 試驗(yàn)條件 4.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)動(dòng)物為成年普通?；虺赡昃d羊。 數(shù)量至少 4 頭以上。 要求品種相同，年齡、生理狀 態(tài)、生產(chǎn)性能相近，發(fā)育正常，健康狀況良好。試驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)安裝有永久性瘤胃痿管，痿管內(nèi) 徑大于40 mm。安裝瘤胃痿管手術(shù)后 20天以上，已恢復(fù)正常生理狀態(tài)。 除特殊試驗(yàn)要求外， 一般不用水牛、耗牛和瘤牛及其雜交后代作為試驗(yàn)動(dòng)物， 也不用山 羊（包括絨山羊、奶山羊、肉用山羊等）及其雜交后代作為試驗(yàn)動(dòng)物。 4.2 試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理 4.2.1 動(dòng)物日糧 4.2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物采用常規(guī)

8、牛（羊）飼料原料，卞據(jù)相應(yīng)飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制日糧，按 1.3倍維持水 平飼養(yǎng)，日糧精粗比為 4:6。 4.2.1.2 日糧中不可添加任何抗生素、生長(zhǎng)促進(jìn)劑、微生物和微生態(tài)制劑。也不可添加任何 諸如寡糖、小肽、有機(jī)酸等瘤胃功能和環(huán)境調(diào)控劑及干擾瘤胃正常發(fā)酵機(jī)能的物質(zhì)。 4.2.2 飼養(yǎng)管理 4.2.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物按該品種動(dòng)物常規(guī)程序飼養(yǎng)管理，每天飼喂 2?3次，自由飲水。 4.2.2.2 測(cè)定前預(yù)飼至少 15天。 4.2.2.3 預(yù)飼期和測(cè)定過(guò)程中不能更換日糧，不能對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行免疫、治療及實(shí)施其他可 能干擾瘤胃消化機(jī)能的任何措施。 4.3 試驗(yàn)材料 4.3.1 尼龍袋 4.3.1.

9、1 選用孔徑為50 Mm的尼龍布，制成長(zhǎng)X寬為 8 cm X 12 cm的尼龍袋，袋底部?jī)山浅? 鈍圓形，以免樣本殘留。 4.3.1.2 尼龍袋用細(xì)滌綸線雙線縫合。針孔用在瘤胃內(nèi)不易溶解或脫落的膠粘劑彌合。散邊 用電烙鐵燙平或用酒精燈烤焦，以防止尼龍布脫絲，尼龍線脫落。 4.3.1.3 新制作的尼龍袋用不易在瘤胃中褪色的墨水編號(hào)。用前放入瘤胃內(nèi) 72 h,取出、洗 凈、65 c烘干后方可使用。 4.3.2 半軟塑料管 4.3.2.1 半軟塑料管的作用是固定尼龍袋，并保證裝有待測(cè)樣品的尼龍袋始終沉浸于瘤胃食 糜中。 4.3.2.2 半軟塑料管的直徑應(yīng)介于 0.5?0.8 cm之間，羊

10、用的細(xì)一些，牛用的粗一些。長(zhǎng)度羊 用 25 cm ,牛用 50 cm。 4.3.2.3 在塑料管的一端距頂端 1?2 cm處向內(nèi)劃透一長(zhǎng) 3 cm的夾縫，用于固定尼龍袋。在 塑料管的另一端距頂端 1?2 cm處打一直徑約0.5cm的孔，系一條結(jié)實(shí)的尼龍線， 用于將半軟塑料管固定于瘤胃痿管蓋上。 4.3.2.4 也可以采用其它方法固定尼龍袋，但所采用的方法必須保證尼龍袋始終沉浸于瘤胃 食糜中。 5 試驗(yàn)方法 5.1 待測(cè)樣品的準(zhǔn)備 將待測(cè)樣品 3 mm 篩孔粉碎，置于樣品瓶?jī)?nèi)，清潔干燥處保存?zhèn)錅y(cè)。 5.2 稱樣與裝袋 5.2.1 將尼龍袋、飼料樣品置于真空干燥箱或鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)

11、65℃下恒重。 5.2.2 用分析天平稱取尼龍袋重量，然后采用適當(dāng)工具將經(jīng)稱重的待測(cè)樣品小心放入尼龍袋 底部，注意袋口處切勿沾染樣品。 精飼料樣品每個(gè)袋 4g 左右，粗飼料樣品每個(gè)袋 2g 左右。 尼龍袋和待測(cè)樣品均精確至 0.0001 克。每個(gè)待測(cè)樣品裝 48 個(gè)尼龍袋。 5.2.3 對(duì)于某些待測(cè)樣品，每個(gè)尼龍袋的樣品量可根據(jù)其特性靈活調(diào)整。 5.3 將尼龍袋固定于半軟塑料管上 分別將每?jī)蓚€(gè)裝有待測(cè)樣品的尼龍袋口交叉夾于一根半軟塑料管的夾縫中， 用橡皮筋纏 繞固定，確保其不滲漏、不脫落。 5.4 尼龍袋的放置 在早晨飼喂前1 h,打開(kāi)試驗(yàn)動(dòng)物的瘤胃痿管蓋，借助木棒（或其他適

12、宜工具）將固定 尼龍袋的半軟塑料管連同尼龍袋一起送入瘤胃腹囊食糜中。 用塑料管上端的尼龍線將半軟塑 料管固定于瘺管蓋上。 每頭 （只） 試驗(yàn)動(dòng)物放置 7 根半軟塑料管， 計(jì) 14 個(gè)尼龍袋。 4 頭（只） 試驗(yàn)動(dòng)物共放置 28 根半軟塑料管，計(jì) 56 個(gè)尼龍袋。 5.5 培養(yǎng)時(shí)間 5.5.1 精飼料的培養(yǎng)時(shí)間為：2, 4, 8, 16, 24, 36和48 h。粗飼料的培養(yǎng)時(shí)間為： 4, 8, 16, 24， 36 ， 48 和 72h。 5.5.2 也可根據(jù)待測(cè)樣品的降解特性適當(dāng)增加培養(yǎng)的時(shí)間點(diǎn)，如 1h， 12h 等。 5.6 尼龍袋的取出 將裝有待測(cè)樣品的尼龍袋放入試驗(yàn)

13、動(dòng)物的瘤胃后開(kāi)始記錄培養(yǎng)時(shí)間， 每個(gè)培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)從 每頭（只）試驗(yàn)動(dòng)物瘤胃中各取出一根管（連同上面所系的 2 個(gè)尼龍袋） ，直至所有塑料管 （尼龍袋）全部取出為止。 5.7 尼龍袋的沖洗 將取出的尼龍袋浸泡在冰水中，并立即用自來(lái)水沖洗，在沖洗過(guò)程中可用手輕輕擠壓， 直至水清為止。在沖洗過(guò)程中嚴(yán)格防止尼龍袋中的殘余物隨水逃逸。 5 5.8尼龍袋的烘干 將沖洗過(guò)的尼龍袋（連同之中的殘余物）置于真空干燥箱或鼓風(fēng)干燥箱內(nèi) 65c下恒重。 用分析天平稱重，精確至 0.0001克。 5.9樣品與培養(yǎng)殘余物目標(biāo)成分含量的分析 分別將各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)尼龍袋中的殘余物完全轉(zhuǎn)移出來(lái)。 采用相應(yīng)

14、的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 所規(guī)定的方法分別測(cè)定裝袋樣品中和培養(yǎng)后殘余物中各目標(biāo)成分 （如干物質(zhì)、蛋白質(zhì)、中性 洗滌纖維等）的含量，并統(tǒng)一折算為 65c下的含量。 5.10樣品空白試驗(yàn) 某些細(xì)小的樣本顆?？赡懿唤?jīng)瘤胃降解就迅速通過(guò)尼龍袋孔逃逸， 此部分實(shí)際上并未真 正參加瘤胃的降解過(guò)程， 因而應(yīng)從裝袋樣品中扣除。 這部分未經(jīng)瘤胃降解就直接從尼龍袋中 逃逸的樣品可通過(guò)空白試驗(yàn)進(jìn)行校正，即在進(jìn)行上述操作的同時(shí)，按步驟 5.2和5.3的操作 另裝2個(gè)尼龍袋，但不將其放入瘤胃內(nèi)，直接對(duì)其按步驟 5.7、5.8和5.9進(jìn)行處理。 6結(jié)果計(jì)算 6.1裝袋樣品量的校正 6.1.1裝袋樣品逃逸率的

15、計(jì)算 采用下式計(jì)算裝袋樣品干物質(zhì)逃逸率: 裝袋樣品逃逸率（%） 空白試驗(yàn)裝袋樣品干物 質(zhì)重（g）—空白試驗(yàn)袋中殘余 空白試驗(yàn)裝袋樣品干物 質(zhì)重（g） 物重（g） -100% 6.1.2校正裝袋樣品量的計(jì)算 采用下式計(jì)算校正裝袋樣品量： 校正裝袋樣品量（g）=實(shí)際裝袋樣品量（g） x （ 1—樣品逃逸率（%）） 6.2目標(biāo)成分降解量的計(jì)算 采用下式計(jì)算樣品各目標(biāo)成分各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的降解量： 某目標(biāo)成分某培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的降解量（ g）=[校正裝袋樣品量（g） X空白試驗(yàn)殘余物 中某目標(biāo)成分的含量（％） ]-[某培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)殘余物的重量（g） x某培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)殘余 物中某目標(biāo)成分的含量

16、（％） ] 6.3目標(biāo)成分實(shí)時(shí)降解率的計(jì)算 采用如下公式計(jì)算樣品各目標(biāo)成分某培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的實(shí)時(shí)降解率: 某目標(biāo)成分某時(shí)間點(diǎn)的 實(shí)時(shí)降解率（％） 某目標(biāo)成分某時(shí)間點(diǎn)的 降解量（g） 一校正裝袋樣品量（g）X空白試驗(yàn)殘余物中某目 標(biāo)成分的含量（％） 100% 7 6.4 降解參數(shù)的計(jì)算 飼料中某成分在瘤胃中的實(shí)時(shí)降解率符合指數(shù)曲線： P

17、= a + b（ 1 － e--ct ） 式中： P 為 t 時(shí)刻被測(cè)樣品某目標(biāo)成分的實(shí)時(shí)瘤胃降解率， % ； a 為被測(cè)樣品某目標(biāo)成分的快速降解部分， % ； b 為被測(cè)樣品某目標(biāo)成分的慢速降解部分， % ； c 為 b 部分的降解速率， %/h； t 為飼料在瘤胃內(nèi)停留的時(shí)間， h。 利用各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)實(shí)時(shí)降解率的數(shù)據(jù)（ P 和 t ） ，采用最小二乘法，或統(tǒng)計(jì)軟件中的非線 性回歸程序，或飼料瘤胃降解參數(shù)計(jì)算軟件，計(jì)算式中 a、 b 和 c 值。 6.5 有效降解率的計(jì)算 利用 6.4 的計(jì)算結(jié)果（ a、 b 、 c 值）采用下式計(jì)算待測(cè)飼料目標(biāo)成分的有效降解率： P =

18、 a + bc / （ c+k） 式中： P 為待測(cè)樣品某目標(biāo)成分的有效降解率， % ； a 為待測(cè)樣品某目標(biāo)成分的快速降解部分， % b 為待測(cè)樣品某目標(biāo)成分的慢速降解部分， % ； c 為 b 部分的降解速率， %/h； k 為待測(cè)樣品某目標(biāo)成分的瘤胃外流速率， %/h 。 式中的 k 值可按本規(guī)程的附錄 《反芻動(dòng)物飼料瘤胃外流速率的測(cè)定》 中所規(guī)定的方法測(cè) 定得到。 由于 k 值的測(cè)定比較復(fù)雜， 因此在無(wú)測(cè)定條件時(shí)可根據(jù)被測(cè)飼料的性質(zhì)和相關(guān)文獻(xiàn)資料 設(shè)定 k 值。但設(shè)定的 k 值必須符合實(shí)際情況，有理有據(jù)。 7 結(jié)果表示 試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)包括各目標(biāo)成分在各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的實(shí)時(shí)

19、降解率、降解常數(shù) a 、 b、 c 值、食糜 外流速度 k 值和有效降解率。 試驗(yàn)結(jié)果的表示應(yīng)精確到小數(shù)點(diǎn)后兩位有效數(shù)字。 在試驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的種類、 品種、 數(shù)量等情況加以說(shuō)明。 對(duì) k 值的獲取方法加 以說(shuō)明。 附錄 反芻動(dòng)物飼料瘤胃外流速率的測(cè)定－鉻標(biāo)記法 1 原理 利用鉻在動(dòng)物消化道內(nèi)基本不被消化的特性， 將待測(cè)飼料樣品與重鉻酸鉀按一定比例均 勻混合， 并使二者良好結(jié)合， 借此將待測(cè)飼料樣品用鉻標(biāo)記。 將用鉻標(biāo)記的飼料樣品定量飼 喂給試驗(yàn)動(dòng)物， 在規(guī)定的不同時(shí)間點(diǎn)收集試驗(yàn)動(dòng)物排出的糞便， 并測(cè)定糞便中鉻的含量， 得 到待測(cè)飼料樣品的排出量與時(shí)間之間的關(guān)系曲線。

20、 采用適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)模型， 計(jì)算出待測(cè)飼料樣 品在瘤胃內(nèi)的實(shí)際停留時(shí)間或瘤胃外流速率。 2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理 除瘤胃瘺管為非必須外，其他要求與飼料瘤胃降解率測(cè)定技術(shù)規(guī)程 4.1 和 4.2 中的要求 基本相同。在條件允許時(shí)，建議使用測(cè)定飼料瘤胃降解率的試驗(yàn)動(dòng)物測(cè)定瘤胃的外流速率。 3 鉻標(biāo)記飼料的制備 3.1 銘標(biāo)記飼料中銘用量占待測(cè)飼料干物質(zhì)的 4%?14%。 3.2 稱取相當(dāng)于以上鉻用量的重鉻酸鉀，溶于溫水中。 3.3 將溶解后的重鉻酸鉀溶液倒入裝有待測(cè)飼料的搪瓷盤(pán)內(nèi)，攪拌均勻至稠粥狀，加蓋，置 于恒溫干燥箱內(nèi)， 100 ℃加熱 24 h。 3.4 將烘干的銘標(biāo)記飼料放入

21、底部裝有細(xì)篩網(wǎng)（孔徑 236 ^m）的桶中，用自來(lái)水沖洗至水 澄清。 3.5 將沖洗后的鉻標(biāo)記飼料放入塑料盆中，加入適量蒸餾水，將飼料懸浮于水中。加入適量 抗壞血酸，攪拌均勻，使 pH 下降至 4.0，靜置 12 h。 3.6 用水將鉻標(biāo)記飼料沖洗至水清亮，恒溫干燥箱內(nèi) 65 ℃烘干。 3.7 鉻標(biāo)記飼料的穩(wěn)定性以 24 h 的瘤胃干物質(zhì)消失率低于 10 %為標(biāo)準(zhǔn)。 4 測(cè)定步驟 4.1 將銘標(biāo)記飼料于晨飼時(shí)與精料混合一起喂給試驗(yàn)動(dòng)物。牛的喂量為 300 g/頭；羊的喂量 為50 g/頭。 3.2 于飼喂后 4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36、 40、 44、 48、 54、 60、 72、 84、 96、 108、 120 h用直腸采樣法采集糞樣。 3.3 將采集的糞樣在恒溫干燥箱內(nèi) 65 ℃烘干。 1.0 mm 篩粉碎，置于樣品瓶中保存?zhèn)錅y(cè)。 3.4 用原子吸收分光光度計(jì)法或比色法測(cè)定糞樣中鉻的含量。 3.5 結(jié)果計(jì)算 應(yīng)用下式計(jì)算待測(cè)飼料的瘤胃外流速率： f =c0 e mg/kg； 式中： c0 為糞中鉻的初始濃度（糞中鉻濃度最高時(shí)鉻濃度） f 為糞中鉻達(dá)到高峰后的濃度， mg/kg ； t 為采樣時(shí)間點(diǎn)， h ； k 為待測(cè)飼料的瘤胃外流速率， %/h 。 10