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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,第二節(jié),基因工程的原理和技術(shù),溫故而知新,限制性核酸內(nèi)切酶,DNA連接酶,質(zhì)粒,載體,基因工程操作的工具,剪切,拼接,導(dǎo)入,表達(dá),（一）獲得目的基因,（二）形成重組DNA分子,（三）將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞,（四）目的基因的檢測和表達(dá),基因工程的原理和技術(shù),1、篩選含有目的基因的受體細(xì)胞,2、目的基因的表達(dá),步驟一 獲得目的基因,人工合成(反轉(zhuǎn)錄法),利用PCR技術(shù)擴(kuò)增,序列：,從基因文庫獲得,未知序列：,(DNA library),聚合酶鏈?zhǔn)椒错?Polymerase Chain Reaction),
2、氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。,引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。,在酶的作用下，不斷延伸，合成雙鏈DNA。,屢次循環(huán)，獲得大量雙鏈DNA分子。,PCR,技術(shù)擴(kuò)增,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,目的基因的mRNA,逆轉(zhuǎn)錄,單鏈DNA,合成,雙鏈DNA（目的基因）,蛋白質(zhì)氨基酸序列,推測,mRNA的核苷酸序列,推測,結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列,化學(xué)合成,目的基因,人工合成法,逆轉(zhuǎn)錄法,根據(jù)氨基酸序列直接合成DNA,鳥槍法：散彈射擊法,供體細(xì)胞DNA,限制酶,許多DNA片段,載入,運(yùn)載體,導(dǎo)入,受體細(xì)胞,擴(kuò)增,產(chǎn)生特定性狀,分離,目的基因,從基因文庫獲得,步驟二 形成重組DNA分子,可能存在情況：目的基因
3、載體,步驟三 將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞,1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,1.基因工程中常用的受體細(xì)胞有哪些？,2.導(dǎo)入過程如何？,大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞,借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑,受體細(xì)胞：細(xì)菌,CaCl,2,細(xì)胞壁的通透性增大,重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞,目的基因隨受體細(xì)胞的繁殖而復(fù)制,步驟四 篩選含有目的基因的受體,利用標(biāo)記基因來篩選：,通過檢測標(biāo)記基因的有無，或利用標(biāo)記基因表達(dá)的性狀來判斷目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。,對(duì)目的基因進(jìn)行分子水平的檢測：,通過合成標(biāo)準(zhǔn)探針，利用DNA雜交技術(shù)來進(jìn)行目的基因的檢測。,DNA與DNA雜交，DNA與RNA雜家,步驟五 目的基因的表達(dá),1、通過鑒定目的基因的產(chǎn)物蛋白來確定目的基因的表達(dá)。,抗原與抗體雜交,2、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，受體細(xì)胞或受體細(xì)胞發(fā)育來的生物體會(huì)表現(xiàn)特定的性狀，通過性狀的觀察來確定目的基因的表達(dá)。,引入病原體,目的基因的檢測與鑒定,檢查是否成功,檢測,鑒定,檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA,上是否插入了目的基因,檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等,方法,方法,方法,DNA與DNA分子雜交,DNA與RNA分子雜交,抗原抗體雜交,
基因工程的原理和技術(shù)
