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1、,,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,,單擊此處編輯母版文本樣式,,第二級(jí),,第三級(jí),,第四級(jí),,第五級(jí),,,*,,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,,單擊此處編輯母版文本樣式,,第二級(jí),,第三級(jí),,第四級(jí),,第五級(jí),,第,3,章,消毒滅菌與病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物,安全,,D,isinfection,,,,sterilization,and,,,biosafety,of,pathogen,Lab.,,1.5 teaching hrs,,,消毒與滅菌,,早在一百多年前，在巴斯德時(shí)代之前，人們把醫(yī)院看成病人臨終的場(chǎng)所，在他們進(jìn)醫(yī)院之前，幾乎沒有一個(gè)不是先向親友作最后告別的。,,1860,年，英國(guó)外科醫(yī)生,李斯特
2、,敢于接受巴斯德的新思想,------,病原菌是引起傷口化膿和各種傳染病的罪魁禍?zhǔn)住Ｌ岢觥耙浦箓诨?，首先就要消滅一切可能進(jìn)入傷口的各種病原菌”，創(chuàng)立了外科無菌技術(shù)。,,①為防止疾病的傳播，對(duì)傳染病患者的排泄物和實(shí)驗(yàn)廢棄的培養(yǎng)物亦須進(jìn)行滅菌或消毒處理。,,②從預(yù)防感染出發(fā)，醫(yī)務(wù)工作者必須建立“處處有菌”和無菌觀念，嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作。,,消毒滅菌常用術(shù)語,,,滅菌,(,sterilization,),：,殺滅物體上所有微生物的方法,.,包括病原微生物和非病原微生物,,,繁殖體和芽胞。,,,消毒,(,disinfection,),：,殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法,.,并不一定能殺死含芽
3、胞的細(xì)菌或非病原微生物,,,防腐,(,antisepsis,),：,防止或抑制,體外,細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。,,,清潔,(,cleaning,),：,通過除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)量的過程。,,,無菌,(,asepsis,),：,不存在,活菌的意思，滅菌的結(jié)果。,,,無菌操作,:,防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其它物品的操作技術(shù),.,,第一節(jié) 消毒滅菌的方法,一、物理消毒滅菌法,,（一）熱力滅菌法,,（二）輻射,radiation,殺菌,,（三）濾過,filtration,除菌,,（四）干燥與低溫抑菌法,,,二、化學(xué)消毒滅菌法,,（一）,熱力滅菌法,,高溫殺滅細(xì)菌,干熱滅菌法,,干熱的殺菌作用通過脫水
4、干燥和大分子變性而實(shí)現(xiàn)。,,一般細(xì)菌繁殖體在干燥狀態(tài)下，,80,～,100 ℃,經(jīng),1 h,即可被殺死；,,芽胞則需,160,～,170 ℃,經(jīng),2 h,才會(huì)死亡。,,焚燒,----,最徹底的滅菌方法,燒灼,----,直接用火焰滅菌方法,干烤,----,加熱,160-180℃ 2,小時(shí),,濕熱滅菌法,,殺菌機(jī)制：在水分子存在的情況下更易于使菌體蛋白凝固，熱力穿透性更強(qiáng)。,,較低的溫度（,62 ℃ 30,分鐘）殺滅致病菌,高壓蒸汽滅菌法,最有效的滅菌方法,121.3 ℃ 15~30,分鐘,煮沸消毒法,水煮,100 ℃ 5,分鐘,(,繁殖體,)~2,小時(shí),(,芽胞,),流動(dòng)蒸汽消毒法,水蒸汽,10
5、0 ℃ 15~30,分鐘,(,繁殖體,),間歇滅菌法,反復(fù)多次流動(dòng)蒸汽間歇加熱滅菌,巴氏消毒法,,濕熱滅菌與干熱滅菌的比較,同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好,1,、,濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固,2,、濕熱的穿透力比干熱大,3,、,濕熱的蒸汽有潛熱,原因,,二、輻射,radiation,殺菌法,波長(zhǎng),240~280nm,的紫外線具有殺菌作用,1,，,紫外線,干擾,DNA,的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄,殺菌機(jī)理：,紫外線穿透力較弱,特 點(diǎn)：,空氣消毒,,手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn),室,,不耐熱物品的表面消毒,應(yīng)用范圍：,,2,，電離輻射,包括高速電子、,X,射線和,γ,射線,殺菌機(jī)理：,產(chǎn)生游離
6、基,,,破壞,DNA,。,應(yīng)用范圍：,一次性醫(yī)用塑料制品的消毒,食品的消毒,不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分,,應(yīng)用放射性同位素,γ,源或,β,射線加速器發(fā)生的高能量電子束進(jìn)行滅菌。,,三、,濾過,filtration,除菌法,是利用物理阻留的方法除去液體或空氣中的微生物，以達(dá)到無菌目的。,濾菌器,(,filter,):,,含有,微細(xì)小孔,<0.22,微米,,,只允許液體或氣體通過,,,而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過,,適用范圍,血清、毒素、抗生素,,以及空氣等的除菌,,四、低溫與干燥,冷凍真空干燥,(,lyophilization,),法：,在低溫狀態(tài)下真空抽去水分,.,用途,:,保存菌種,,二、化學(xué)消毒滅
7、菌法,使用化學(xué)藥物，來消滅手術(shù)人員手臂皮膚、病人手術(shù)區(qū)皮膚、某些器械物品的,細(xì)菌,，但通常只能達(dá)到相對(duì)無菌的效果，故亦稱消毒。,,,大多對(duì)人體組織有害,,,只能,外用或環(huán)境消毒,.,,,,,,據(jù)作用機(jī)制主要有以下幾類：,,使菌體蛋白質(zhì)變性或凝固,to denature and coagulate bacterial proteins：,酚類,(,石炭酸、來蘇、洗必泰,);,醇類,(70%-75%,乙醇,);,,重金屬鹽類,(,紅汞,);,烷化劑,(,甲醛,),殺菌力強(qiáng)，但毒性大，有致癌性,.,,,干擾細(xì)菌的酶系統(tǒng)和代謝,,to interfere enzymatic system and me
8、tabolism of bacterium:,氧化劑,(,過氧化氫、過氧乙酸、高錳酸鉀,);,與細(xì)菌酶結(jié)合使之失去活性。對(duì)細(xì)菌繁殖體和芽胞,,,真菌,,,病毒都有殺滅作用。,,,損傷菌細(xì)胞膜,,to damage cell membrane of bacterium,表面活性劑,;,增加菌細(xì)胞表面張力，并增加其通透性使細(xì)菌破裂。,,,,,,常用消毒劑種類,類別,作用機(jī)制,常用種類,酚類,蛋白變性，細(xì)胞膜損傷,石炭酸,醇類,蛋白變性,乙醇,氧化劑,氧化、蛋白沉淀,高錳酸甲,重金屬鹽,氧化、蛋白酶變性,紅汞、硫柳汞,氧化劑,氧化、蛋白沉淀,過氧乙酸、碘酒,表面活性劑,蛋白變性，細(xì)胞膜損傷,新潔而滅
9、,染料,干擾氧化、抑制繁殖,龍膽紫,,第二節(jié) 消毒滅菌的運(yùn)用,(,一）,高危器械物品,:,,用時(shí)需進(jìn)入無菌組織的物品。所有這些物品都應(yīng)該滅菌。,,(,二）,中危器械物品,:,,用時(shí)不進(jìn)入無菌組織但接觸黏膜的器械。采用消毒即可。,,(,三）,低危器械物品,:,,,只接觸未損傷皮膚,但,不進(jìn)入無菌組織和不接觸黏膜的物品。一般用后清洗、消毒即可。,,(,四）,快速周轉(zhuǎn)的醫(yī)療器械,:,,,一,、,醫(yī)療器械物品的消毒滅菌,,,二,,,室內(nèi)空氣消毒滅菌,,,,1,.,物理消毒法,,①紫外線照射（,1.5,W,/m,3,，1h,）最常用,；,②濾過除菌,：,空氣通過孔徑小于,0.2,μm,的高效過濾裝置以
10、除去細(xì)菌和帶菌塵埃,。,,,2．化學(xué)消毒法包括化學(xué)消毒劑噴霧和熏蒸,：,①過氧乙酸噴霧、熏蒸,；,②過氧化氫噴霧,；,③二氧化氯溶液,噴灑；,④中草藥點(diǎn)燃煙熏。,,,三,,,手和皮膚的消毒,,,用肥皂和流動(dòng)水經(jīng)常并正確洗手,.,病原微生物污染時(shí)應(yīng)用消毒劑消毒。,,四,，黏膜,的消毒,,,,五,，病人排泄物與分泌物的消毒滅菌,,,,六,，病人污染物品的消毒,,,,七，飲水的消毒,,,,八,，環(huán)境的消毒,,,種類,使用濃度,用途,石炭酸,3%~5%,地面、器具表面,、,皮膚消毒,乙醇,3%~5%,皮膚、體溫計(jì)消毒,高錳酸甲,3%~5%,皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒,紅汞,3%~5%,皮膚、粘膜、小創(chuàng)
11、傷消毒,硫柳汞,3%~5%,皮膚消毒、手術(shù)部位消毒,過氧乙酸,3%~5%,塑料、玻璃器材消毒,碘酒,3%~5%,皮膚消毒,新潔而滅,3%~5%,手術(shù),洗手、浸泡手術(shù)器械,龍膽紫,3%~5%,淺表,創(chuàng)傷消毒,各種消毒劑的應(yīng)用,,第三節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素,一,、,微生物的種類,,二,、,微生物的物理狀態(tài),,三,、,微生物的數(shù)量,,四,、,消毒劑性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間,,五,、,溫度,,六,、,酸堿度,,七,、,有機(jī)物,,濃度,種類,消毒劑,作用時(shí)間,有機(jī)物,溫度,環(huán)境,酸鹼度,種類,細(xì)菌,菌齡,影響消毒劑作用的因素,,第四節(jié) 病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全,,生物安全（,biosafety,）是
12、生物技術(shù)安全,（,safety of biotechnology,）,的簡(jiǎn)稱。,,,,,病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全,:,指在從事病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室中避免病原微生物對(duì)工作人員和相關(guān)人員的危害，對(duì)環(huán)境的污染和對(duì)公眾的傷害，為了保證試驗(yàn)研究的科學(xué)性還要保護(hù)被試驗(yàn)因子免受污染。,,,,,,病原微生物所致的安全問題，如病原微生物實(shí)驗(yàn)室的安全隱患、生物武器、生物恐怖、重大傳染病的暴發(fā)流行等，也是人類社會(huì)所面臨的最現(xiàn)實(shí)的生物安全問題。,,,September 11, 2001,,,,操作者,實(shí)驗(yàn)室生物安全,環(huán)境,操作對(duì)象,,病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全的核心是,防擴(kuò)散和防感染,。,,一,、病原微生物的分類
13、,國(guó)家根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對(duì)個(gè)體或者群體的危害程度，將病原微生物分為,四類,：,,第一類病原微生物,，,是指能夠引起人類或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。,,,第二類病原微生物,，,是指能夠引起人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物。,,,第三類病原微生物,，,是指能夠引起人或動(dòng)物疾病，但一般情況,下對(duì)人、動(dòng)物或環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。,,,第四類,病原微生物,，,是指在通常情況下不會(huì)引起人或動(dòng)物疾病的微生物。如小鼠白血病病
14、毒等。,,,第一類、第二類統(tǒng)稱為高致病性病原微生物,。,,,,二、病原微生物實(shí)驗(yàn)室的分級(jí),根據(jù)實(shí)驗(yàn)室對(duì)病原微生物的生物安全防護(hù)水平（,bio-safety level, BSL),及實(shí)驗(yàn)室生物安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)室分為,BSL-1,、,BSL-2,、,BSL-3,、,BSL-4,四級(jí)。,,級(jí)別,處理對(duì)象,一級(jí),對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境危害較低，不具有對(duì)健康成人、動(dòng)植物致病的致病因子,。,,二級(jí),對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險(xiǎn)的致病因子，對(duì)健康成人、動(dòng)植物和環(huán)境不會(huì)造成嚴(yán)重危害，,具,有有效的預(yù)防和治療措施,。,,三級(jí),對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有高度危險(xiǎn)性，主要通過氣溶膠使人類傳染上嚴(yán)重
15、的甚至是致命的疾病，或?qū)?dòng)植物和環(huán)境具有高度危害的致病因子。通常有預(yù)防治療措施,。,,四級(jí),,對(duì)人體、動(dòng)植物或環(huán)境具有高度危險(xiǎn)性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明或未知的危險(xiǎn)的致病因子。沒有預(yù)防治療措施,。,,,一、二級(jí)實(shí)驗(yàn)室,不得,從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)。,,,,從事高致病性病原微生物相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)應(yīng)當(dāng)有２名以上的工作人員共同進(jìn)行。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的同一個(gè)獨(dú)立安全區(qū)域內(nèi)，只能同時(shí)從事一種高致病性病原微生物的相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。應(yīng)有健全安全保衛(wèi)制度 。,,,,,實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)掌握實(shí)驗(yàn)室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護(hù)知識(shí)和實(shí)際操作技能。應(yīng)有符合要求的防護(hù)用品，應(yīng)建立健康檔案；進(jìn)行預(yù)防接種。,,,,
16、,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有科學(xué)、嚴(yán)格的管理制度，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備、材料等進(jìn)行檢查、維護(hù)和更新，應(yīng)對(duì)廢水、廢氣以及其他廢物進(jìn)行合理處置，防止環(huán)境污染。,,,三、實(shí)驗(yàn)室感染的控制以及監(jiān)督和法律責(zé)任,,,,實(shí)驗(yàn)室,感染,控制工作,包括定期檢查實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)、病原微生物菌（毒）種和樣本保存與使用、安全操作、實(shí)驗(yàn)室排放的廢水和廢氣以及其他廢物處置等實(shí)施情況。,,,,,實(shí)驗(yàn)室發(fā)生,高致病性病原微生物,泄漏,時(shí)，預(yù)防、控制措施,包括,：,①封閉被病原微生物污染的實(shí)驗(yàn)室或可能造成病原微生物擴(kuò)散的場(chǎng)所；②開展流行病學(xué)調(diào)查；③對(duì)病人進(jìn)行隔離治療，對(duì)相關(guān)人員進(jìn)行醫(yī)學(xué)檢查；④對(duì)密切接觸者進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察；⑤進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)消毒；⑥對(duì)
17、染疫或者疑似染疫的動(dòng)物采取隔離、撲殺等措施。,,,,,監(jiān)督的主要內(nèi)容,:,監(jiān)督病原微生物實(shí)驗(yàn)室執(zhí)行國(guó)家有關(guān)法律、行政法規(guī)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和要求的記錄、檔案及報(bào)告的情況。法律責(zé)任核心,:,是承擔(dān)造成傳染病傳播、流行或者其他嚴(yán)重后果的法律責(zé)任。,,,生物安全,,,思考題,1.,名詞解釋：消毒、滅菌、無菌、防腐、無菌操作、生物安全,,2.,簡(jiǎn)述紫外線殺菌的作用機(jī)制和注意事項(xiàng),,3.,濕熱滅菌有哪些方法,?,各有何用途,?,,4.,在溫度和時(shí)間相同的情況下，為什么濕熱滅菌法的效果比干熱法好,?,,5.,常用消毒劑種類,?,簡(jiǎn)述化學(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制。,,6.,簡(jiǎn)述病原微生物的分類及病原微生物實(shí)驗(yàn)室的分級(jí)？,,7.,當(dāng)從事病原生物學(xué)安全實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)，應(yīng)考慮哪些與生物安全相關(guān)的問題？,,
Chapter 03 Disinfection, sterilization and biosafety of pathogen Lab.
